總膽gu醇（total cholesterol，TC）含量測(cè)定試劑盒說(shuō)明書(shū)

微量法 100T/96S

總膽gu醇含量測(cè)定試劑盒 脂肪酸系列

正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定測(cè)定意義：

TC 包括游離膽gu醇和膽gu醇酯。TC 是指組織中所有脂蛋白所含膽gu醇之總和。

測(cè)定原理：

利用酯酶催化膽gu醇酯水解生成游離膽gu醇（FC）和游離脂肪酸（FFA），從而把膽gu醇酯轉(zhuǎn)化為 FC；進(jìn)一步利用膽gu醇氧化酶催化FC 氧化，生成△4-膽甾烯酮和H2O2；最后利用過(guò)氧化物酶催化 H2O2 氧化 4-氨基安ti比林和酚，生成紅色醌類(lèi)化合物；在 500nm 有特征吸收峰，其顏色深淺與TC 含量成正比。

組成：

TC 標(biāo)準(zhǔn)品：液體 1ml×1 支，0.5μmol/ml，4℃保存。

自備儀器和用品：

水浴鍋、可調(diào)式移液槍、酶標(biāo)儀、96 孔板。

TC 的提取：

1、組織中TC 的提取：按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(ml)為 1：5~10 的比例（建議稱(chēng)取約 0.1g 組織，加入 1ml 試劑一）進(jìn)行冰浴勻漿，8000g 4℃離心 10min，取上清，即TC 待測(cè)液。

2、細(xì)胞、細(xì)菌中TC 的提取：先收集 400-500 萬(wàn)細(xì)胞或細(xì)菌到離心管內(nèi)，棄上清，加 1ml 試劑一，超聲波破碎 1min（強(qiáng)度 20％，超聲 2s，停 1s），即TC 待測(cè)液。

3、血清（漿）等樣品：直接測(cè)定。

測(cè)定操作：

/酶標(biāo)儀預(yù)熱 30 min，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到 500 nm。

TC 工作液的配制：臨用前，吸取約 0.8ml 試劑二分別加入試劑三和試劑四瓶中，充分溶解后再全部轉(zhuǎn)移回試劑二瓶中，充分混勻，TC 工作液置于 37℃水浴 10min。用不完的工作液 4℃保存一周。

標(biāo)準(zhǔn)管：依次在 96 孔板中加入 20μl FC 標(biāo)準(zhǔn)液和 180μl TC 工作液，混勻，37℃靜置 3h 后于 500nm 測(cè)定A 標(biāo)準(zhǔn)管。

測(cè)定管：依次在 96 孔板中加入 20μl FC 待測(cè)液和 180μlTC 工作液，混勻，37℃靜置 3h 后于 500nm 測(cè)定A 測(cè)定管。

空白管：依次在 96 孔板中加入 20μl 試劑一和 180μlTC 工作液，混勻，37℃靜置 3h 后于 500nm 測(cè)定A測(cè)定管。

注意：標(biāo)準(zhǔn)管和空白管只需測(cè)定一次。

計(jì)算公式：

血清（漿）中TC 含量計(jì)算：

TC（μ mol /dL）=C 標(biāo)準(zhǔn)液×（A 測(cè)定管-A 空白管）÷（A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管）×100

=50×（A 測(cè)定管-A 空白管）÷（A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管）

C 標(biāo)準(zhǔn)液：0.5μmol/ml；100 ml：1dL=100 ml。

組織中TC 含量計(jì)算：

按樣本蛋白濃度計(jì)算

TC（μ mol / mg prot）= C 標(biāo)準(zhǔn)液×（A 測(cè)定管-A 空白管）÷（A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管）÷Cpr

= 0.5×（A 測(cè)定管-A 空白管）÷（A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管）÷Cpr

按樣本質(zhì)量計(jì)算

TC（μ mol / g 鮮重）= C 標(biāo)準(zhǔn)液×（A 測(cè)定管-A 空白管）÷（A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管）÷W

= 0.5×（A 測(cè)定管-A 空白管）÷（A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管）÷W C 標(biāo)準(zhǔn)液：0.5μmol/ml；樣本蛋白濃度，mg/ml；W：樣本質(zhì)量，g/ml

細(xì)胞、細(xì)菌中TC 含量計(jì)算：

TC（μ mol /104 cell）=C 標(biāo)準(zhǔn)液×（A 測(cè)定管-A 空白管）÷（A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管）÷細(xì)菌或細(xì)胞（104 cell /L）

=0.5×（A 測(cè)定管-A 空白管）÷（A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管）÷細(xì)菌或細(xì)胞（104 cell /L） C 標(biāo)準(zhǔn)液：0.5μmol/ml。

最di檢出限為 1nmol/ml。

總膽gu醇含量測(cè)定試劑盒 脂肪酸系列