多功能氧化酶（(mixed function oxidase，MFO）試劑盒說(shuō)明書(shū)

微量法 100T/96S

多功能氧化酶試劑盒 抗氧

正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定測(cè)定意義：

多功能氧化酶又稱(chēng)混合功能氧化酶，可產(chǎn)生降解反應(yīng)，可使原化學(xué)物質(zhì)變?yōu)榈投镜幕驘o(wú)毒的物質(zhì)從體內(nèi)排出；還可產(chǎn)生激活反應(yīng)，可使原化學(xué)物質(zhì)轉(zhuǎn)化為具有親電子性質(zhì)，導(dǎo)致毒性增強(qiáng)，成為致突變物或終致癌物。近年來(lái)對(duì)混合功能氧化酶系與外源性化學(xué)物質(zhì)相互作用的深入研究，對(duì)于從分子生物學(xué)水平上進(jìn)一步了解外源性化學(xué)物質(zhì)的毒作用具有重要意義。

測(cè)定原理：

MFO 催化對(duì)硝基苯甲醚產(chǎn)生對(duì)硝基ben酚，在 400nm 下有特征吸光值。

組成：

試劑二：粉劑×3 管，-20℃保存；臨用前取一管加入 1.5ml 水溶解，現(xiàn)配現(xiàn)用。

自備儀器和用品：

酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、96 孔板、研缽、冰、蒸餾水、氯仿。

粗酶液提取：

按照組織質(zhì)量（g）：提取液（ml)為 1：5~10 的比例（建議稱(chēng)取約 0.1g 組織，加入 1ml 提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。12000g 4℃離心 20min，取上清，置冰上待測(cè)。

測(cè)定步驟：

1、酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至 400nm。

2、在EP 管中依次加入如下試劑

分別加入 1000μl 氯仿，充分混勻萃取，靜置 10min，取下層氯仿層 0.6ml 至新的EP 管中。再加入試劑四 0.6ml，充分混勻萃取，取上層水相 0.2ml 于 96 孔板中，400nm 下測(cè)定吸光值A(chǔ) 測(cè)定與A 空白，△A=A 測(cè)定-A 空白。空白管只需測(cè)一管。

MFO 活性計(jì)算:

標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)：y = 0.0119x + 0.0021，R2 = 0.9997；y，吸光度；x,標(biāo)準(zhǔn)品濃度，單位nmol/ml。

按樣本質(zhì)量計(jì)算

單位定義：每g 樣本每分鐘產(chǎn)生 1nmol 對(duì)硝基ben酚定義為一個(gè)酶活力單位。

MFO（nmol/min/g 鮮重）=（△A-0.0021）÷0.0119×V 總÷(V 樣÷V 樣總×W)÷T

=8.4×（△A-0.0021）÷W

按樣本蛋白濃度計(jì)算

單位定義：每mg 組織蛋白每分鐘產(chǎn)生 1nmol 對(duì)硝基ben酚定義為一個(gè)酶活力單位。

MFO（nmol/min/mg prot）=（△A-0.0021）÷0.0119×V 總÷(V 樣×Cpr)÷T

=8.4×（△A-0.0021）÷Cpr

V 總：最終萃取液體積，0.6 ml；V 樣：反應(yīng)中樣品體積，200μl；T：反應(yīng)時(shí)間，30min；W：樣品質(zhì)量，

g；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/ml。

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