諾博萊德 全血（液體樣本）microRNA快速提取試劑盒

Blood miRNA Mini Kit全血（液體樣本）microRNA 快速提取試劑盒

目錄號：91214

產品內容

自備試劑

無水乙醇

保存條件

室溫（15 ~ 25℃）

具體產品的參數以收到產品說明書的參數為準

產品簡介

常見的離心柱型的 RNA Kit/總 RNA Kit 不能有效吸附回收 miRNA，Trizol 抽提法也不能有效沉淀回收 miRNA（生物通上有專題文章闡述）。

裂解液 RLS 是 RNAzol LS Reagent ( 同 Trizo LS ,是濃縮型的 Trizol )，配合 miRNA 專用的溶液體系，專用于快速提取全血、血漿、血清、腦脊液、尿液等液體樣本的 miRNA 和其它各種小 RNA(15-30 nt )。

Blood miRNA Mini Kit 可以提出來包含 miRNA 的總 RNA，用于miRNA 的 RT、qPCR 檢測，以及全轉錄組測序等；根據需要，也可以一次性把 miRNA 和總 RNA（mRNA、tRNA、rRNA）分別提出來。

產品特點

1. 本公司生產的 Blood miRNA mini Kit 質量優異，可以媲美進口品牌。

2. 本品可在常溫下提取 RNA，不需要 4℃離心機；亦可以兼容 4℃離心機。

注意事項

1. Wash Solution 2/3 可能加入乙醇使用幾天后，可能會出現沉淀晶體，并不影響使用，取其上清直接使用就可以。

2. 血液 RNA 的常溫保存/運輸/提取的簡易方案：

臨床取樣：在臨床上，使用抗凝管采血后，取 250 μl 新鮮血液，加入 750μl 的裂解液 RLS ( RNAzol LS Reagent，Cat#R012-100)，用移液槍反復抽打并振蕩混勻，在室溫裂解 5~10 min，直至血細胞充分發生裂解。

保存：經裂解后的血液可在-20℃下保存 1-2 個月，在-70℃保存半年。

運輸：可冰袋 4℃運輸 1 天，干冰-20℃運輸一周。

提取：后續 RNA 提取按 R213（或 R012）的說明書進行。

3. RNA 純度及濃度檢測:

血清/血漿的 RNA 含量特別低，已經低于分光光度計測量的下限，無法準確測量，因此無法通過測量 OD 值或者比值的方法來判斷濃度或者純度，只能通過下游做 RT-qPCR 來判斷產量。同時無細胞的血清/血漿中的 RNA 主要是小于 100 nt 的 miRNA，因此跑電泳檢測 RNA 完整性并不適用于血清/血漿 RNA。

操作步驟

第一次使用前，先在 Wash Solution 1、Wash Solution 2/3、70%乙醇中加入無水乙醇，加入量詳見瓶上的標簽。

1. 每 250 μl 液體樣品 (血清、血漿、腦脊液等)，加入 750 μl 裂解液 RLS，用移液器反復抽打幾次，然后劇烈震蕩 15 sec，充分混勻。（液體樣品和裂解液 RLS 的終體積比總是 1：3）

注意：對于含有高污染物樣品（如全血樣品），可以用滅菌水按照 1：1的比例稀釋一倍后開始提取。

2. 將勻漿樣品在室溫下放置 5 min，使得核酸蛋白復合物完quan分離。

3. 加入 200 μl 氯仿，劇烈振蕩 15 秒，并在室溫下放置 2 分鐘。

4. 于 4℃（或室溫）13，000 rpm 離心 10 分鐘。 樣品會分成三層：下層有機相、中間層、上層無色的水相，RNA 存在于水相中。水相層的容量大約為所加裂解液 RLS 體積的 70%。

5. 轉移上清（約 500 μl）至一個新的離心管中，加入 1.5 倍體積（750 μl）的無水乙醇，吹打混勻。

6. 每次轉移≤750 μl上清混合液至RNA吸附柱中，12,000 rpm離心1 min，倒棄濾液。重復此過程，直到上清混合液全部上柱。

7. 向 RNA 吸附柱內加入 700 μl Wash Solution 1（檢查是否已加入乙醇），12,000 rpm 離心 1 min，倒棄濾液。

8. 向 RNA吸附柱內加入 500 μl Wash Solution 2/3（檢查是否已加入乙醇），12,000 rpm離心1 min，棄濾液。

9. 重復步驟 8 一次。

10. 將 RNA 吸附柱放回空收集管中，12,000 rpm 離心 2min，除去膜上殘留的乙醇。

11. 取出 RNA 吸附柱，放入一個新的 RNase-Free 1.5 ml 離心管中，向吸附膜的中央部位懸空滴加 30~50 μl RNase-Free ddH2O，室溫放置 1 min，12,000 rpm 離心 1 min，管底即包含 microRNA 的總 RNA。

附：microRNA 富集方法（僅僅提取 microRNA，不包含>200 nt 其它總

RNA 成份。一般不推薦）

注意：當非特異擴增較多或者擴增背景較高時，可以嘗試使用富集方法提取的 microRNA。

1. 按照前面標準操作步驟 1－4 操作，直到得到上清。

2. 取上清（約 500 μl）至一個新的離心管，加入等體積 70％乙醇（必須是

室溫的），吹打混勻，不要離心。

3. 取700 μl上清混合液，加入一個RNA吸附柱中，12,000 rpm離心1 min，收集濾液。并將濾液轉移至一個新的離心管，然后把 RNA 吸附柱放回空的收集管內，再加入剩下的混合物，離心，收集濾液。

此時，濾液含有 microRNA, RNA 吸附柱的膜上是去除了 microRNA 的總RNA（mRNA、tRNA、rRNA 等大于 200nt 的 RNA），如果有需要，可以按照前面標準操作步驟 7－11 操作，漂洗、洗脫，得到去除了 microRNA 的總 RNA。

4. 較精確估計濾液體積，加入 0.65 倍體積無水乙醇（必須是室溫的），吹打混勻，不要離心。

5. 將≤750 μl濾液混合物加入microRNA吸附柱中，12,000 rpm離心1min，micoRNA 被吸附在膜上，倒棄廢液。重復此過程，直到所有溶液都上柱。

6. 按照前面標準操作步驟 7－11 操作，經漂洗，洗脫后，得到富集的microRNA。

相關產品：

71418-25 Script III miRNA 1st Stand Synthesis Kit（加尾法）

71419-500 Script III miRNA Real-Time PCR Assay kit（for qPCR，加尾法）

71613-500 Script III miRNA RT-qPCR Detection kit（P418-25 + P419-500）

全血（液體樣本）microRNA快速提取試劑盒