諾博萊德 內質網提取試劑盒

NobleRyder P4935 內質網提取試劑盒

產品貨號：P4935

產品名稱：內質網提取試劑盒

產品規格：50T/100T

產品簡介：

中文名稱：內質網提取試劑盒

規格：50T ; 100T

儲存條件：2-8℃，1 year

具體產品的參數以收到產品說明書的參數為準

適用樣本：動物細胞/組織

產品介紹

內質網存在于除哺乳動物成熟的紅細胞外的各種真核細胞中。內質網為由生物膜構成的互 相通連的片層隙狀或小管狀系統，膜片間的隙狀空間稱為池，通常與細胞外隙和細胞漿基質 之間不直接相通。這種細胞內的膜性管道系統一方面構成細胞內物質運輸的通路，另方面為 細胞內各種各樣的酶反應提供廣闊的反應面積。內質網的功能與蛋白質的合成、糖類和脂類的合成、解毒、同化作用有關，并且還具有運輸蛋白質的功能。

內質網提取試劑盒可用于各種動物細胞和實體軟、硬組織樣本的內質網的提取。 本試劑盒適用于各種粗面內質網和光面內質網的提取。

本試劑盒可以用于完整內質網提取相關的實驗，也可以用于下游內質網蛋白提取等實驗。

動物細胞組織內質網提取試劑盒

注：

1. 提取液長期不用時置于-20℃保存 ，15 天內要多次使用的話置 4℃保存即可。

2. 試劑拆封后請盡快使用完！

產品簡介：

內質網存在于除哺乳動物成熟的紅細胞外的各種真核細胞中。內質網為由生物膜構成的互 相通連的片層隙狀或小管狀系統，膜片間的隙狀空間稱為池，通常與細胞外隙和細胞漿基質之間不直接相通。這種細胞內的膜性管道系統一方面構成細胞內物質運輸的通路，另方面為細胞內各種各樣的酶反應提供廣闊的反應面積。內質網的功能與蛋白質的合成、糖類和脂類的合成、解毒、同化作用有關，并且還具有運輸蛋白質的功能。

內質網提取試劑盒可用于各種動物細胞和組織樣本的完整內質網提取，也可以用于下游內質網蛋白提取等實驗。

本試劑盒適用于各種粗面內質網和光面內質網的提取。

本試劑盒可以用于完整內質網提取相關的實驗，也可以用于下游內質網蛋白提取等實驗。

本試劑盒需要使用高速離心，沒有高速離心的條件時，可以選擇低速離心法內質網提取試劑盒。

自備試劑及設備

離心機、振蕩器、勻漿機/Dounce 勻漿器、渦旋混勻器、移液器、冰箱、冰盒、PBS 緩沖液、離心管、吸頭、一次性手套 、細胞篩

使用方法（僅供參考）：

一、使用注意事項：

1. 旋帽離心管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋內壁上的液體甩至管底，避免開蓋時液體灑落。

2. 實驗過程中的所有試劑須預冷；所有器具須放-20℃冰箱預冷。整個過程須保持樣品處于低溫。

3. 最好使用 Dounce 勻漿器勻漿，如果沒有 Dounce 勻漿器，用普通 1ml 玻璃勻漿器勻漿也可，但是內質網回收率可能會下降。

4. 要求離心力 50000g 的離心，沒有條件的話可以采用 30000g -50000g 離心力，最好能達到 45000g 左右。最小離心力需要保證 30000g。

5. 如果需要回收所有光面內質網小泡，最后一個離心步驟的離心力需要提高到 100000g 力。

6. 離心機轉速有相對離心力（RCF，×g）和每分鐘轉速（RPM）兩種表示方式，有些離心機設置有 RPM 和×g 顯示切換，但部分離心機沒有自動切換功能。需要用下面的公式進行換算：g=r×1.118×10^-5×rpm²（r 為有效離心半徑，即從離心機軸心到離心收集管底部中心位置的長度，單位為厘米)

例如: 轉速為 3000rpm，有效離心半徑為 10 cm，則相對離心力（RCF，×g）為=10×1.118×10^-5×3000²=1006.2（×g）。

二、操作步驟

細胞內質網蛋白提取：

1. 取 1-2×107 個細胞，在 4℃，500×g 條件下離心 5 分鐘，小心吸取培養基，盡可能吸干，收集細胞；

2. 用冷 PBS 洗滌兩次，每次洗滌后盡可能吸干上清。

【注】：

1. 在 500×g 條件下離心 5 分鐘。

3. 加入 500 μl-1 ml 冷的試劑 A，置冰上 10 分鐘。

4. 用 Dounce 勻漿器勻漿 30-40 下。

5. 將勻漿液在 4℃，1000×g 力條件下離心 5 分鐘。棄沉淀，收集上清。

6. 將上清在 4℃，11000×g 力條件下離心 10 分鐘，棄沉淀，收集上清。

7. 將上清在 4℃，50000×g 力條件下離心 45 分鐘。棄上清，收集沉淀。

【注】：

1. 如果條件允許，可將離心力加大到 100000×g，有利于提高光面內質網小泡回收率。

2. 如果用大的離心轉頭，液體量太少不好離心的話，可以添加 PBS 增加液體量。

3.沒有高速離心的條件時，可以選擇低速離心法內質網提取試劑盒。

4.沉淀是離心管底部薄薄一層。不是明顯團塊。

8. 在沉淀中加入 400 μl 冷的試劑 B，混勻。

9. 在 4℃，50000×g 力條件下離心 45 分鐘。

【注】：

1. 如果用大的離心轉頭，液體量太少不好離心的話，可以添加 PBS 增加液體量。

2.沒有高速離心的條件時，可以選擇低速離心法內質網提取試劑盒。

3. 如果期望回收所有光面內質網小泡，離心力需要提高到 100000×g 力。

10. 棄上清，沉淀用內質網保存液重懸。

【注】：

1.也可不用試劑盒中的內質網保存液重懸，根據下游實驗需要選擇合適的緩沖液重懸內質網或直接用于下游實驗。

2. 需要提取內質網蛋白時可以直接在沉淀中加入適量蛋白裂解液進行裂解。

3. 沉淀是離心管底部薄薄一層。不是明顯團塊。

11. 即得到內質網樣品，置冰箱備用或直接用于下游實驗。

組織內質網提取：

1. 取 50 mg -100 mg 新鮮動物組織樣本，用 PBS 洗滌干凈。

2. 用剪dao盡可能剪碎，用冷 PBS 洗滌兩次。

【注】：

1. 在 500×g 條件下離心 5 分鐘。

3. 加入 500 μl-1 ml 冷的試劑 A，置冰上 10 分鐘。

4. 用 Dounce 勻漿器充分勻漿 30-40 下，至無明顯固體團塊。然后在 4℃，1000×g 力條件下離心 5 分鐘。

5. 將上清吸入另一預冷的干凈離心管。

6. 在 4℃，11000×g 力條件下離心 10 分鐘，棄沉淀，收集上清。

7. 將上清在 4℃，50000×g 力條件下離心 45 分鐘。棄上清，收集沉淀。

【注】：

1. 如果條件允許，可將離心力加大到 100000×g，有利于提高光面內質網小泡回收率。

2. 如果用大的離心轉頭，液體量太少不好離心的話，可以添加 PBS 增加液體量。

3. 沒有高速離心的條件時，可以選擇低速離心法內質網提取試劑盒。

4. 沉淀是離心管底部薄薄一層。不是明顯團塊。

8. 在沉淀中加入 400 μl 冷的試劑 B，混勻。

9. 在 4℃，50000×g 力條件下離心 45 分鐘。

【注】：

1. 如果用大的離心轉頭，液體量太少不好離心的話，可以添加 PBS 增加液體量。

2. 沒有高速離心的條件時，可以選擇低速離心法內質網提取試劑盒。

3. 如果期望回收所有光面內質網小泡，離心力需要提高到 100000×g 力。

10. 棄上清，沉淀用內質網保存液重懸。

【注】：

1. 也可不用試劑盒中的內質網保存液重懸，根據下游實驗需要選擇合適的緩沖液重懸內質網或直接用于下游實驗。

2. 需要提取內質網蛋白時可以直接在沉淀中加入適量蛋白裂解液進行裂解。

3.沉淀是離心管底部薄薄一層。不是明顯團塊。

4. 即得到內質網樣品，置冰箱備用或直接用于下游實驗。

注意事項：

1. 正式實驗前請選取幾個樣本做預實驗，以優化實驗條件，取得優良實驗效果。

2. 螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋和管內壁上的液體離心至管底，避免開蓋時試劑損失。

3. 禁止與其他品牌的試劑混用，否則會影響使用效果。

4. 樣品或試劑被細菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會導致錯誤的結果。

5. 最好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿，可重復使用的玻璃器皿必須在使用前清洗并che底清除殘留清潔劑。

6. 實驗后完成后所有樣品及接觸過的器皿應按照規定程序處理。

動物細胞組織內質網提取試劑盒

產品訂購信息：

P4935  內質網提取試劑盒  50T/100T