AtT-20小鼠垂體瘤細(xì)胞培養(yǎng)方法

在成功復(fù)蘇并傳代培養(yǎng)Att-20細(xì)胞后，需重點(diǎn)關(guān)注其生長狀態(tài)和培養(yǎng)環(huán)境的穩(wěn)定性。Att-20細(xì)胞貼壁生長，通常呈多邊形或梭形，若觀察到細(xì)胞形態(tài)異常或大量懸浮死亡，需排查培養(yǎng)基成分、血清質(zhì)量或污染問題。

培養(yǎng)條件優(yōu)化

1. 培養(yǎng)基選擇：高糖DMEM（含10%胎牛血清）是常用基礎(chǔ)培養(yǎng)基，但可嘗試添加1%非必需氨基酸（NEAA）或2mM L-谷氨酰胺以促進(jìn)增殖。

2. 傳代操作：細(xì)胞密度達(dá)80%-90%時需傳代，使用0.25%胰酶（含EDTA）消化1-2分鐘，輕柔吹打避免成團(tuán)。離心后按1:3至1:4比例接種至新培養(yǎng)瓶。

3. 凍存要點(diǎn)：凍存液需含10% DMSO和90%血清，程序降溫后液氮保存，避免反復(fù)凍融。

常見問題解決

- 生長緩慢：檢查血清批次活性或補(bǔ)充5 ng/mL bFGF（堿性成纖維細(xì)胞生長因子）。

- 聚集成團(tuán)：縮短消化時間或改用低濃度胰酶（0.05%）。

- 支原體污染：定期PCR檢測，必要時使用抗生素如Plasmocin處理。

應(yīng)用提示

Att-20細(xì)胞常用于激素分泌研究（如ACTH），實(shí)驗(yàn)前需確保細(xì)胞狀態(tài)穩(wěn)定，建議同步設(shè)置空白對照組。通過優(yōu)化培養(yǎng)細(xì)節(jié)，可顯著提高實(shí)驗(yàn)重復(fù)性與數(shù)據(jù)可靠性。