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瑞氏染色的步驟

閱讀:7873      發布時間:2016-5-13
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瑞氏染色是目前常用而又簡單的染色方法。瑞氏染液由酸性染料伊紅和堿性染料美藍組成的復合染料,溶于甲醇 ,后解離為帶正電的美藍和帶負電的伊紅離子。瑞氏染色的步驟是什么?為了觀察細胞內部結構,識別各種細胞及異常變化,血涂片必須進行染色。血涂片的各種染色方法大多是羅氏染色法衍變而來。目前常用瑞氏染色法。

    瑞氏染色的步驟

    瑞氏染液的配制:取瑞氏染料1.0g、甲醇600ml、甘油15ml。

    I液:將全部染料放入清潔干燥的乳缽中,先加少量甲醇慢慢地研磨(少半小時),以使染料充分溶解,再加一些甲醇混勻,然后將溶解的部分倒入潔凈的棕色瓶內,乳缽內剩余的未溶解的染料,再加入少許甲醇細研,如此多次研磨,直染料全部溶解,甲醇用完為止。再加15ml甘油,密閉保存。

    說明:新鮮配制的染液偏堿,染色效果較差,經在室溫下貯存一定時間,美藍逐漸轉變為天青B后方可使用,這一過程稱染料成熟。放置時間愈久,天青愈多,染色效果也就越好。但必須蓋嚴瓶口,以免甲醇揮發或氧化成甲酸。染液中也可加中性甘油3ml,防止甲醇揮發或氧化,同時也可使血細胞染色較清晰,但我們所用的甲醇必須純凈。

    II液:又稱磷酸鹽緩沖液(PH6.4-6.8),包含磷酸二氫鉀0.3g,磷酸二氫鈉0.2g、蒸餾水加1000ml。配好后用磷酸鹽溶液校正PH,如無緩沖液可用新鮮蒸餾水代替。也可用蒸餾水代替。

    染色:

    ①血涂片自然干燥后,用蠟筆在兩端畫線,以防染色時染液外溢。隨后將玻片平置于染色架上,滴加染液3-5滴,使其蓋滿血涂片,大約1分鐘后,滴加等量或稍多的II液,用吸耳球輕輕混勻。

    ②沖洗:染色5-10分鐘用流水染液,待干。

    ③結果觀察,將干燥后的血涂片置顯微鏡下觀察。先用低倍鏡觀察血涂片,再用油鏡。

    瑞氏染色法就是用瑞氏染色液對細菌進行染色。瑞氏染色的步驟中需要注意的是沖洗時應以流水沖洗,不能先倒掉染液,以防染料沉著在血涂片上。沖洗時間不能過久,以防脫色。如血涂片上有染料顆粒沉積,可滴加甲醇,然后立即用流水沖洗。

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