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HYBOND-P PVDF膜說明書2011/10/19

HYBOND-PPVDF膜說明書美國GE試劑（原安瑪西亞）貨號RPN303F或25006567，品名：HYBOND-PPVDFMEMBRANE30CM（30cm×3m）HYBOND-PPVDF膜30CM30cnX3m/卷常備貨產品，產品描述如下：AmershamHybond™-PHydrophobicpolyvinylidenedifluoride（PVDF）membraneoptimizedforuseinproteintransfersand/orWesternblottingapplica

蛋白質的沉淀方法及常見沉淀劑2011/10/18

蛋白質的沉淀方法及常見沉淀劑蛋白質沉淀的概念：www.runwelltac.com蛋白質分子凝聚從溶液中析出的現象稱為蛋白質沉淀（precipitation），變性蛋白質一般易于沉淀，但也可不變性而使蛋白質沉淀，在一定條件下，變性的蛋白質也可不發生沉淀。定性分析：蛋白質所形成的親水膠體顆粒具有兩種穩定因素，即顆粒表面的水化層和電荷。若無外加條件，不致互相凝集。然而除掉這兩個穩定因素（如調節溶液pH至等電點和加入脫水劑）蛋白質便容易凝集析出。如將蛋白質溶液pH調節到等電點，蛋白質分子呈等電狀態，雖

IHC，ELISA和WB實驗比較2011/09/28

IHC，ELISA和WB實驗比較www.runwelltac.com免疫組化、Western、ELISA，免疫學三大工具，分別用于定位，定性和定量。IHC（免疫組化Immunohistochemistry）是融合了免疫學原理（抗原抗體特異性結合）和組織學技術（組織的取材、固定、包埋、切片、脫蠟、水化等），通過化學反應使標記抗體的顯色劑（熒光素、酶、金屬離子、同位素）顯色，來對組織（細胞）內抗原進行定位、定性及定量的研究（主要是定位）。樣本是細胞或組織，要在顯微鏡下觀察結果，可能出現膜陽性、質陽性

免疫組化抗體選擇及常用染色方法2011/09/21

免疫組化抗體選擇及常用染色方法www.runwelltac.com一、免疫組織化學（Immunohistochemistry,IHC）免疫組織化學是利用抗原抗體的特異性結合的原理，通過化學反應使標記抗體的顯色劑（熒光素、酶、金屬離子、同位素）顯色來確定組織細胞內抗原（多肽和蛋白質），對其進行定位、定性及定量的研究。免疫組織化學染色技術不僅有較高的敏感性和特異性，其特點是將形態學改變與功能、代謝變化結合起來，直接在組織切片，細胞涂片或培養細胞爬片上定位一些蛋白質和多肽類物質的存在，并可到亞細胞結構

細胞培養中無菌操作技術2011/09/14

細胞培養中無菌操作技術細胞培養中的無菌技術：www.runwelltac.com1.實驗進行前，無菌室及無菌操作臺（laminarflow）以紫外燈照射30-60分鐘滅菌，以70%ethanol擦拭無菌操作臺面，并開啟無菌操作臺風扇運轉10分鐘后，才開始實驗操作。每次操作只處理一株細胞株，且即使培養基相同亦不共享培養基，以避免失誤混淆或細胞間污染。實驗完畢后，將實驗物品帶出工作臺，以70%ethanol擦拭無菌操作臺面。操作間隔應讓無菌操作臺運轉10分鐘以上后，再進行下一個細胞株的操作。2.無菌

roche試劑9月現貨選購2011/09/06

roche試劑9月現貨以下均為羅氏現貨9月份現貨庫存，詢價請我司銷售部：，/。4929292001LCCapillaries54709705001FuGENEHDTransfectionReagent，1ML11858882001HIGHPUREVIRALRNAKIT3508838103Protein._K，rec_PCR_Grade_Lyo.10843555001HYGROMYCINB11667165001TRIPURE11684817910InSituCellDeathPOD46931320

熒光素半抗原標記探針2011/08/12

熒光素半抗原標記探針www.runwelltac.com非放射性物質標記核酸探針的方法通常是通過在核酸分子中引入諸如半抗原、生物素等惰性小分子。這些小分子一般通過連接到dUTP等核苷三磷酸上。這種經修飾的核苷三磷酸再通過酶促反應摻入到探針中，例如用于隨機引物法標記長鏈探針或是通過末端轉移酶標記寡核苷酸的3′端。雜交后用與一種酶相連接的抗體（或者如果是生物素，則用鏈霉抗生物素蛋白streptavidin）來檢測，這些酶如堿性磷酸酶或辣根過氧化物酶是用來催化所檢測反應的?？墒褂玫陌肟乖芏?，zui常

常見小鼠采血方法2011/08/01

小鼠給藥與采血常見方法www.runwelltac.com一、小鼠灌胃小鼠灌胃方法比較簡單，需要關注的只有兩點：1）要保持小鼠的頭部和頸部成一直線，方便灌胃針頭進入；2）動作要輕柔，從口角進入，防止損失食道。做的多了自然就熟練了。具體操作過程如下：1.準備灌胃針頭。一般可以從市場上面買到，實在沒有的話，可以用12號的針頭，剪去針尖，用砂紙將頭端磨平，也可以用。但是買的灌胃針頭的頭端用錫或者適宜的方法處理了針頭的銳口，自己用砂紙不可能將所有的銳口都磨掉，用這樣的針頭灌胃，損失小鼠食道的可能性比較大

細胞免疫熒光實驗步驟2011/07/19

細胞免疫熒光實驗步驟www.runwelltac.com1.細胞一定要貼在玻片上（可以放入24孔板），為后面照像打基礎。細胞密度適中，大約60-75%滿片即可，否則容易脫片。2.取出細胞后用4%多聚甲醛固定15分鐘，現用現配。（以下各步驟切毋使玻片干燥）3.PBS沖洗4.0.1%Triton作用20分鐘5.PBS沖洗6.10%正常血清封閉10分鐘7.加入一抗，4度孵育過夜（找個小瓶蓋將小玻片支起來，抗體就不容易溢出），還要記住“砸片”，就是抗體從較高處落到片子上，以分布均勻。抗體稀釋度1：60，

多克隆抗體的免疫電泳2011/07/12

多克隆抗體的免疫電泳【實驗原理】www.runwelltac.com免疫電泳又稱為γ球蛋白電泳或免疫球蛋白電泳技術，這是一種能夠判斷血液中三種免疫球蛋白IgM''IgG''IgA含量水平的實驗方法。在這項實驗技術中，首先利用蛋白質的分子量和所帶電荷的比值運用水平瓊脂糖凝膠電泳技術將蛋白質進行分離，然后將特異性的抗體引入到與電泳方向平行的凹槽中，在抗原和抗體的擴散過程中，抗原和抗體適當比例的結合會導致沉淀的產生（如圖）。0.85%鹽不僅可以終止擴散過程也可用于洗去未結合的蛋白，抗原和抗體結合所形成

FITC熒光素標記抗體2011/06/27

FITC熒光素標記抗體www.runwelltac.com當FITC在堿性溶液中與抗體蛋白反應時，主要是蛋白質上賴氨酸的r氨基與熒光素的硫碳胺鍵（thiocarbmide）結合，形成FITC-蛋白質結合物，即熒光抗體或熒光結合物。一個IgG分子中有86個賴氨酸殘基，一般zui多能結合15～20個，一個IgG分子可結合2～8個分子的FITC，其反應式如下：FITC-N=C=S+N-H2-蛋白質→FITC-NS-C-N-H2-蛋白質常用Marsshall（1958）法標記熒光抗體，也可以根據條件采用

檢測熒光素酶2011/06/15

檢測熒光素酶www.runwelltac.comIntroductionLuciferasecanbeusedasareportergenetomeasuretheactivityofpromoters,and/orthetransfectionefficiency.AimsYouwillbeprovidedwiththeHEK293/COScellsthatyoutransfectedonMonday.Workingingroupsoftwo,takethetwosamplestransfec

脂肪酸的β-氧化過程2011/06/07

脂肪酸的β-氧化過程www.runwelltac.com一、脂肪酸的β-氧化過程肝和肌肉是進行脂肪酸氧化zui活躍的組織，其zui主要的氧化形式是β-氧化。此過程可分為活化，轉移，β-氧化共三個階段。1.脂肪酸的活化脂肪酸參加代謝前和葡萄糖一樣也先要活化。其活化形式是硫酯——脂肪酰CoA，催化脂肪酸活化的酶是脂酰CoA合成酶（acylCoAsynthetase）?；罨笊傻闹oA極性增強，易溶于水；分子中有高能鍵、性質活潑；是酶的特異底物，與酶的親和力大，因此更容易參加反應。脂酰CoA

IL-4拮抗IFN的抗病毒活性測定2011/05/23

IL-4拮抗IFN的抗病毒活性測定www.runwelltac.comIL-4能阻斷IFN對L929細胞的保護作用，其拮抗程度與IL-4濃度相關，據此可通過對L929細胞保護作用的抑制率來反映樣本中IL-4的含量。（1）、取生長良好的L929細胞傾去培養液，加入0．25％胰酶消化后，充分洗滌細胞，調整細胞濃度至1×105—3×105／mL，每孔加100uL，37℃，5％C02溫箱中培養24h。（2）、采用9—10日齡雞胚，制備成纖維細胞單層培養，接種適量VSV病毒。當細胞病變達+++—++++時

亞“G1”峰檢測法檢測細胞凋亡2011/05/16

亞“G1”峰檢測法檢測細胞凋亡處于增殖周期中的細胞，根據其所處不同周期時相（Go/G1、S、G2/M），其DNA含量分布在2n～4n之間。發生凋亡的細胞由于核內DNA裂解成許多小片段，在酒精固定后，用細胞膜通透劑使小分子量的DNA片段穿過胞膜，使細胞原有的DNA部分丟失，僅剩下大片段DNA，這些細胞在DNA染色后，用流式細胞分析術檢測其DNA含量，會出現一個DNA含量＜2n（即＜G1期細胞的分布區，稱為“亞G1峰”。因此處于“亞G1峰”的細胞代表樣品中的凋亡細胞。【樣品來源】（1）懸浮生長的培養

多肽合成方法2011/05/06

多肽合成方法多肽合成方法－N-羧基內酸酐法www.runwelltac.comHermannLeuchs在1906看發現，在N－羧基內酸酐（NCA）中，氨基酸的羧基活化和酰基保護同時發生。因此，在德國文獻中，又稱之為Leuchs－酸酐。原則上，該類衍生物應具備理想的前提條件以應用于多肽合成。*個N－羧基內酸酐（1,3－氧氮雜環戊烷－2,5－二酮）是從N－（乙氧羰基）氨基酸酰氯消除氯乙烷而得到的。制備該類衍生物的一個好方法是游離氨基酸與光氣反應，相應的氨基甲酰氨為中間體。然而，痕量的水就能使N－羧

四氫呋喃（THF）氣相色譜檢測方法2011/04/29

四氫呋喃（THF）氣相色譜檢測方法www.runwelltac.com頭孢噻肟鈉是第三代廣譜頭孢類抗生素，廣泛應用于臨床。其品質的優劣直接影響臨床的療效。因而，快速而準確的檢測產品質量是保證產品的有效手段。我們在依照藥典的標準，對我廠生產的頭孢噻肟鈉進行產品質量的檢驗過程中，摸索建立一個新的、簡便準確的氣相色譜法頭孢噻肟鈉合成品中的殘留溶媒進行測定，該方法能夠快速有效的對殘留溶媒進行檢測，是值得推廣的方法。1實驗部分1．1實驗儀器：GC-17A氣相色譜儀：FID檢測器；色譜柱：HP-FFAP（交

ATP生物發光技術的發展與應用2011/04/22

ATP生物發光技術的發展與應用www.runwelltac.comATP是化學物質三磷酸腺苷的簡稱，存在于所有的生物體中（從微生物到高等動物），ATP在細胞體內主要作用是提供能量。鑒于ATP存在于所有生物體中，利用ATP發光檢測儀檢測ATP，可以間接地證明生物體的存在。隨著食品行業對食品衛生質量要求越來越高，而且ATP生物發光法在檢測食品微生物時簡單、快速且靈敏度高，因此近年來受到廣泛關注。1ATP生物發光技術的發展過程ATP生物發光技術產生于20世紀70年代中期。1983年，Moyer[1]等

免疫組化技術規范2011/04/14

免疫組化技術規范www.runwelltac.com歐美國家相繼開展了免疫組化質量控制工作，建立了一套比較完善的質量控制方法和程序。中國病理工作者委員會（CCP）免疫組化研究中心借鑒國外的先進經驗并結合我國當前的實際情況開始探索一種適合我國免疫組化質控的方法，同時，發現和推廣標準化的染色程序，改善和提高免疫組化實驗的可靠性，使免疫組化技術更具標準化，免疫組化結果更具可靠性和重復性。盡管免疫組化在許多實驗室中已常規開展，但它是一個多步驟、多因素決定的一種實驗方法，由于各實驗室采用的修復方法、染色方

區分抗原類別2011/04/06

區分抗原類別根據抗原是否顯示免疫原性而區分抗原www.runwelltac.com（1）*抗原：即免疫原。根據化學特性，免疫原性zui強的是蛋白質抗原，多糖次之；脂類和核酸如果與蛋白質及多糖形成復合物，可顯示免疫原性。（2）半抗原：因分子質量小僅具有抗體結合特異性，需和載體蛋白連接后方具有免疫原性。此時，半抗原激活B細胞，載體蛋白激活T細胞。換言之，對于半抗原―載體系統，B細胞表位和T細胞表位分別位于半抗原和載體分子。根據B細胞產生抗體是否需要T細胞協助而區分抗原（1）T細胞依賴性抗原（TD―A