脂肪酸合成酶（FAS）活性試劑盒說明書

微量法 100T/96S

脂肪酸合成酶FAS活性試劑盒

正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定測定意義：

FAS 是脂肪酸合成關鍵酶，催化乙酰輔meiA 和丙二酰輔meiA 而生成長鏈脂肪酸。FAS 普遍表達于各種組織細胞中，在哺乳動物肝、腎、腦、肺和乳腺以及脂肪組織中表達豐富。

測定原理：

FAS 催化乙酰CoA、丙二酰 CoA 和NADPH 生成長鏈脂肪酸和NADP⁺；NADPH 在 340nm 有吸收峰，而NADP⁺沒有；通過測定 340nm 光吸收下降速率，計算 FAS 活性。

組成：

試劑一：液體 100ml×1 瓶，－20℃保存。用前 1d 取出置于 4℃充分解凍后混勻。

試劑二：粉劑×1 瓶。臨用前加入 440μl 試劑四，充分溶解，用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復凍融。

試劑三：粉劑×1 瓶，4℃保存。臨用前加入 440μl 試劑四，充分溶解，用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復凍融。

試劑五：粉劑×1 瓶，4℃保存。臨用前加入 840μl 試劑四，充分溶解，用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復凍融。

自備儀器和用品：

研缽、冰、臺式離心機、紫外分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96 孔板、可調式移液槍和蒸餾水。

粗酶液提取：

組織：按照組織質量（g）：試劑一體積(ml)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1ml 試劑一）進行冰浴勻漿。12000g，4℃離心 40min，取上清置冰上待測。

細菌、真菌：按照細胞數量（104 個）：試劑一體積（ml）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細胞加入 1ml 試劑一），冰浴超聲波破碎細胞（功率 300w，超聲 3 秒，間隔 7 秒，總時間 3min）；然后 12000g， 4℃，離心 40min，取上清置于冰上待測。

血清等液體：直接測定。

FAS 測定操作：

分光光度計/酶標儀預熱 30min，調節波長到 340 nm，蒸餾水調零。

試劑四置于 40℃水浴中預熱 30 min。

在 96 孔板或 EP 管中依次加入 20μl 上清液、4μl 試劑二、4μl 試劑三、164μl 試劑四和 8μl 試劑五，混勻后于 340nm 處測定吸光值，記錄第 30s 和 90s 時吸光值，分別記錄為A1 和A2。△A 測=A1-A2。

FAS 活性計算：

使用微量石英比色皿測定的計算公式如下

按照蛋白濃度計算

活性單位定義：37℃中每毫克蛋白每分鐘氧化 1nmol NADPH 為 1 個酶活單位。

FAS(nmol/min/mg prot) =(△A÷ε÷d×V 反總×109) ÷(Cpr×V 樣)÷T

=1608×△A÷Cpr

按照樣本質量計算

活性單位定義：37℃中每克組織每分鐘氧化 1nmol NADPH 為 1 個酶活單位。

FAS(nmol/min/g 鮮重) = (△A÷ε÷d×V 反總×109) ÷(W×V 樣÷V 樣總)÷T

=1608×△A ÷W

按細胞數量計算

活性單位定義：37℃中每 104 個細胞每分鐘氧化 1nmol NADPH 為 1 個酶活單位。

FAS(nmol /min/104cell) = (△A÷ε÷d×V 反總×109) ÷(細胞數量×V 樣÷V 樣總)÷T

=1608×△A ÷細胞數量

按液體體積計算

活性單位定義：37℃中每毫升樣本每分鐘氧化 1nmol NADPH 為 1 個酶活單位。

FAS(nmol /min/ml) =(△A÷ε÷d×V 反總×109) ÷V 樣÷T

=1608×△A

ε：NADPH 摩爾消光系數，6.22×103L/mol/cm；d：比色皿光徑，1 cm；V 反總：反應體系總體積，200μl=2×10-4L； Cpr：上清液蛋白質濃度，mg/ml；W ：樣品質量；V 樣：加入反應體系中上清液體積，20μl=0.02 ml；V樣總：提取液體積，1 ml；T：反應時間，1min。

使用 96 孔板測定的計算公式如下

按照蛋白濃度計算

活性單位定義：37℃中每毫克蛋白每分鐘氧化 1nmol NADPH 為 1 個酶活單位。

FAS(nmol/min/mg prot) =(△A÷ε÷d×V 反總×109)÷(Cpr×V 樣)÷T

=3216×△A÷Cpr

按照樣本質量計算

活性單位定義：37℃中每克組織每分鐘氧化 1nmol NADPH 為 1 個酶活單位。

FAS(nmol/min/g 鮮重) = (△A÷ε÷d×V 反總×109) ÷(W×V 樣÷V 樣總)÷T

=3216×△A÷W

按細胞數量計算

活性單位定義：37℃中每 104 個細胞每分鐘氧化 1nmol NADPH 為 1 個酶活單位。

FAS(nmol /min/104cell) = (△A÷ε÷d×V 反總×109)÷(細胞數量×V 樣÷V 樣總)÷T

=3216×△A÷細胞數量

按液體體積計算

活性單位定義：37℃中每毫升樣本每分鐘氧化 1nmol NADPH 為 1 個酶活單位。

FAS(nmol /min/ml) =(△A÷ε÷d×V 反總×109 )÷V 樣÷T

=3216×△A

ε：NADPH 摩爾消光系數，6.22×103L/mol/cm；d：96 孔板光徑，0.5 cm；V 反總：反應體系總體積，

200μl=2×10-4L；Cpr：上清液蛋白質濃度，mg/ml；W ：樣品質量；V 樣：加入反應體系中上清液體積，20μl=0.02 ml；V 樣總：提取液體積，1 ml；T：反應時間，1min。

脂肪酸合成酶FAS活性試劑盒