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上海淳麥生物科技有限公司

EHA105感受態(tài)細(xì)胞

時(shí)間:2019-6-23閱讀:996
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EHA105農(nóng)桿菌感受態(tài)細(xì)胞


EHA105 Chemically Competent Cell

產(chǎn)品編碼:                       保存條件: -80℃   
產(chǎn)品規(guī)格:

EHA10520×100μl
pCAMBIA2301control vector10ng/ul     10ul

                

EHA105農(nóng)桿菌感受態(tài)細(xì)胞基因型:
C58 (rif R) Ti pEHA105 (pTiBo542DT-DNA) (strepR) Succinamopine

EHA105農(nóng)桿菌感受態(tài)細(xì)胞簡要說明:
 EHA105菌株由EHA105菌株改造而來,為C58型背景,核基因中含有篩選標(biāo)簽——利福平抗性基因rif,為了便于轉(zhuǎn)化操作,此菌株攜帶一無自身轉(zhuǎn)運(yùn)功能的琥珀堿型Ti質(zhì)粒pEHA105 (pTiBo542DT-DNA) ,此質(zhì)粒含有vir基因(vir基因是T-DNA插入植物基因組必需的元件,pEHA105 (pTiBo542DT-DNA)質(zhì)粒自身的T-DNA轉(zhuǎn)移功能被破壞,但可以幫助轉(zhuǎn)入的雙元載體T-DNA順利轉(zhuǎn)移)。
pEHA105 (pTiBo542DT-DNA)Ti質(zhì)粒含有篩選標(biāo)簽:strep,賦予EHA105菌株鏈霉素抗性,適用于水稻、煙草等植物的轉(zhuǎn)基因操作,經(jīng)pCAMBIA2301質(zhì)粒檢測轉(zhuǎn)化效率可達(dá)104cfu/μg

EHA105農(nóng)桿菌感受態(tài)細(xì)胞操作說明:

  1.  -80℃保存的農(nóng)桿菌感受態(tài)于冰上待其部分融化,處于冰水混合狀態(tài)時(shí)插入冰中。
  2.  100μl感受態(tài)加1ug(體積不大于10ul)質(zhì)粒DNA,用手管底混勻,依次于冰上靜置5分鐘、液氮5分鐘、28℃水浴5分鐘、冰浴5分鐘。
  3.  加入700μl無抗生素的LBYEB液體培養(yǎng)基,于28℃振蕩培養(yǎng)2~3小時(shí)。

4. 6000rpm離心一分鐘收菌,留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊涂布于含相應(yīng)抗生素的LBYEB平板上,倒置放于28℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)2-3天(當(dāng)平板只含有50ug/ml kan 時(shí),28℃培養(yǎng)48h即可;平板中同時(shí)加入50ug/ml kan20ug/ml rif 時(shí),需28℃培養(yǎng)60h;如果使用的平板含有50ug/ml rif 則需要28℃培養(yǎng)72-90h)。

上海淳麥生物科技有限公司  感受態(tài)細(xì)胞培養(yǎng)專家  4006815880

 

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