蛋白質(zhì)變性劑是一類能使蛋白質(zhì)發(fā)生變性作用的試劑。蛋白質(zhì)變性是指當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)受物理或化學(xué)因素的影響，其分子內(nèi)部原有的結(jié)構(gòu)和性質(zhì)發(fā)生改變的過程。一般認(rèn)為蛋白質(zhì)的二級(jí)結(jié)構(gòu)和三級(jí)結(jié)構(gòu)有了改變或遭到破壞，都是變性的結(jié)果。

常見的蛋白質(zhì)變性劑有強(qiáng)酸、強(qiáng)堿、重金屬鹽、丙酮、尿素、鹽酸胍和異硫氰酸胍等。在生化實(shí)驗(yàn)中，常需要對(duì)蛋白質(zhì)進(jìn)行變性研究，一般我們常用尿素、鹽酸胍和異硫氰酸胍這三種蛋白質(zhì)變性劑。今天我們就來講講這三種蛋白質(zhì)變性劑的優(yōu)缺點(diǎn)、區(qū)別、變性機(jī)制和注意事項(xiàng)等內(nèi)容。

尿素、鹽酸胍和異硫氰酸胍的優(yōu)缺點(diǎn)：

尿素的溶解能力和變性能力相對(duì)較弱，但具有不電離、呈中性、成本低、蛋白質(zhì)復(fù)性后不會(huì)造成大量蛋白質(zhì)沉淀等優(yōu)點(diǎn)。

鹽酸胍的溶解能力和變性能力相對(duì)較強(qiáng)，但成本比尿素高、在酸性條件下易產(chǎn)生沉淀、可能對(duì)蛋白質(zhì)離子交換色譜有干擾等缺點(diǎn)。

異硫氰酸胍的溶解能力和變性能力是這三種蛋白質(zhì)變性劑中強(qiáng)的，同時(shí)也是最貴的。

尿素、鹽酸胍和異硫氰酸胍的區(qū)別：

濃度：在室溫下，4~6mol/L尿素和3~4mol/L鹽酸胍，可使球狀蛋白質(zhì)從天然狀態(tài)轉(zhuǎn)變至變性狀態(tài)的中點(diǎn)，通常增加變性劑濃度可提高變性程度，一般來說8mol/L尿素和6mol/L鹽酸胍可以使蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)變?yōu)樽冃誀顟B(tài)。不過也有一些球狀蛋白質(zhì)，甚至在8mol/L尿素和6mol/L鹽酸胍溶液中也不能變性，然而繼續(xù)提高溶液濃度，在8mol/L鹽酸胍溶液中，蛋白質(zhì)一般以無規(guī)則卷曲（變性）構(gòu)象狀態(tài)存在。

溶解度：尿素溶解能力較鹽酸胍慢而弱，鹽酸胍溶解能力較異硫氰酸胍慢而弱。尿素的溶解度為70%~90%，它在作用時(shí)間較長(zhǎng)或溫度較高時(shí)會(huì)裂解形成氰酸鹽，對(duì)重組蛋白質(zhì)的氨基進(jìn)行共價(jià)修飾；鹽酸胍溶解能力達(dá)95%以上，且溶解作用快而不造成重組蛋白質(zhì)的共價(jià)修飾。