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單細胞鋪板使用過程安全可靠
閱讀：501 發(fā)布時間：2019-4-30
單細胞鋪板使用過程安全可靠
單細胞鋪板可以根據(jù)熒光條件篩選，也可以不染色直接鋪板，一次性芯片，保證樣本之間*隔離；儀器體積小巧，可置于超凈臺中，96孔板分選不到1min，384孔板4min以內(nèi)，單克隆率超過95%，儀器操作簡單，無需專人操作維護。
傳統(tǒng)的細胞鋪板一般采用手動的有限稀釋法來進行，這種方法在需要的操作簡單，只需要普通的排槍就能實現(xiàn)，但是效果卻很不理想。主要體現(xiàn)在：一致性差，有效孔比例低下，費時間等。
近年來，單抗藥物的開發(fā)領(lǐng)域又被推上了一個新的高度，越來越多的公司都紛紛投入到這個熱潮當中，隨之而來的相關(guān)法規(guī)的要求也是越來越嚴格。在眾多的要求當中，對藥物來源的單克隆源性的要求嚴格，這就要求生產(chǎn)和研發(fā)的企業(yè)在細胞株開發(fā)階段做到嚴格的單克隆驗證。目前市面上已經(jīng)有幾款孔板掃描設(shè)備能夠得到認可，他們的數(shù)據(jù)可以用來作為單克隆源性的證明。
在這里我們要討論的是在驗證前的分離階段，如何快速、準確、的獲得單細胞。除了上面提到的有限稀釋法之外，昂貴的流式細胞分選儀也可以用來作為單細胞鋪板工具之一，當然流式除了操作復(fù)雜，需要專人維護之外，分選得到的細胞常常復(fù)蘇比例比較低。在流式分選中，細胞的損傷比較大。
單細胞分離儀為單細胞鋪板提供了全新解決方案。該設(shè)備采用新的微流體技術(shù)能夠?qū)崿F(xiàn)快速，，準確的細胞鋪板工作。并且分離過程輕柔，不會影響細胞的后續(xù)生長。能廣泛應(yīng)用于單抗開發(fā)中的CLD環(huán)節(jié)，以及單細胞測序等。
單細胞分離用于單細胞鋪板的原理如下：將細胞通過一次性的芯片上端加樣孔，注入到芯片腔體中。單細胞流在微流控通道中流過激光檢測區(qū)域，機器能對細胞進行識別，去除掉細胞碎片，死細胞以及狀態(tài)較差的細胞，使得落到孔板中的細胞都具有很好的活性。高速電子閥門能夠捕獲每一個活性細胞，終形成1ul體積的液滴，輕柔地落進孔板中。
整個過程對細胞的損傷可以忽略不計，所以分選得到的細胞絕大多數(shù)的細胞都能再次分裂生長。整個過程快速，一般一塊9孔板分選需要1min左右，單個細胞一個孔的比例在85%~90%，一般細胞復(fù)蘇的比例在40%~65%（復(fù)蘇比例跟細胞本身有很大關(guān)系）。