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單細胞測序保證了測量的準確性和穩定性
閱讀：417 發布時間：2019-4-28
單細胞測序保證了測量的準確性和穩定性
單細胞測序與普通測序不同在于普通測序所提取的RNA源于樣本中的多個細胞，所以普通測序的結果不可避免的會受到不同細胞間異質性的影響，而單細胞測序則是針對單個細胞的基因組進行測序，能夠更好地幫助我們認識細胞與細胞之間的差異。
同一組織中的細胞間都是存在異質性的，更不必提不同組織、不同系統中細胞的異質性了。這一異質性，會影響我們對細胞基因功能認知的準確性。單細胞測序能夠幫助我們了解那些難以培養的微生物的基因組功能、了解遺傳鑲嵌功能在普通生物學功能或是疾病發生中的作用、了解腫瘤內在異質性對腫瘤發展以及耐藥性的影響、重新定義細胞亞型等等。
確實相較于群體細胞測序，單細胞樣品的分離、獲取難度會大幅度增加。雖然很難，但是面對如此前沿的領域，科研人員“前仆后繼”開發出了多種方法獲得單細胞。剛開始出現的應該是“顯微鏡下人工挑選”，比較費事但不需要特殊儀器；激光顯微切割儀、流式細胞儀也常見于各大研究所的儀器中心，但是這些技術對細胞活率有一定影響，通量也不高。
隨著人們科研需求的逐漸增長，已不滿足于傳統的分離技術，因此市面上出現了基于微流體、納米孔芯片技術的高通量方法，一次能分選出至少上千單細胞。其中我們判斷基于納米孔芯片技術且帶光學組件的系統，以其能高通量挑選出“活的單細胞”、兼容各種尺寸細胞，或會是未來更看好的方向。
為了減少偏差，實驗人員在自身實驗素質提升的基礎上，可以選擇更為的移液設備，如量程合適的移液槍，或者在處理多個樣品時，使用8通道排槍替代單通道移液槍。也可以選擇更為簡便操作的文庫構建試劑盒，如單管操作、一步法完成、過程中無需純化的產品，盡量減少樣品的損失。當然，現在也流行使用自動化工作站，替代人工完成文庫構建過程中移液、孵育、純化等操作。
單細胞測序對技術要求比較高，每個環節都可能決定實驗的成敗。因此為了盡可能使大家避開“雷區”，輕松得到準確的單細胞分析結果，我們團隊特別策劃了一個單細胞測序專題：“手把手”告訴大家如何獲得想要的單細胞，如何制備高質量的單細胞轉錄組、全基因組、免疫組庫的測序文庫，如何減少實驗偏差。