諾博萊德 M13噬菌體單鏈基因組DNA快速提取試劑盒

M13噬菌體單鏈基因組DNA快速提取試劑盒

目錄號：40211

適用范圍：

適用于快速提取M13噬粒單鏈DNA

試劑盒組成、儲存、穩定性：

本試劑盒在室溫儲存12個月不影響使用效果。

儲存事項:

  1.結合液MB低溫時可能出現析出和沉淀，可以在37℃水浴幾分鐘幫助重新溶解，恢復澄清透明后冷卻到室溫即可使用。

   2.   避免試劑長時間暴露于空氣中產生揮發、氧化、pH值變化，各溶液使用后應及時蓋緊蓋子。

具體產品的參數以收到產品說明書的參數為準

產品介紹：

M13和其它的絲狀噬菌體載體，在文庫構建和為序列測序提供單鏈DNA和引人突變方面十分有用。將適量M13絲狀噬菌體或者相關噬粒（M13來源）感染的液體培養物離心，上清中的單鏈噬菌體DNA在高離序鹽狀態下選擇性吸附于離心柱內硅基質膜，再通過一系列快速的漂洗－離心的步驟，將鹽、細胞代謝物，蛋白等雜質去除，最后低鹽的洗脫緩沖液將純凈噬菌體單鏈DNA從硅基質膜上洗脫。

產品特點：

  1.不需要使用有毒的ben酚等試劑，也不需要乙醇沉淀等步驟。

 2.節省時間，簡捷，單個樣品操作一般可在10分鐘內完成。

 3.產量高，典型的產量800µl M13絲狀噬菌體上清可以提取3µg噬菌體單鏈DNA。

   4.多次柱漂洗確保高純度，OD260/OD280典型的比值達1.7～1.9。可以直接用來測序，一般典型可辨認讀長達650bp。

注意事項：

    1.    所有的離心步驟均在室溫完成，使用轉速可以達到13,000rpm的傳統臺式離心機，如Eppendorf 5415C 或者類似離心機。

    2.   開始實驗前將需要的水浴先預熱到50℃備用。

    3.     結合液MB含有刺激性化合物，操作時要戴乳膠手套，避免沾染皮膚，眼睛和衣服。若沾染皮膚、眼睛時，要用大量清水或者生理鹽水沖洗。
 操作步驟:（實驗前請先閱讀注意事項）

以800μl噬菌體感染細菌培養上清提取舉例:

提示：第一次使用前請先在漂洗液WB中加入指ding量無水乙醇，充分混勻，加入后請及時在方框打鉤標記已加入乙醇，以免多次加入!

1.將M13絲狀噬菌體或者相關噬粒（M13來源）感染的液體培養物分裝在1.5毫升離心管，12,000rpm離心5分鐘沉淀菌體。

2. 小心取800μl上清轉入新的1.5ml離心管，加入400μl結合液MB，充分混勻。

如果使用的上清大于或者小于800μl，則結合液MB的用量需要按照比例增加或者減少。

 3.將上述混合物加入一個吸附柱AC中，（吸附柱放入收集管中）13,000rpm離心15秒，倒掉收集管中的廢液。

吸附柱一次最多只可以容納大約700μl混合物，因此需要分次把混合物加到吸附柱內，重復步驟3。

      4.加入700μl漂洗液WB（請先檢查是否已加入無水乙醇!），12,000rpm 離心30秒，棄廢液。

      5.   將吸附柱AC放回空收集管中，13,000rpm離心2分鐘，盡量除去漂洗液， 以免漂洗液中殘留乙醇抑制下游反應。

     6. 取出吸附柱AC，放入一個干凈的離心管中，在吸附膜的中間部位加60μl洗脫緩沖液EB（洗脫緩沖液事先在 50℃水浴中預熱）， 室溫放置1分鐘，12,000rpm 離心1分鐘。如果想得到較多量的DNA，可將得到的溶液重新加入離心吸附柱中，10,000rpm離心1分鐘。

洗脫體積越大，洗脫效率越高，如果需要DNA濃度較高，可以適當減少洗脫體積， 但是最小體積不應少于40μl，體積過小降低DNA洗脫效率，減少DNA產量。

     7. DNA可以存放在2-8℃，如果要長時間存放，可以放置在－20℃。

附錄（M13噬菌體感染細菌培養上清準備過程）:

下面舉例說明M13噬菌體感染細菌培養上清準備過程，詳細的M13噬菌體（或M13來源噬粒）培養和上清準備過程請參見『分子克隆』第二版。

1.37℃ 振搖過夜培養合適的噬菌體宿主菌（如JM109）。

2.使用6％的過夜培養菌接種新鮮的LB培養液，37℃振搖培養一個小時。

  3.   根據M13噬菌體的儲存液的濃度（滴度）按照0.5-1.5%(V/V)的比例加入噬菌體來感染宿主菌。37℃振搖培養5-6個小時。

  4.   將上面M13絲狀噬菌體或者相關噬粒（M13來源）感染的液體培養物分裝在1.5毫升離心管，12,000rpm離心5分鐘沉淀菌體。

 5.    可選步驟: 小心取1毫升上清轉入新的1.5ml離心管， 重復步驟4離心5分鐘。這步有助于去除上清中殘留的微量宿主菌RNA或者DNA。

  6.    小心取800μl上清轉入新的1.5ml離心管。

 7.    現在可以按照操作步驟提取噬菌體單鏈DNA了。

問題與解決方法: