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dsRNA（double-stranded RNA）即雙鏈RNA，由兩條互補的核苷酸鏈通過堿基配對形成，它在調控基因表達、激活免疫反應以及RNA干擾技術中扮演著關鍵角色。dsRNA也是某些病毒的遺傳物質，能夠觸發宿主細胞的天然免疫反應。

dsRNA的形成機制

第一種機制：基于T7 RNA聚合酶（T7 RNAP）本身具有的RNA依賴性RNA聚合酶（RdRp）活性，能夠以產物RNA為模板，3'末端繼續延伸RNA后與原RNA分子反向互補配對形成發卡結構；或者是在轉錄過程中，隨機斷裂的/不完整的轉錄產物與mRNA互補配對從而延伸成不完整的雙鏈RNA。

第二種機制：以DNA反義鏈為模板，獨立于啟動子的轉錄過程形成dsRNA

圖1 dsRNA復制示意圖

dsRNA經典克隆

J2克隆

J2單克隆抗體（Anti-dsRNA mAb J2）是dsRNA檢測的金標準，具有高度特異性。它最初用于植物病毒的研究，但自從Weber等人在2006年的開創性論文發表以來，J2被用來證明所有正鏈RNA病毒在感染的細胞中產生的大量dsRNA。

K2克隆

K2單克隆抗體（Anti-dsRNA mAb K2）是另一種抗dsRNA的單克隆抗體，主要用于ELISA和夾心法ELISA實驗，K2主要用于ELISA和夾心法ELISA，在高背景環境中仍能精準識別dsRNA，尤其在高濃度L-dsRNA和長時間孵育條件下，顯示出對天然dsRNA結合能力較強的特性。

dsRNA的生物學意義

1. dsRNA通常被視為病毒感染的標志，因為許多病毒（尤其是雙鏈RNA病毒）以dsRNA作為其基因組或復制中間體。例如正鏈RNA病毒（+ssRNA）在復制時會先合成負鏈RNA（-ssRNA），形成dsRNA，然后再從負鏈RNA合成更多的正鏈RNA。

圖2 病毒感染后產生的dsRNA被RIG-I、MDA5和TLR3等受體識別，觸發IFN-β的產生，進而激活ISGs，包括OAS和IFN-α，形成抗病毒反應的正反饋循環。抗IFN-α抗體中和IFN-α，抑制ISGs的誘導，削弱免疫反應，影響病毒清除。

2. 在mRNA疫苗和治療中，dsRNA作為副產物在體外轉錄（IVT, In Vitro Transcription）制備mRNA過程中產生，能夠被細胞內的核酸受體識別，例如TLR3、MDA5或者RIG-I，進而引發天然免疫炎癥反應。

圖3 在 IVT 反應過程中形成 3′-延伸的 RNA 副產物。（A） 使用 dsRNA 特異性抗體 （J2） 對三種不同的 mRNA 序列（CLuc、RFP 和 GFP）進行 dsRNA檢測。

3. 免疫信號通路中，dsRNA作為重要的病原分子模式（PAMPs），能夠激活天然免疫系統中的關鍵受體（如RIG-I、MDA5和TLR3）。這些受體通過識別dsRNA，引發干擾素（IFN）等抗病毒分子的產生，從而觸發強大的免疫反應。

dsRNA結合后，NLRP1觸發其UPA和CARD結構域的釋放，組裝炎癥體種子，誘導炎癥體形成并激活caspase 1。激活的caspase 1切割炎癥細胞因子前體（如IL-1β和IL-18）和一個形成孔洞的蛋白gasdermin D（GSDMD）。GSDMD孔洞在質膜上形成，誘導焦亡，這是一種炎癥形式的細胞死亡。

圖4 dsRNA作為觸發RIG-I（Retinoic Acid-Inducible Gene I）和MDA5（Melanoma Differentiation-Associated Protein 5）識別的分子模式，從而啟動先天免疫反應。

dsRNA不僅在理解病毒感染機制和宿主免疫反應中扮演著關鍵角色，而且在開發新的抗病毒策略和疫苗技術方面具有重要價值。通過對dsRNA的形成機制、識別受體以及其在免疫激活中的作用的深入研究，科學家們能夠更好地理解病毒如何逃避或操縱宿主的天然免疫反應，以及如何設計更有效的疫苗和治療藥物來對抗病毒感染。

兔單克隆抗體優勢

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