BY-0748 J774A.1小鼠單核巨噬細(xì)胞系
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- 公司名稱(chēng) 上海乾思生物科技有限公司
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- 型號(hào) BY-0748
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- 更新時(shí)間 2025/7/10 12:46:00
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J774A.1小鼠單核巨噬細(xì)胞系
J774A.1小鼠單核巨噬細(xì)胞系源自 BALB/c 小鼠的腹水瘤，是通過(guò)克隆化培養(yǎng)建立的連續(xù)細(xì)胞系，因保留了單核巨噬細(xì)胞的典型功能特征，在炎癥反應(yīng)、病原體清除、免疫調(diào)節(jié)及吞噬機(jī)制研究中被廣泛應(yīng)用。
該細(xì)胞系具有典型的單核巨噬細(xì)胞形態(tài)與表型特征。顯微鏡下，細(xì)胞呈不規(guī)則形或阿米巴樣，以貼壁生長(zhǎng)為主，部分細(xì)胞呈半懸浮狀態(tài)，細(xì)胞體積較大，直徑約 15-25μm，核質(zhì)比適中，細(xì)胞核呈腎形或馬蹄形，染色質(zhì)疏松，可見(jiàn) 1-2 個(gè)明顯核仁，胞質(zhì)豐富，含大量嗜天青顆粒和空泡，這些形態(tài)特征與體內(nèi)成熟巨噬細(xì)胞高度一致。免疫表型分析顯示，細(xì)胞高表達(dá)巨噬細(xì)胞特異性標(biāo)志物 CD11b、F4/80 和 CD68，同時(shí)表達(dá)模式識(shí)別受體如 Toll 樣受體 4（TLR4）和清道夫受體 A（SR-A），這些受體是巨噬細(xì)胞識(shí)別病原體和異物的關(guān)鍵分子基礎(chǔ)，使其能對(duì)脂多糖（LPS）等病原體相關(guān)分子模式（PAMPs）產(chǎn)生強(qiáng)烈應(yīng)答。
體外培養(yǎng)體系中，J774A.1 細(xì)胞展現(xiàn)出穩(wěn)定的生長(zhǎng)性能與功能活性。最適培養(yǎng)條件為含 10% 胎牛血清的 DMEM 培養(yǎng)基，在 37℃、5% CO?環(huán)境下，傳代周期約 48 小時(shí)，對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞活力可達(dá) 90% 以上。其顯著特點(diǎn)是具有強(qiáng)貼壁能力，傳代時(shí)需用細(xì)胞解離液處理，處理時(shí)間較其他細(xì)胞長(zhǎng)（約 5-8 分鐘），以確保細(xì)胞wan全脫落。該細(xì)胞系對(duì)營(yíng)養(yǎng)條件要求較低，在血清濃度降至 5% 時(shí)仍能保持正常增殖，且能在無(wú)血清培養(yǎng)基中短期存活（3-5 天）。凍存復(fù)蘇性能優(yōu)異，液氮凍存后復(fù)蘇存活率超過(guò) 85%，連續(xù)傳代 50 次后，形態(tài)與功能特性無(wú)明顯改變，保證了實(shí)驗(yàn)的穩(wěn)定性與可重復(fù)性。
J774A.1 細(xì)胞的核心價(jià)值體現(xiàn)在其強(qiáng)大的吞噬功能與炎癥應(yīng)答能力。作為專(zhuān)職吞噬細(xì)胞，其可高效吞噬多種顆粒物質(zhì)，如乳膠珠、細(xì)菌、凋亡細(xì)胞等，在熒光標(biāo)記乳膠珠吞噬實(shí)驗(yàn)中，30 分鐘內(nèi)吞噬率可達(dá) 60% 以上，2 小時(shí)達(dá) 90%，吞噬過(guò)程依賴(lài)于細(xì)胞骨架的重排，微管抑制劑秋水仙素可使其吞噬率下降 70%，證實(shí)微管在吞噬泡形成中的關(guān)鍵作用。在病原體清除實(shí)驗(yàn)中，該細(xì)胞對(duì)大腸桿菌等具有強(qiáng)效吞噬與殺傷能力，吞噬后 1 小時(shí)內(nèi)細(xì)菌存活率下降 80%，同時(shí)伴隨活性氧（ROS）和一氧化氮（NO）的大量產(chǎn)生，這些效應(yīng)分子是其殺菌的重要機(jī)制。
在炎癥反應(yīng)機(jī)制研究中，該細(xì)胞系是探索炎癥信號(hào)通路的理想模型。經(jīng) LPS 刺激后，J774A.1 細(xì)胞可迅速激活 NF-κB 和 MAPK 信號(hào)通路，表現(xiàn)為 IκBα 磷酸化降解和 p38、ERK1/2 磷酸化水平升高，6 小時(shí)內(nèi)促炎細(xì)胞因子如 TNF-α、IL-6 和 IL-1β 的 mRNA 水平上調(diào) 50-100 倍，蛋白分泌量達(dá) μg 級(jí)，這種強(qiáng)烈的炎癥應(yīng)答模擬了體內(nèi)巨噬細(xì)胞對(duì)細(xì)菌感染的反應(yīng)過(guò)程。研究發(fā)現(xiàn)，TLR4 是介導(dǎo) LPS 應(yīng)答的關(guān)鍵受體，敲除 TLR4 后，LPS 誘導(dǎo)的細(xì)胞因子分泌減少 90% 以上，證實(shí)其在革蘭氏陰性菌感染引發(fā)炎癥中的核心作用。
在免疫調(diào)節(jié)研究中，J774A.1 細(xì)胞可通過(guò)分泌細(xì)胞因子調(diào)節(jié)其他免疫細(xì)胞的功能。與 T 淋巴細(xì)胞共培養(yǎng)時(shí)，其分泌的 IL-12 可促進(jìn) Th1 細(xì)胞分化，使 IFN-γ 分泌增加 5 倍；而在 IL-4 刺激下，該細(xì)胞可極化為 M2 型巨噬細(xì)胞，高表達(dá) IL-10 和 TGF-β，抑制 T 細(xì)胞增殖，這種表型可塑性使其能模擬體內(nèi)巨噬細(xì)胞的雙向免疫調(diào)節(jié)作用 —— 既啟動(dòng)抗感染免疫，又參與免疫耐受維持。此外，其可通過(guò)表達(dá) PD-L1 與 T 細(xì)胞表面 PD-1 結(jié)合，誘導(dǎo) T 細(xì)胞耗竭，這種負(fù)向調(diào)節(jié)機(jī)制在腫瘤微環(huán)境研究中具有重要意義。
在病原體感染機(jī)制研究中，J774A.1 細(xì)胞是多種胞內(nèi)病原體的易感宿主。其對(duì)李斯特菌、結(jié)核分枝桿菌等具有高度易感性，細(xì)菌可在細(xì)胞內(nèi)存活并復(fù)制，如李斯特菌感染后 6 小時(shí)，胞內(nèi)細(xì)菌數(shù)量增加 10 倍以上，且能逃逸吞噬體進(jìn)入胞質(zhì)繁殖，這種感染模型為研究胞內(nèi)菌的致病機(jī)制提供了理想平臺(tái)。通過(guò)分析細(xì)胞對(duì)病原體的識(shí)別、吞噬及殺傷過(guò)程，可揭示宿主抗胞內(nèi)菌感染的免疫機(jī)制，如發(fā)現(xiàn)自噬通路可清除胞內(nèi)結(jié)核分枝桿菌，自噬抑制劑處理后，胞內(nèi)細(xì)菌存活量增加 2 倍，證實(shí)自噬在抗感染中的作用。
在藥物篩選領(lǐng)域，J774A.1 細(xì)胞是評(píng)估抗炎藥物和抗感染藥物活性的重要工具。體外實(shí)驗(yàn)顯示，非甾體抗炎藥可抑制 LPS 誘導(dǎo)的 PGE2 合成，IC50 為 10μM；而 TLR4 拮抗劑則能阻斷 LPS 引起的 NF-κB 激活，使 TNF-α 分泌減少 80%。針對(duì)巨噬細(xì)胞吞噬功能的藥物篩選中，發(fā)現(xiàn)某些天然化合物可增強(qiáng)其對(duì)腫瘤細(xì)胞的吞噬能力，吞噬率提升 40%，為腫liu治療藥物研發(fā)提供了線索。
隨著基因編輯技術(shù)的應(yīng)用，J774A.1 細(xì)胞系被賦予了更精準(zhǔn)的研究功能。通過(guò) CRISPR/Cas9 技術(shù)敲除其 NLRP3 基因，可構(gòu)建炎癥小體缺陷模型，用于驗(yàn)證 NLRP3 炎癥小體在炎癥反應(yīng)中的作用；而導(dǎo)入熒光標(biāo)記的吞噬相關(guān)蛋白（如 LC3），則可實(shí)時(shí)觀察吞噬與自噬的動(dòng)態(tài)過(guò)程，這種基因工程化細(xì)胞系進(jìn)一步拓展了其在免疫生物學(xué)和細(xì)胞生物學(xué)研究中的應(yīng)用范圍。
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