諾博萊德 植物microRNA快速提取試劑盒

FlashPure Plant miRNA Mini Kit植物 microRNA 快速提取試劑盒(免氯仿)

目錄號：91410

產品內容

自備試劑

無水乙醇

保存條件

室溫（15 ~ 25℃）

具體產品的參數以收到產品說明書的參數為準

產品簡介

市場上常見的離心柱型的 RNA Kit/總 RNA Kit，不能有效吸附回收miRNA；Trizol 沉淀抽提法也不能有效沉淀回收全部 miRNA（生物通上有專題文章闡述）。

FlashPure Plant miRNA Mini Kit 是專用于提取各種植物組織的miRNA（包含 miRNA 的總 RNA），是通用型 microRNA 快速提取試劑盒（Cat#91015）的升級版，提取過程不再需要使用氯仿，并采用獨you的gDNA過濾器，高效濾除基因組，得到包含 miRNA 的總 RNA，可直接用于miRNA 和 mRNA 的 RT、RT-PCR、RT-qPCR、RACE、芯片、測序等。

不但適用于普通植物，也適用于多糖多酚植物的根莖葉花，但是遇到糖酚含量巨豐富、次級代謝產物巨多的果實、種子、中草藥等樣本，應選用果實種子 microRNA 提取試劑盒（Cat#91400），效果更佳。

注意事項

1. 樣品應避免反復凍融，否則會影響 RNA 的提取得率和質量。

2. 樣品加入裂解液 MPA Plus 勻漿后，樣品可在–80℃保存一個月以上。

3. 取RNA樣本時，把新鮮組織樣本浸入 RNAsafe (RNA 樣品保存液，91115-

100)中，可在 37℃保存一天，在 25℃保存一周，在 4℃保存一個月，在-20℃或者–80℃長期保存。

操作步驟（可得到包含 miRNA 的總 RNA）

提示：

① 第一次使用前, 先在 Wash Solution 1、Wash Solution 2/3 中加入

指ding量無水乙醇，詳見瓶上的標簽。

② 對于 RNA 酶或者多酚特別豐富植物組織：操作前在裂解液 MPA Plus 中加入 β-巰基乙醇至終濃度 1%，例如 1 ml MPA Plus 中加入 10μl β-巰基乙醇，此裂解液最好現用現配，配好 MPA Plus 4℃可放置一個月。

③ 所有離心步驟均需要在室溫（15~37℃）下進行，提取效果更佳！

1. 在液氮中研磨植物組織成細粉，取≤60 mg細粉加入600 μl 裂解液MPA Plus，立即劇烈渦旋震蕩 30 sec，充分混勻。

2. 將裂解物 13,000 rpm 離心 5 ~10 min，沉淀不能裂解的碎片。

3. 小心吸取上清（一般 500 μl），轉入一個 gDNA 過濾器中（過濾器放入收集管中），13,000 rpm 離心 1 min，保留濾液（RNA 在濾液中）。

4. 向濾液中加入 1.25 倍體積(一般 625μl )的無水乙醇，用移液器吹打混勻。

5. 每次轉移≤750 μl濾液混合物至RNA吸附柱中，13,000 rpm離心1min，此時，RNA 被吸附在膜上，棄濾液。重復此過程，直到溶液全部上柱。

6. 加入 700 μl Wash Solution 1（檢查是否已加入乙醇），室溫放置 1 min, 13,000 rpm 離心 30 sec，棄濾液。

7. 加入 500 μl Wash Solution 2/3（檢查是否已加入乙醇），13,000 rpm 離心 30 sec，棄濾液。

8. 重復步驟 7。

9. 將 RNA 吸附柱放回空收集管中，13,000 rpm 離心 2 min，除去膜上殘留的留乙醇。

10. 取出 RNA 吸附柱，放入一個新的 RNase-free 1.5 ml 離心管中，向 RNA吸附膜的中央懸空滴加 30-50 μl RNase-free H2O，室溫放置 1 min，13,000 rpm 離心 1 min，管底即包含 miRNA 的總 RNA。

11. 得到 RNA/miRNA，可直接用于下游實驗，或于-70℃保存，以免降解。

相關產品：

71418-25 Script III miRNA 1st Stand Synthesis Kit（加尾法）

71419-500 Script III miRNA Real-Time PCR Assay kit（for qPCR，加尾法）

71613-500 Script III miRNA RT-qPCR Detection kit（71418-25 + 71419-500）

植物microRNA快速提取試劑盒