三级片视频播放,精品三级片在线观看,A级性爱视频,欧美+日韩+国产+无码+小说,亲子伦XX XX熟女,秋霞最新午夜伦伦A片黑狐,韩国理伦片漂亮的保拇,一边吃奶一边做边爱完整版,欧美放荡性护士videos

您好, 歡迎來到化工儀器網

| 注冊| 產品展廳| 收藏該商鋪

17801761073

technology

首頁   >>   技術文章   >>   RIPA裂解液的原理

北京索萊寶科技有限公司

立即詢價

您提交后,專屬客服將第一時間為您服務

RIPA裂解液的原理

閱讀:5936      發布時間:2016-5-13
分享:

RIPA裂解液(RIPA Lysis Buffer)對動物細胞胞膜、胞漿、胞核成分均有較強裂解作用,RIPA裂解液裂解得到的蛋白樣品可以用于常規的Western、IP等。

RIPA裂解液的原理如下:

RIPA主要是從動物組織和動物細胞中抽取的可溶性蛋白。RIPA 組織/細胞裂解液是利用表面活性劑等來裂解細胞膜(包括核膜)。

索萊寶RIPA裂解液的使用方法

如發現RIPA有沉淀,請放室溫半小時或者常溫水浴使沉淀溶解。

根據使用量,取每1ml RIPA 加入10ul PMSF,使PMSF的終濃度為1mM。混勻備用 (PMSF現用現加)。 

1、樣品前處理: 

a)對于貼壁細胞:去除培養液,用 PBS、生理鹽水或無血清培養液洗一遍。按照 6 孔板每孔細胞量加入150-250 ul裂解液的比例加入裂解液。用槍吹打數下,使裂解液和細胞充分接觸。

b)對于懸浮細胞:離心收集細胞,用手指把細胞用力彈散。按照 6 孔板每孔細胞量加入 150-250 ul 裂解液的比例加入裂解液,再用手指輕彈以充分裂解細胞。充分裂解后應沒有明顯的細胞沉淀。如果細胞量較多,必需分裝成50-100萬細胞/管,然后再裂解。

c)對于組織樣品: 把組織剪切成細小的碎片。按照每20mg組織加入150-250 ul裂解液的比例加入裂解液。 (如果裂解不充分可以適當添加更多的裂解液,如果需要高濃度的蛋白樣品,可以適當減少裂解液的用量)。用玻璃勻漿器勻漿,直充分裂解。

2、后處理:

將裂解后的樣品10000-14000g離心3-5分鐘,取上清,即可進行后續的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。

注意事項 :

強烈型裂解液,可以提取核蛋白,但在提取核蛋白的同時,也會將基因組一并釋放出來,造成細胞裂解液粘稠,此時可以直接加入蛋白上樣緩沖液,煮沸再離心,離心后直接上樣電泳;若想測定濃度,可入加少量 SDS(1%),煮沸后離心測濃度。本系列蛋白提取試劑所提取的白由于含有去污劑,所以不適合使用Bradford蛋白濃度測定試劑盒,請選擇BCA法或者Lowry法檢測蛋白濃度。

會員登錄

請輸入賬號

請輸入密碼

=

請輸驗證碼

收藏該商鋪

標簽:
保存成功

(空格分隔,最多3個,單個標簽最多10個字符)

常用:

提示

您的留言已提交成功!我們將在第一時間回復您~
在線留言
主站蜘蛛池模板: 重庆市| 双峰县| 襄樊市| 寿宁县| 金溪县| 连江县| 洪雅县| 汝南县| 平乐县| 华安县| 克拉玛依市| 怀远县| 偏关县| 遂平县| 普兰县| 泽州县| 筠连县| 西昌市| 同仁县| 荃湾区| 乌什县| 军事| 尼玛县| 聂拉木县| 甘孜县| 凤山县| 合肥市| 衡水市| 二连浩特市| 石楼县| 松阳县| 盱眙县| 宁德市| 漳州市| 武功县| 新建县| 钟山县| 拉孜县| 武邑县| 义马市| 敦煌市|