紫外分光光度法測定蛋白質含量
一、實驗原理
由于蛋白質分子中酪氨酸和色氨酸殘基的苯環含有共軛雙鍵，因此蛋白質具有吸收紫外線的性質，吸收高峰在280nm波長處。在此波長范圍內，蛋白質溶液的光吸收值（OD280）與其含量呈正比關系，可用作定量測定。
利用紫外吸收法測定蛋白質含量的優點是民迅速、簡便、不消耗樣品，低濃度鹽類不干擾測定。因此，在蛋白質和酶的生化制備中（特別是在柱層析分離中）得到廣泛應用。此法的缺點是：（1）對于測定那些與標準蛋白質酪氨酸和色氨酸含量差異較大的蛋白質，有一定的誤差；（2）若樣品中含有嘌呤、嘧啶等吸收紫外線的物質，會出現較大的干擾。根據蛋白質和核酸的吸收高峰不同，并利用這一性質，通過計算可以適當校正核酸的干擾作用。
二、實驗用品
(一)器材
(1) 752紫外分光光度計。
(2) 移液管。
(3)試管及試管架。
（二）試劑
標準蛋白質溶液：準確稱量經微量凱氏定氮法校正標準蛋白質，用重蒸餾水配制成濃度為1mg/ml的溶液。
(三)材料
待測蛋白質樣品溶液（用重蒸餾水適當稀釋）。
三、實驗程序
1.標準法制作標準曲線
取8支試管，按表1-1分別向每支試管加入各種試劑，搖勻。
選用光程為1cm的石英比色杯，在280nm處分別測定各管溶液的OD280值。以蛋白質濃度為橫坐標，OD280值為縱坐標，繪制標準曲線。
2.樣品測定
取適當濃度的待測蛋白質溶液，同樣選用光程為1cm的石英比色杯，測定280nm處的光吸收值，并從標準曲線上查出待測定蛋白質的濃度。
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