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生物試劑分類2010/11/10
生物試劑分類生物試劑(BR:Biologicalreagent)涉及到化學試劑分類。我國的試劑規格基本上按純度(雜質含量的多少)劃分,共有高純、光譜純、基準、分光純、優級純、分析和化學純等7種。國家和主管部門頒布質量指標的主要優級純、分級純和化學純3種。(1)優級純(GR:Guaranteedreagent),又稱一級品或保證試劑,99.8%,這種試劑純度zui高,雜質含量zui低,適合于重要精密的分析工作和科學研究工作,使用綠色瓶簽。(2)分析純(AR),又稱二級試劑,純度很高,99.7%,略
研究揭示著絲粒CENP-A蛋白結構2010/10/25
研究揭示著絲粒CENP-A蛋白結構人體平均每天有1000億個細胞發生分裂,大部分時候機體的細胞分裂正常進行。但有時細胞復制過程發生異常則會引起染色體畸形而導致多種病征例如癌癥、唐氏綜合征等。近日賓夕凡尼亞州大學醫學院的研究者們對CENP-A蛋白的分子結構進行了鑒定。CENP-A蛋白曾被證實在著絲粒的形成過程中起關鍵作用,CENP-A可將著絲粒變成一個DNA和蛋白的復合物,而且確保著絲粒在細胞分裂中完好無損。CENP-A的存在確保了人體有幾乎*相同的染色體組。CENP-A功能失常將導致細胞分裂過程
原代細胞DNA與RNA的吖啶橙熒光染色法2010/10/15
原代細胞DNA與RNA的吖啶橙熒光染色法基本原理:吖啶橙(acridineorange,AO)是一種常用熒光染料,吖啶橙與原代細胞內的DNA、RNA都有親和力,但有一定的特異性,即結合后發不同顏色的熒光,DNA呈亮綠色,而RNA呈橘紅色至火紅色。此法簡便快捷,既可染活原代細胞又可染固定原代細胞。用于直接染色觀察活原代細胞或固定染色觀察原代細胞均可。吖啶橙對活原代細胞毒性小,配成1×10-4—2×10-4可用于直接染色活原代細胞和進行熒光顯微鏡觀察,但不持久,用固定染色觀察法效果更好。材料:1.蓋
人胚胎干細胞有助神經修復 2010/10/08
人胚胎干細胞有助神經修復美國威斯康星州大學科學家在《發育》雜志上撰文說,他們已經成功從人類胚胎干細胞中培育出了能產生髓磷脂的細胞,這一發現為基礎研究和臨床研究開辟了新的前景。研究人員培育出的這種細胞叫少突膠質細胞,它負責在中樞神經系統中產生髓磷脂。髓磷脂在神經纖維周圍形成絕緣層保護神經,并加快神經沖動的傳遞。髓磷脂喪失或受到損壞會產生像多發性硬化這樣的嚴重后果,因為沒有髓磷脂神經就會失去相互之間傳遞神經沖動的能力,其功能就得不到正常發揮。與人類干細胞不同,利用小鼠的胚胎干細胞形成少突膠質細胞相對
羅氏細胞凋亡試劑盒選擇 2010/09/26
細胞凋亡試劑盒選擇羅氏系列細胞凋亡類檢測試劑,產品齊全,常備現貨。羅氏(roche)細胞凋亡試劑盒選擇TestKitsfortheDetectionofDNAFragmentation(通過檢測DNA斷裂來檢測凋亡)ApoptoticDNALadderKitCellularDNAFragmentationelisaCellDeathDetectionELISAPLUSInSituCellDeathDetectionKitsincluding:InSituCellDeathDetectionKit
攪拌器分類及磁力攪拌器的使用注意事項2010/09/17
攪拌器分類及磁力攪拌器的使用注意事項攪拌器是有機化學實驗*的儀器之一,它可使反應混合物混合得更加均勻,反應體系的溫度更加均勻,從而有利于化學反應的進行特別是非均相反應。攪拌的方法有三種:人工攪拌、磁力攪拌、機械攪拌。人工攪拌一般借助于玻棒就可以進行,磁力攪拌是利用磁力攪拌器,機械攪拌則是利用機械攪拌器。磁力攪拌器由于磁力攪拌器容易安裝,因此,它可以用來進行連續攪拌尤其當反應量比較少或在反應是在密閉條件下進行,磁力攪拌器的使用更為方便。但缺點是對于一些粘稠液或是有大量固體參加或生成的反應,磁力攪拌
RNA提取注意事項2010/09/09
RNA提取注意事項一般注意事項一些RNA提取方法,在進行具體實驗時,應根據研究對象的性質,提取核酸的用途而對上述方法在操作步驟和試劑使用量上作一定的修改。1、在核酸提取時,為了增加細胞的裂解度,增加核蛋白復合體破碎度,以釋放更多的游離核酸,在操作中常要用到溶菌酶和蛋白酶K,在確保沒有核酸水解酶存在的前提下,酶反應時間越長越好。2、有時在使用蛋白酶時,為了抑制核酸水解酶的降解作用,可在蛋白酶緩沖液中用終濃度5mM的EDTA代替NaCL,并且可將反應溫度提高到50-60℃,并將反應時間縮短到15-2
細胞計數及活力測定2010/09/06
細胞計數及活力測定一、原理培養的細胞在一般條件下要求有一定的密度才能生長良好,所以要進行細胞計數。計數結果以每毫升細胞數表示。細胞計數的原理和方法與血細胞計數相同。在細胞群體中總有一些因各種原因而死亡的細胞,總細胞中活細胞所占的百分比叫做細胞活力,由組織中分離細胞一般也要檢查活力,以了解分離的過程對細胞是否有損傷作用。復蘇后的細胞也要檢查活力,了解凍存和復蘇的效果。用臺盼蘭染細胞,死細胞著色,活細胞不著色,從而可以區分死細胞與活細胞。利用細胞內某些酶與特定的試劑發生顯色反應,也可測定細胞相對數和
配制percoll細胞分離液2010/08/31
配制percoll細胞分離液(一)原理Percoll是一種包有乙烯吡咯烷酮的硅膠顆粒。滲透壓很低((二)操作方法及注意事項1.不同濃度(密度)Percoll溶液的制備:先用9份Percoll與1份8.5%NaCl或1.5MPBS混合達到生理性滲透壓,然后用生理溶液(0.85%NaCl或0.15MPBS)稀釋到所需濃度。Percoll濃度(%)706050403020比重g/ml1.0901.0771.0671.0561.0431.0312.不連續密度梯度Percoll層的制備:先將試管壁用牛血清
PCR實用技巧2010/08/24
PCR實用技巧增加PCR的特異性:1.primersdesign這是zui重要的一步。理想的,只同目的序列兩側的單一序列而非其它序列退火的primer要符合下面的一些條件1)足夠長,18-24bp,以保證特異性.當然不是說越長越好,太長的primer同樣會降低特異性,并且降低產量2)GC%40%~60%3)5'端和中間序列要多GC,以增加穩定性4)避免3'端GCrich,zui后3個BASE不要有GC,或者zui后5個有3個不要是GC(有人說:3'端是GC/CG/CC/GG。)5)避免3'端的互
細胞培養技術解答2010/08/20
細胞培養技術解答一、細胞培養基礎問答1.BHK細胞就是指BHK21嗎?答:BHK細胞是指幼年敘利亞地鼠腎細胞(BabyHamsterSyrianKidney),1961年建株。原始的細胞株是成纖維細胞,貼壁依賴性。1963年獲得單細胞克隆細胞。后經無數次傳代后細胞可懸浮生長,它廣泛用于增殖各種病毒,生產獸用疫苗。zui常用的是BHK21的一個亞克隆細胞,即克隆13或C13。2.二倍體細胞有什么特點?答:二倍體細胞的染色體組型是2n核型;貼壁依賴接觸抑制;一般可傳代50代;無致瘤性。如W1-38:
關于血清滅活的問題2010/08/19
關于血清滅活的問題滅活的定義:血清通過加熱,滅活的是血清中的補體、支原體等,有人還說包括病毒。有關血清滅活問題1.滅活的定義:血清通過加熱,滅活的是血清中的補體、支原體等,有人還說包括病毒。2.滅活在多數情況下會影響血清的品質,造成生長因子、氨基酸等寶貴的營養成分被部分破壞。3.對不同的細胞,滅活對細胞生長的影響是不同的,多數是不利于細胞生長,有些沒有明顯影響,有極少數細胞在使用滅活的血清后,其生長有輕微的改善。4.血清的生產一般要經過100納米三層濾膜連續濾過,支原體的污染已非常少見,這也是血
用elisa試劑盒檢測樣本的原理和步驟 2010/08/16
用elisa試劑盒檢測樣本的原理和步驟ELISA法定量檢測人細胞液、體液以及組織勻漿中8羥基脫氧鳥苷的含量。試劑組成包被平底微孔板,酶結合物,生物素,標準品,顯色劑A,顯色劑B,終止液,濃縮洗滌液(100倍稀釋),使用說明書名稱規格數量保存包被平底微孔板96孔1可拆卸板2-8℃密封冷藏酶結合物10毫升1瓶2-8℃冷藏生物素1ml1瓶2-8℃冷藏標準品1毫升6瓶2-8℃冷藏顯色劑A6毫升1瓶2-8℃冷藏顯色劑B6毫升1瓶2-8℃避光冷藏終止液6毫升1瓶2-8℃冷藏濃縮洗滌液(100倍稀釋)10毫升
PCR實驗技術2010/08/13
PCR實驗技術PCR(聚合酶鏈式反應)【原理】PCR(polymerasechainreaction)用于在體外將微量的目標DNA大量擴增,以便進行分析。反應體系:①樣品DNA;②引物(primer),是人工合成的一對寡核苷酸鏈(約15-20個核苷酸),用于擴增夾在雙引物與模板DNA互補區之間的區域;③4種dNTP;④TagDNA聚合酶,是從一種嗜熱水生菌(Thermusaquaticus)中分離出來的。此酶zui適作用溫度為75~80℃,但短時間在95℃下不失活。⑤適宜的緩沖體系和適量的Mg2
ELISA實驗數據處理方法2010/08/11
ELISA實驗數據處理方法方法:1、擬和曲線:輸入*行:濃度值,如01050100400輸入第二行:該濃度下的調整后的od值,如00.5861.3971.9973.42選擇這些輸入的數據,用插入里的圖表按鈕,進入圖表向導,在“標準類型”中選擇“xy散點圖”;在“子圖表類型”中選擇“折線散點圖”,按“下一步”;選擇“系列產生在行”,按“下一步”;數據標志,可以填寫:如數據y軸,OD值;數據x軸,濃度;按下一步,點擊完成。可得曲線圖。單擊曲線,按右鍵,選擇“添加趨勢線”,在類型中,選擇多項式;在選項
腫瘤標志物分類、檢測原理和檢測方法2010/08/11
腫瘤標志物分類、檢測原理和檢測方法根據WHO資料,范圍內惡性腫瘤是人類僅次于心腦血管病的第二大死亡原因,占總死亡人數的22%,并逐年增加。10種常見腫瘤:胃癌、肝癌、食管癌、結直腸肛門癌、白血病、子宮頸癌、鼻咽癌、乳腺癌和膀胱癌。腫瘤的早期發現、早期診斷、早期治療是患者獲得長期生存的zui主要途徑。以肝癌為例,腫瘤直徑<2cm,5年生存率幾乎100%;直徑每增加1cm,5年生存率下降20%。腫瘤診斷三大支柱是圖像診斷(包括B超、CT、核磁共振)、化學診斷(血清學和免疫學)及細胞學和組織學診斷,而
LightCycler應用--甲基化分析2010/08/09
LightCycler應用--甲基化分析主要應用:應用實時熒光PCR技術進行快速準確的DNA甲基化分析DNA甲基化是表觀遺傳學的重要研究內容之一,它可以在轉錄水平抑制基因的表達。具體的過程是在胞嘧啶-鳥嘧啶(CpG二核苷酸)的5位碳原子上添加了一個額外的甲基團,形成5-甲基胞嘧啶。CpG二核苷酸密度較高的區域在人體基因組中呈非隨機分布于,優先分布于基因的啟動子區,并被稱為CpG島[1]。對于癌癥,其基因組的甲基化分布發生變化[2]。正常狀態下應甲基化的區域未甲基化,而癥狀狀態下非甲基化區域出現甲
R&D Systems試劑Q&A常見問題解答2010/08/03
R&DSystems試劑Q&A常見問題解答問:R&DSystems有分裝試劑嗎?答:沒有分裝試劑。R&DSystems公司不會分裝,也沒有授權任何公司進行分裝。目前市場上所謂的“RD分裝試劑”是沒有*的3無產品,R&DSystems公司不承擔任何“RD分裝試劑”的售后服務。在此,建議廣大客戶和經銷商從R&DSystems中文上公布的正規經銷商處訂購。抗體問:目錄中抗體的名稱有AB,AF,BAF,MAB之分,它們有何不同?答:帶有AB的抗體是用G蛋白純化的,帶有IgG成分;帶有AF的抗體經G蛋白純
如何選擇Z佳的全血DNA、RNA提取方法?2010/08/03
如何選擇*的全血DNA、RNA提取方法?從全血中提取DNA和RNA應該說是zui基本的工作了,提取的DNA和RNA質量的好壞直接影響了下游的實驗和分析,可供選擇的方法非常多,亂花漸欲迷人眼,如何選擇的方法,成了很多人實驗開始前zui難以抉擇的事情。我們從兩個方面,層層剝繭,分析*的實驗方法。1、全血的采集保存和DNA的提取I.用含抗凝劑的采血管進行采血,抗凝劑一般有EDTA和肝素,EDTA更好一些,不會影響下游的反應,如果沒有采血管,也可以自己添加抗凝劑EDTA,提前準備0.04M的EDTA溶液
移液器的檢測和校準指南2010/07/30
移液器的檢測和校準指南一、實驗室簡單檢測(一)氣密性檢測移液器吸滿液體后,手持垂直放置15s,檢查吸嘴的尖頭有無液滴,如有,則說明漏氣。(二)準確性檢測1)量程小于1μl,建議使用分光光度法檢測。將移液器調至目標體積,然后移取染料溶液,加入一定體積的蒸餾水中,測定溶液的稀釋度(334nm或340nm),重復幾次移液操作,計算移液器的度。2)量程大于1μl,可以用稱重法檢測。通過對水的稱重,轉換成體積(體積=質量/密度),鑒別移液器的準確性。由于水的密度是隨著溫度變化而變化,且稱量天平本身度不符合
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