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上海淳麥生物科技有限公司

Y187感受態細胞

時間:2019-5-13閱讀:1216
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Y187酵母感受態細胞基因型:

MATα, ura3-52, his3-200, ade 2-101,  trp 1-901, leu 2-3, 112, gal4Δ, met, gal80Δ, URA3 : : GAL1UAS-GAL1TATA-lacZ, MEL1


Y187酵母感受態細胞簡要說明:
Y187菌株是Clontech公司開發的GAL4系統酵母單雜,雙雜實驗用菌株,MATα型,可直接轉化質粒或與MATa型酵母菌株(Y2HGoldAH109等)通過mating操作進行篩庫試驗。
Transformation  marker: trp1, leu2,報告基因為:lacZ, MEL1
Y187 -GAL4酵母雙雜系統需要兩種質粒配套使用:PGBKT7PGADT7
質粒PGBKT7的篩選標志為TRP1,用于表達DNA-BD(來自酵母轉錄因子GAL4N1~ 174位氨基酸)與目標蛋白(Bait)的融合蛋白;
Y187酵母感受態細胞操作說明:

  1.  取100 μl冰上融化的Y187感受態細胞,依次加入預冷的目的質粒2-5ug,Carrier DNA(95-1005min,快速冰浴,重復一次)10 ul PEG/LiAc  500ul并吸打幾次混勻,30度水浴30 分鐘(15 min時翻轉6-8次混勻)。
  2.  將管放42度水浴15min  (7.5 min時翻轉6-8次混勻)。 

3. 5000 rpm 離心 40s 棄上清,ddH2O 400ul 重懸,離心 30s 棄上清。
4. ddH2O 50ul重懸,涂板,29℃培養48-96h。

上海淳麥生物科技有限公司  感受態細胞培養專家  4006815880

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