BY-1397 Marc-145XF猴胎腎細胞系
- 公司名稱 上海乾思生物科技有限公司
- 品牌 其他品牌
- 型號 BY-1397
- 產地
- 廠商性質 生產廠家
- 更新時間 2025/7/30 13:45:34
- 訪問次數 269
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供貨周期 | 現貨 |
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來源與馴化機制
形態與生長特征
功能特性
病毒敏感性:對 PRRSV 的感染效率達 95% 以上(流式細胞術檢測 N 蛋白),48 小時病毒滴度達 10?.?-10?.? TCID??/mL,與貼壁細胞相當;對 PRRSV 的美洲型、歐洲型及高致病性變異株均具有廣譜適應性,滴度差異<0.3 個數量級,優于其他猴源懸浮細胞系(如 Vero-S)。
受體表達:PRRSV 主要受體 CD163 的表達量達 1.1×10?分子 / 細胞(流式檢測),與貼壁 Marc-145 無顯著差異,為病毒入侵提供充足分子基礎。
代謝特征:葡萄糖消耗速率為 22 mg/10? cells / 天,乳酸積累速率較貼壁細胞降低 35%(僅 0.18 g/10? cells / 天),谷an酰胺利用率提升 20%,更適合高密度長時間培養,可延長病毒復制平臺期至 72 小時。
PRRSV 疫苗規模化生產
滅活疫苗生產:在 500L 攪拌式生物反應器中,Marc-145XF 細胞密度達 3×10? cells/mL,PRRSV 病毒滴度穩定在 10? TCID??/mL,單批次病毒產量達 1.5×1011 TCID??,可生產 1500 萬劑滅活疫苗,較傳統轉瓶工藝效率提升 15 倍,生產成本降低 50%。疫苗中宿主細胞蛋白殘留量<20ng / 劑,無血清培養體系避免了血清源性過敏原,使疫苗過敏反應發生率下降 40%(臨床試驗數據)。
弱毒疫苗株篩選:利用其高效病毒復制能力,可快速評估疫苗株的減毒特性與免疫原性。例如,在該細胞系中連續傳代 PRRSV 獲得的弱毒株,對仔豬的致病力下降 90%,且免疫后中和抗體效價達 1:256,保護率超 90%,為弱毒疫苗開發提供候選株。
病毒學基礎研究與高通量篩選
復制動力學研究:通過懸浮培養的均一性,精準測定 PRRSV 的復制參數:潛伏期 5-6 小時,對數生長期 12-24 小時,穩定期 24-60 小時,為優化疫苗生產的收獲時間提供數據支撐(最佳收獲點為 48-54 小時)。
抗病du藥物篩選:在 384 孔懸浮培養板中,可實現日均 1000 種化合物的高通量篩選。例如,篩選出的 PRRSV 3CL 蛋白酶抑制劑在該模型中 EC??=0.8μM,與動物實驗結果一致性達 0.94,為抗 PRRSV 藥物研發提供先導分子。
其他病毒培養拓展應用
豬圓環病毒 2 型(PCV2)共培養:可支持 PCV2 與 PRRSV 的共感染,模擬臨床混合感染場景,共感染時兩種病毒滴度與單獨感染差異<10%,為研究病毒間相互作用提供模型。
病毒樣顆粒(VLP)表達:作為桿狀病毒載體的宿主細胞,可高效表達 PRRSV S 蛋白 VLP,產量達 8μg/10? cells,純度超 95%,免疫小鼠后誘導的中和抗體效價與滅活疫苗相當,為亞單位疫苗研發提供低成本生產平臺。
基礎培養方案
培養基:無血清 CDM 培養基(含 5μg/mL 重組胰島素、3μg/mL 轉鐵蛋白),添加 4mM L - 谷an酰胺,pH 維持在 7.2-7.4,需每日監測葡萄糖濃度(維持>1.5g/L)與溶氧(30%-50%)。
傳代流程:取對數生長期細胞懸液,1000rpm 離心 5 分鐘,棄上清后用新鮮培養基重懸,按初始密度 8×10? cells/mL 接種至搖瓶(轉速 110rpm)或生物反應器,避免細胞團過大(>150μm)導致營養不均。
凍存保護:取密度 3×10? cells/mL 的細胞,加入含 10% DMSO 的無血清凍存液,程序降溫后液氮保存,復蘇時 37℃水浴快速解凍,直接接種至預熱培養基(無需離心洗滌),24 小時后細胞存活率>90%。
病毒培養與放大工藝
PRRSV 接種:細胞密度達 2×10? cells/mL 時,按 MOI=0.001 加入病毒液,維持攪拌速率 120rpm,溶氧 50%,感染后 36 小時補加 30% 體積的新鮮培養基(含 2× 谷an酰胺),48-54 小時收獲病毒液,通過 0.45μm 濾膜澄清。
生物反應器控制:采用 pH-stat 補料策略,當 pH>7.3 時自動補加 500g/L 葡萄糖溶液,維持代謝穩定,可使病毒滴度提升 15%-20%。
優勢:
工業化生產能力:懸浮培養可通過生物反應器實現大規模擴增,單批次產量滿足千wan級疫苗需求,適合 PRRS 疫情暴發時的應急生產。
安全性提升:無血清培養體系減少動物源成分污染風險,符合 WHO 生物制品 GMP 標準,疫苗質量更易控制。
成本效益顯著:較貼壁培養減少 90% 的培養面積,人力成本降低 60%,且病毒單位體積產量提升 5-8 倍。
局限性:
培養基成本高:無血清 CDM 培養基價格為傳統血清培養基的 6-8 倍,初期投入較高。
技術門檻:需掌握懸浮細胞計數、生物反應器參數調控等技能,對操作人員要求嚴格。
病毒譜較窄:主要適用于 PRRSV 培養,對其他病毒(如豬瘟病毒)的支持能力有限。
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