多胺氧化酶（Polyamine oxidase，PAO）試劑盒說明書

微量法 100T/96S

多胺氧化酶試劑盒 抗氧

正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定測定意義：

多胺氧化酶是催化生物體內多胺氧化的關鍵酶，通過調節體內多胺水平和生成物的濃度，參與各種植物體對逆境脅迫的反應和生長發育過程。

測定原理：

PAO 催化多胺氧化產生過氧化氫，在過氧化物酶存在的條件下與底物顯色，在 550nm 下有特征吸收峰，通過測定吸光值增加速率來反映 PAO 活性。

組成：

自備儀器和用品：

酶標儀、臺式離心機、可調式移液器、96 孔板、研缽、冰和蒸餾水。

粗酶液提取：

組織：按照組織質量（g）：試劑一體積(ml)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1ml 試劑一）進行冰浴勻漿，然后 10000g，4℃離心 20min，取上清，置冰上待測。

細菌、真菌：按照細胞數量（104 個）：試劑一體積（ml）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細胞加入 1ml 試劑一），冰浴超聲波破碎細胞（功率 300w，超聲 3 秒，間隔 7 秒，總時間 3min）；然后 10000g， 4℃，離心 10min，取上清置于冰上待測。

血清等液體：直接測定。

測定步驟：

1、酶標儀預熱 30min 以上，調節波長至 550nm。

2、樣本測定

PAO 活性計算：

按樣本蛋白濃度計算：

單位定義：每mg 組織蛋白在每ml 反應體系中每分鐘A550 變化 0.001 為一個酶活力單位。

PAO（U/mg prot）＝ΔA×V 反總÷（V 樣×Cpr）÷0.001÷T =333.33×ΔA÷Cpr

按樣本鮮重計算：

單位定義：每g 組織在每ml 反應體系中每分鐘 A550 變化 0.001 為一個酶活力單位。

PAO（U/g 鮮重）＝ΔA×V 反總÷(W× V 樣÷V 樣總)÷0.001÷T =333.33×ΔA÷W

按細菌或細胞密度計算：

單位定義：每 1 萬個細菌或細胞在每 ml 反應體系中每分鐘A550 變化 0.001 為一個酶活力單位。

PAO（U/104 cell）＝ΔA×V 反總÷(500×V 樣÷V 樣總)÷0.001÷T =0.667×ΔA

按液體體積計算

單位的定義：每ml 液體樣本在每ml 反應體系中每分鐘A550 變化 0.001 為一個酶活力單位。

PAO（U/ml）=ΔA×V 反總÷V 樣÷0.001÷T =333.33×ΔA

V 反總：反應體系總體積，0.2ml；V 樣：加入樣本體積，0.02 ml；V 樣總：加入提取液體積，1 ml；T：反應時間，30 min；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/ml；W：樣本質量，g；500：細菌或細胞總數，500 萬。

多胺氧化酶試劑盒 抗氧