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上海淳麥生物科技有限公司

DH5α 感受態細胞 產品說明書

時間:2019-3-19閱讀:3071
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產品規格(CAT#: DL1001)

 

DH5α:                                                      100μl/支

pUC19 (control vector,10pg/μl):                   10μl

保存條件(保質期):                            -80℃(6個月) 

 

 

基因型

F- φ80 lac ZΔM15 Δ(lacZYA-arg F) U169 endA1 recA1 hsdR17(rk-,mk+) supE44λ- thi -1 gyrA96 relA1 phoA

 

 

 

產品說明

DH5α菌株是實驗室常用的感受態細胞。 缺失核酸內切酶 (endA),提高了質粒DNA的產量和質量;重組酶缺陷型 (recA)減少插入片段的同源重組概率,保證了插入DNA 的穩定性;lacZΔM15的存在使DH5α可用于藍、白斑篩選。DH5α感受態細胞經特殊工藝制作,pUC19質粒檢測轉化效率>5×10cfu/μg DNA。 

 

操作方法

 

1. DH5α感受態細胞從-80℃拿出,迅速插入冰中,5分鐘后待菌塊融化,加入目的DNA(質粒或連接產物)并用手EP管底輕輕混勻(避免用槍吸打),冰中靜置25分鐘。

2. 42℃水浴熱激45秒,迅速放回冰中并靜置2分鐘,晃動會降低轉化效率。

3. 向離心管中加入700 μl不含抗生素的無菌培養基 (2YT或LB),混勻后37℃,200 rpm復蘇60分鐘。

4. 5000 rpm離心一分鐘收菌,留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的2YT或LB培養基上。

5.將平板倒置放于37℃培養箱過夜培養。如果進行藍白斑篩選操作,將平板放37℃培養至少15小時。

 

注意事項

1. 感受態細胞在冰中緩慢融化,插入冰中8分鐘內加入目標DNA,不可在冰中放置時間過長,長時間存放會降低轉化效率。 
2. 混入質粒或連接產物時應輕柔操作。 
3. 轉化高濃度的質粒或率的連接產物可相應減少終用于涂板的菌量。

上海淳麥生物  4006815880

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