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上海淳麥生物科技有限公司

*0 感受態(tài)細(xì)胞產(chǎn)品說(shuō)明書

時(shí)間:2019-3-19閱讀:783
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產(chǎn)品規(guī)格(CAT#: DL1010)

 

*0:                                                     100μl/支

pUC19 (control vector,10pg/μl):                   10μl

保存條件(保質(zhì)期):                            -80℃(6個(gè)月) 

 

基因型

F- mcrA Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC) φ80 lacM15 ΔlacX74 recA1 araΔ139 Δ(ara-leu)7697 galgalrpsL (StrRendA1 nup

 

 

 

 

產(chǎn)品說(shuō)明

*0菌株來(lái)源于MC1061菌株,是目前實(shí)驗(yàn)室常用的感受態(tài)細(xì)胞之一,基因型與DH10B高度類似 (DH10B為galE15型,而*0為galU型)。*0生長(zhǎng)速度快 (比DH5α快,但比Mach1-T1生長(zhǎng)速度慢),10小時(shí)可見克隆,recA1和endA1的突變有利于插入DNA的穩(wěn)定和高純度質(zhì)粒DNA的提取。可用于構(gòu)建克隆,藍(lán)白斑篩選等實(shí)驗(yàn)。*0感受態(tài)細(xì)胞經(jīng)特殊工藝制作,pUC19質(zhì)粒檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率>5×108cfu/μg DNA。 

 

操作方法

1. *0感受態(tài)細(xì)胞從-80℃拿出,迅速插入冰中,5分鐘后待菌塊融化,加入目的DNA (質(zhì)粒或連接產(chǎn)物) 并用手EP管底輕輕混勻 (避免用槍吸打),冰中靜置25分鐘。

2. 42℃水浴熱激45秒,迅速放回冰上并靜置2分鐘,晃動(dòng)會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。

3. 向離心管中加入700μl不含抗生素的無(wú)菌培養(yǎng)基 (2YTLB),混勻后37℃,200 rpm復(fù)蘇60分鐘。

4. 5000rpm離心一分鐘收菌,留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的2YTLB培養(yǎng)基上。

5. 將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。如果進(jìn)行藍(lán)白斑篩選操作,將平板放37℃培養(yǎng)至少13 h

 

注意事項(xiàng)

1. 感受態(tài)細(xì)胞在冰中緩慢融化,插入冰中8分鐘內(nèi)加入目標(biāo)DNA,不可在冰中放置時(shí)間過長(zhǎng),長(zhǎng)時(shí)間存放會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。

2. 混入質(zhì)粒或連接產(chǎn)物時(shí)應(yīng)輕柔操作。

3. 轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)粒或率的連接產(chǎn)物可相應(yīng)減少終用于涂板的菌量。

 

上海淳麥生物科技有限公司 4006815880

 

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