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上海淳麥生物科技有限公司

BL21(AI)感受態細胞

時間:2019-6-23閱讀:1501
分享:
貨號:CM-6039G
供應商:上海淳麥
數量:1000只
英文名:Mach1-T1Chemically Competent Cell
保質期:1年
保存條件:零下80度
規格:20*100ul

BL21(AI) 感受態細胞基因型:

F- omphsdSB(rB-mB-gal dcm araB::T7RNAP-tetA

BL21(AI) 感受態細胞簡要說明:

 High5TM系列BL21(AI) 感受態細胞是大腸桿菌B/r型菌株(E.coli B/r)BL21(AI) 來源于BL21菌株,為膜外蛋白酶OMPT的缺陷型菌株。
該酶的缺失能夠有效防止表達的異源目的蛋白在細菌體內的降解。
使用L-阿拉伯糖誘導araBAD啟動子下游的蛋白表達。使用葡萄糖可以抑制araBAD啟動子下游的蛋白表達。BL21(AI) 感受態細胞適用于任何以T7啟動子為基礎的表達載體,能夠進行高水平的重組蛋白表達。因為菌株體內的T7 RNA聚合酶水平能夠進行有效調節,BL21(AI) 感受態細胞能夠有效表達對其他BL21細胞有毒或生長抑制的蛋白。從BL21(AI) 菌株中獲得目的重組蛋白產量,和其他BL21菌株產量相當。 High5TM系列BL21(AI) 感受態細胞由特殊工藝制作經pUC19質粒檢測轉化效率高達108cfu/μg

BL21(AI) 感受態細胞操作說明:

  1.  100μl冰上融化的BL21(AI)感受態細胞,加入目的質粒并輕輕混勻,冰上靜置25分鐘。

2. 42℃水浴熱激90秒,迅速放回冰上并靜置2分鐘,晃動會降低轉化效率。

  1.  向離心管中加入700μl不含抗生素的無菌培養基(2YTLB),混勻后37℃,200rpm復蘇60分鐘。


4. 5000rpm離心一分鐘收菌,留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含50 µg/ml四環素及所選質粒篩選抗生素的2YT LB培養基上。

  1.  將平板倒置放于37℃培養箱過夜培養。

注意:

  1. Brian Caliendo (Voigt 實驗室)報道過pCP20質粒比較難于轉化到這個感受態細胞中,而pCP20轉化到其他菌株中都很正常,但是菌體原因未知。

2. 即使不加葡萄糖,BL21(AI) 細胞的araBAD啟動子下游的本底蛋白表達水平仍然很低,加入葡萄糖后能夠進一步的降低本底蛋白的表達水平。

BL21(AI) 感受態細胞注意事項

  1.   感受態細胞在冰上融化。
  2.  混入質粒時應輕柔操作。
  3.  轉化高濃度的質粒可相應減少終用于涂板的菌量。
  4.  誘導時,IPTG濃度可選(0.1-2mM均可)。

5. 為獲得需要量的蛋白,誘導時間,溫度,IPTG濃度需實驗者優化。
 

建議選擇該菌株進行蛋白表達的條件如下:

  1.  使用T7啟動子載體(高拷貝或者低拷貝都可以)進行蛋白表達。
  2.  使用其他BL21進行蛋白表達時,觀察到明顯的細菌生長的抑制作用。

3. 表達一個已知的毒性蛋白。

上海淳麥生物科技有限公司  感受態細胞培養專家  4006815880

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