適用于快速提取植物基因組DNA
改進的經典 CTAB 植物 DNA 抽提液內（添加多種針對植物特點的多糖、多酚去除成份）迅速裂解細胞和滅活細胞內核酸酶，氯仿抽提后通過離心清除多糖、多酚和蛋白質（根據需要，上清中還加入異丙醇離心沉淀基因組 DNA，進一步去除其它各種雜質）
CTAB植物基因組DNA快速提取試劑he-現貨

CTAB植物基因組DNA快速提取試劑he（離心柱型）

CTAB植物基因組DNA快速提取試劑he-現貨

目錄號：40114

適用范圍：

適用于快速提取植物基因組DNA

試劑盒組成、儲存、穩定性：

本試劑盒在室溫儲存 12 個月不影響使用效果。

儲存事項:

1. 裂解液PL、結合液 PQ或者抑制物去除液IR低溫時可能出現析出和沉淀，可以在 55℃水浴幾分鐘幫助重新溶解，恢復澄清透明后冷卻到室溫即可使用。

2. 避免試劑長時間暴露于空氣中產生揮發、氧化、pH 值變化，各溶液使用后應及時蓋緊蓋子。

產品介紹：

改進的經典CTAB植物DNA抽提液內（添加多種針對植物特點的多糖、多酚去除成份）迅速裂解細胞和滅活細胞內核酸酶，氯仿抽提后通過離心清除多糖、多酚和蛋白質（根據需要，上清中還加入異丙醇離心沉淀基因組 DNA，進一步去除其它各種雜質），然后基因組DNA在高離序鹽狀態下選擇性吸附于離心柱內硅基質膜，再通過一系列快速的漂洗－離心的步驟， 進一步將多糖、多酚和細胞代謝物、蛋白等雜質去除，最后低鹽的洗脫緩沖液將純凈基因組DNA從硅基質膜上洗脫。

產品特點：

1. 離心吸附柱內硅基質膜全部采用進口特制吸附膜，柱與柱之間吸附量差異極小，可重復性好。克服了國產試劑盒膜質量不穩定的弊端。

2. 不需要使用有毒的苯fen等試劑，也不需要乙醇沉淀等步驟。快速，簡捷，單個樣品操作一般可在1小時內完成。

3. 數種去多糖、多酚成份和多次柱漂洗確保高純度，OD260/OD280 典型的比值達

4. 1.7～1.9，長度可達30kb -50kb，可直接用于 PCR，Southern-blot和各種酶切反應

注意事項：

1. 所有的離心步驟均在室溫完成，使用轉速可以達到13,000rpm的傳統臺式離心機，如Eppendorf 5415C或者類似離心機。

2. 開始實驗前將需要的水浴先預熱到65℃備用。

3. 需要自備氯仿/異戊醇（體積比24：1混合）、無水乙醇和β-巰基乙chun。

4. 結合液PQ和抑制物去除液IR中含有刺激性化合物，操作時要戴乳膠手套，避免沾染皮膚、眼睛和衣服。若沾染皮膚、眼睛時，要用大量清水或者生理鹽水沖洗。

5. 不同來源的植物組織材料中提取DNA 的量會有差異，一般100mg新鮮組織典型產量可達3-25μg。

洗脫液EB不含有螯合劑EDTA，不影響下游酶切、連接等反應。也可以使用水洗脫，但應該確保pH大于7.5，pH過低影響洗脫效率。用水洗脫DNA應該保存在－20℃。DNA如果需要長期保存，可以用TE緩沖液洗脫 （10mM Tris-HCl， 1mM EDTA，pH8.0），但是EDTA可能影響下游酶切反應，使用時可以適當稀釋。    

具體產品的參數以收到產品說明書的參數為準

標準操作步驟：（實驗前請先閱讀注意事項）提示：

e 第一次使用前請先在漂洗液WB和結合液PQ中加入指ding量的無水乙醇，充分混勻，加入后請及時在方框打鉤標記已加入乙醇，以免多次加入!

e 取所需適量裂解液PL放置在 65℃預熱，使用前加入β-巰基乙chun到終濃度2%。

1. 取適量植物組織（新鮮組織100mg或干重組織30mg）在研缽中加入液氮充分碾磨成細粉。

2. 轉移細粉到一個1.5ml離心管，不要解凍，加600μl 65℃預熱的裂解液PL(確認已加入β-巰基乙chun至 2%)，劇烈渦旋振蕩混勻，用大口徑槍頭輕柔吹打幫助裂解。

（如果組織裂解困難，可根據需要加一個輕柔勻漿 10 秒的步驟幫助裂解。）

3. 65℃水浴 20-60 分鐘，在水浴過程中顛倒離心管以混合樣品數次。

（可選:如果組織干燥或者產量低，可以適當延長水浴時間。如果 RNA 殘留多，可在水浴前加入 6μl RNA 酶（20mg/ml）。）

4. 加入700μl氯仿/異戊醇（體積比 24：1混合），顛倒充分混勻幾分鐘（或者渦旋混勻），13,000rpm離心5分鐘。

（若提取的植物組織富含多糖多酚，可以在第 4 步前用等體積酚/氯仿（1：1）抽提一遍。）

5. 小心吸取上清到一個新的1.5ml離心管，注意不要吸到界面物質。

（如上清比較渾濁，則需要重復步驟4一遍，直到得到透亮上清。）

6. 較精確估算上清量，加入 1.5 倍體積結合液 PQ （請先檢查是否已加入無水乙醇!）

后立刻渦旋，充分混勻。此時可能出現沉淀，但不影響實驗結果。

7. 將上一步所得混合物（包括可能出現的沉淀）加入一個 DNA 吸附柱中，（吸附柱放入收集管中）13,000rpm離心30秒，倒掉收集管中的廢液（先加 700μl 離心，棄廢液，再加入剩余的溶液，再次離心）。

8. 加入 500μl抑制物去除液 IR，12,000rpm 離心 30 秒，棄廢液。

9. 加入700μl漂洗液 WB（請先檢查是否已加入無水乙醇!），12,000rpm離心 30秒，棄掉廢液。

10. 加入500μl漂洗液 WB，12,000rpm離心30秒，棄掉廢液。

11. 將DNA吸附柱放回空收集管中，13,000rpm離心2分鐘，盡量除去漂洗液， 以免漂洗液中殘留乙醇抑制下游反應。

12. 取出DNA吸附柱，放入一個干凈的離心管中，在吸附膜的中央加 100μl洗脫緩沖液 EB（洗脫緩沖液事先在 65-70℃水浴中預熱），室溫放置 3-5分鐘，12,000rpm離心1分鐘。將得到的溶液重新加入離心吸附柱中，室溫放置 2 分鐘，12,000rpm離心1分鐘。

（洗脫體積越大，洗脫效率越高，如果預計和需要產量高，可增大洗脫體積，如果需要DNA濃度較高，可以適當減少洗脫體積，但是最小體積不應少于 50μl，體積過小降低 DNA洗脫效率，減少DNA產量。）

13. DNA可以存放在 2-8℃，如果要長時間存放，可以放置在－20℃。

附錄（低DNA含量或者產量低樣品操作步驟）：

1. 取適量植物組織（新鮮組織400mg或干重組織200mg）在研缽中加入液氮充分碾磨成細粉。

2. 轉移細粉到一個15ml離心管，不要解凍，加入9ml 65℃預熱的裂解液PL(確認已經加入 β-巰基乙chun至 2%)，劇烈渦旋振蕩混勻，用大口徑槍頭吹打幫助裂解。

（如果組織裂解困難，可根據需要加一個輕柔勻漿 10 秒的步驟幫助裂解。）

3. 室溫放置 60分鐘，中間不時顛倒離心管以混合樣品數次。

（如果組織干燥或者產量低，可以放置在 65℃水浴。）

4. 加 4.5ml氯仿/異戊醇（體積比24：1混合），渦旋充分混勻，3,000g離心10分鐘。

5. 小心吸取上清到一個新的15ml離心管，注意不要吸到界面物質。重復一遍步驟 4。

6. 小心吸取上清到一個新的15ml離心管，估算上清量，加入0.7倍體積的異丙醇，渦旋混勻來沉淀DNA。

7. 立刻 3,000g離心20分鐘沉淀 DNA，棄上清，顛倒離心管口放在紙巾上控干殘留液體，并小心用用移液槍吸干沉淀周圍殘留液體（不要過于干燥 DNA 沉淀）。

8. 加入300μl－400μl預熱到 65℃的滅菌水，重新溶解DNA，可能需要在 65℃短暫溫育幫助溶解，期間不斷輕彈管底幫助溶解。

9. 加入1.5倍體積結合液 PQ（450μl－600μl，請先檢查是否已加入無水乙醇!）后立刻渦旋，充分混勻。此時可能出現沉淀，但不影響實驗結果。

10. 后續步驟和上面標準操作步驟7開始后wan全一樣。

CTAB植物基因組DNA快速提取試劑he-現貨