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正確清洗實驗器皿的方法介紹2018/08/20

常規(guī)洗滌法（一般容器）1.清洗實驗器皿前先用肥皂洗手。2.先用自來水沖去灰塵，再用毛刷蘸洗滌劑液仔細刷凈內外表面，之后邊刷邊用水沖至無洗滌劑液;3.再用自來水沖洗3～5次，去離子水沖洗3次。4.不便刷洗的實驗器皿先用洗滌劑液浸泡后用水沖洗。洗凈的玻璃器皿內外不掛水珠，器壁上殘留的水用指示劑檢查為中性。5.去污粉不得用于洗滌刻度器皿和玻璃儀器內壁，以防劃傷玻璃。不同材質器皿的洗滌1.銀、鎳和鐵質器皿用NaOH熔融，也可用1：3稀HCl短時間浸泡后用水沖洗2.瑪瑙器皿不宜浸洗，要先用洗滌劑洗后用水沖

細胞培養(yǎng)的一般過程2018/08/20

一、準備工作準備工作對開展細胞培養(yǎng)異常重要，工作量也較大，應給予足夠的重視，準備工作中某一環(huán)節(jié)的疏忽可導致實驗失敗或無法進行。準備工作的內容包括器皿的清洗、干燥與消毒，培養(yǎng)基與其他試劑的配制、分裝及滅菌，無菌室或超凈臺的清潔與消毒，培養(yǎng)箱及其他儀器的檢查與調試。二、取材在無菌環(huán)境下從機體取出某種組織細胞（視實驗目的而定），經過一定的處理（如消化分散細胞、分離等）后接入培養(yǎng)器血中，這一過程稱為取材。如是細胞株的擴大培養(yǎng)則無取材這一過程。機體取出的組織細胞的培養(yǎng)稱為原代培養(yǎng)。理論上講各種動物和人體內

干擾素的產生及作用2018/08/17

干擾素（IFN）是一種廣譜抗病毒劑，并不直接殺傷或抑制病毒，而主要是通過細胞表面受體作用使細胞產生抗病毒蛋白，從而抑制病毒的復制；同時還可增強自然殺傷細胞（NK細胞）、巨噬細胞和T淋巴細胞的活力，從而起到免疫調節(jié)作用，并增強抗病毒能力。干擾素是一組具有多種功能的活性蛋白質（主要是糖蛋白），是一種由單核細胞和淋巴細胞產生的細胞因子。它們在同種細胞上具有廣譜的抗病毒、影響細胞生長，以及分化、調節(jié)免疫功能等多種生物活性。干擾素不能直接滅活病毒，而是通過誘導細胞合成抗病毒蛋白（AVP）發(fā)揮效應。干擾素首

移液管的注意事項2018/07/20

1．移液管(吸量管)不應在烘箱中烘干。2．移液管(吸量管)不能移取太熱或太冷的溶液。3．同一實驗中應盡可能使用同一支移液管。4．移液管在使用完畢后，應立即用自來水及蒸餾水沖洗干凈，置于移液管架上。5．移液管和容量瓶常配合使用，因此在使用前常作兩者的相對體積校準。6．在使用吸量管時，為了減少測量誤差，每次都應從上面刻度（0刻度）處為起始點，往下放出所需體積的溶液，而不是需要多少體積就吸取多少體積。

分享影響培養(yǎng)基滅菌效果的因素2018/07/05

培養(yǎng)基滅菌是否*，影響因素很多，除了培養(yǎng)基內雜菌的種類和數量，滅菌溫度的高低，時間長短外，還取決于：1.營養(yǎng)成分的保持濕熱滅菌時，微生物被殺死的同時，培養(yǎng)基的營養(yǎng)成分也遭到了一定的破壞，特別是氨基酸和維生素。如在121℃，僅20min，就有59%的賴氨酸和精氨酸及其他堿性氨基酸被破壞，蛋氨酸和色氨酸也有相當數量被破壞。在熱的作用下某些營養(yǎng)成分還可能因受熱而相互之間發(fā)生反應，造成培養(yǎng)基中原有營養(yǎng)成分的數量變化，因而影響培養(yǎng)基質量。2.微生物的耐熱性細菌芽孢的熱阻較大，滅菌所需要的時間取決于把細菌芽

細胞用于組織修復具有重要意義2018/07/05

近日，科學家發(fā)現(xiàn)了驅動胚胎干細胞向內皮細胞成熟分化的一條分子機制，內皮細胞是可以形成血管的一類細胞，通過這一機制了解該分化過程對于幫助科學家們有效地將干細胞誘導為內皮細胞用于組織修復具有重要意義。這項研究發(fā)現(xiàn)了兩個能夠調節(jié)胚胎干細胞向內皮細胞分化所需特定基因表達的關鍵酶，這兩個關鍵酶主要負責進行表觀遺傳學修飾。表觀遺傳學修飾是通過對DNA或與DNA相互作用的蛋白添加或去除某種化學基團改變特定基因表達活性，而不改變DNA本身序列的一種基因表達調控方法。研究人員利用小鼠模型對幾種組蛋白去甲基化酶能否

什么因素會影響抗原抗體反應呢？2018/05/25

抗原與抗體發(fā)生特異性結合后，雖由親水膠體變?yōu)槭杷z體，若溶液中無電解質參加，仍不出現(xiàn)可見反應。為了促使沉淀物或凝集物的形成，常用0.85％氯化鈉或各種緩沖液作為抗原及抗體的稀釋液。由于氯化鈉在水溶液中解離成Na+和C1－，可分別中和膠體粒子上的電荷，使膠體粒子的電勢下降。當電勢降至臨界電勢（12～15mV）以下時，則能促使抗原抗體復合物從溶液中析出，形成可見的沉淀物或凝集物。（一）溫度在一定范圍內，溫度升高可加速分子運動，抗原與抗體碰撞機會增多，使反應加速。但若溫度高于56℃時，可導致已結合的抗

血清對細胞生長具有促進作用2018/03/06

血清是一種成分復雜的混合物，且對細胞生長具有促進作用，我們培養(yǎng)細胞離不開血清。那在大規(guī)模細胞培養(yǎng)中由血清引起的細胞生長狀態(tài)不佳及病毒滴度的影響都有哪些表現(xiàn)？1、細胞生長速度緩慢，長滿單層時間長；從同一細胞瓶中分出兩瓶細胞，用同一種培養(yǎng)液，分別加入10％的對照血清和待檢血清，在相同條件下培養(yǎng)72小時，會出現(xiàn)對照血清長滿單層，而待檢血清大約只有60～70％，這種血清就不適合用來大規(guī)模培養(yǎng)細胞。2、細胞傳代后形態(tài)不正常，細胞狀態(tài)發(fā)生變化；由于血清的質量問題，使原本狀態(tài)正常的細胞經傳代后形態(tài)會變差；比如

體外細胞的原代培養(yǎng)、傳代培養(yǎng)2018/03/05

一、實驗原理細胞培養(yǎng)可分為原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)。直接從體內獲取的組織細胞進行培養(yǎng)為原代培養(yǎng)；當原代培養(yǎng)的細胞增殖達到一定密度后，則需要做再培養(yǎng)，即將培養(yǎng)的細胞分散后，從一個容器以1：2或其他比率轉移到另一個或幾個容器中擴大培養(yǎng)，為傳代培養(yǎng)，傳代培養(yǎng)的累積次數就是細胞的代數。細胞凍存及復蘇的基本原則是慢凍快融，實驗證明這樣可以限度的保存細胞活力。目前細胞凍存多采用甘油或DMS作保護劑，這兩種物質能提高細胞膜對水的通透性，加上緩慢冷凍可使細胞內的水分滲出細胞外，減少細胞內冰晶的形成，從而減少由于冰晶形

常規(guī)細胞培養(yǎng)初代消化培養(yǎng)法2017/11/30

1.準備：取各種已消毒的培養(yǎng)用品置于凈化臺面，紫外線消毒20分鐘。開始工作前先洗手、75%酒精擦拭手至肘部。2.布局：點燃酒精燈，安裝吸管帽。3.處理組織：把組織塊置于燒杯中，用Hanks液漂洗2~3次，去除血污；如懷疑組織可能污染，可先置于含有青鏈霉素的混合液中30~60分鐘。4.剪切：用眼科剪把組織切成2~3毫米大小的塊，以便于消化。加入比組織塊總量多30~50倍的胰蛋白酶液，然后一并倒入三角燒瓶中，結扎瓶口或塞以膠塞。5.消化：或用恒溫水浴，或置于37℃溫箱消化均可，消化中每隔20分鐘應搖

抗體是怎么形成的？2017/11/30

抗體是怎么形成的？抗原進入機體后,首先一部分被抗原提呈細胞捕獲,加工處理后呈遞給Th（T細胞輔助細胞,使Th細胞活化,另一部分直接跟B細胞表面的抗原受體（BCR）結合,產生刺激B細胞活化的信號,然后活化的Th細胞給B細胞第二個刺激信號,這時B細胞就被活化產生抗體,和抗原特異性的結合.然后抗體通過自身的巨噬細胞,中性粒細胞等吞噬細胞的受體與這些細胞結合,介導抗原抗體復合物被吞噬,進而被降解.體液免疫：生發(fā)中心母細胞的輕鏈和重鏈V基因可發(fā)生高頻率的點突變,在抗原誘導的情況下產生.在初次免疫應答時,大

細胞培養(yǎng)2017/09/13

一、動物細胞培養(yǎng)在所有的細胞離體培養(yǎng)中，zui困難的是動物細胞培養(yǎng)。下面是它所需要的特殊條件。⑴血清：動物細胞離體培養(yǎng)常常需要血清。zui常用的是小牛血清。血清提供生長必需因子，如激素、微量元素、礦物質和脂肪。有一天人們真正學會了配制和血清一樣的培養(yǎng)液，那時血清才可被取代。在這里，血清等于是動物細胞離體培養(yǎng)的天然營養(yǎng)液。⑵支持物：大多數動物細胞有貼壁生長的習慣。離體培養(yǎng)常用玻璃，高速冷凍離心機，塑料等作為支持物。⑶氣體交換：二氧化碳和氧氣的比例要在細胞培養(yǎng)過程中不斷進行調節(jié)，不斷維持所需要的氣體

對于血清的研究2017/08/29

血清對于在傳統(tǒng)培養(yǎng)基配方中生長和增殖的大多數細胞系來說是需要的，因為大多數單獨的培養(yǎng)基并不能提供細胞生長所需要的全部營養(yǎng)，如MEM培養(yǎng)基，較為常用的量為8％～10％的比例，原代培養(yǎng)使用量為15%～20%，而特殊的低血清培養(yǎng)基血清量可降至3％左右，細胞的形態(tài)和功能不受影響。血清是非常復雜的混合物，成分多樣，對細胞生長具有促進作用：1）提供基本營養(yǎng)物質，如氨基酸、維生素、無機物、脂類物質、核酸衍生物等，是細胞生長必須的物質；2）提供激素和各種生長因子，如胰島素、腎上腺皮質激素（、地塞米松）、類固醇激

淋巴細胞分離液的原理及應用2017/08/24

淋巴細胞分離液是一種根據細胞密度差異，借助離心產生的重力加速度，進行細胞的分離純化的常用試劑。常用的淋巴細胞分離液有Ficoll淋巴細胞分離液、Percoll淋巴細胞分離液。Ficoll與Percoll分離單個核細胞的方法均為密度梯度離心法。淋巴細胞分離液的原理：外周血中單個核細胞和單核細胞,其體積、形態(tài)和密度與其他細胞不同.淋巴細胞分離液是一種密度介于1.075∽1.090之間而近似于等滲的溶液,用它做密度梯度離心,使一定密度的細胞按相應密度梯度分布,從而將各種血細胞加以分離。基本應用：可用于

無血清培養(yǎng)基的使用方法2017/08/23

無血清培養(yǎng)基的使用方法目前，血清仍是動物細胞培養(yǎng)中zui基本的的添加物，尤其是在原代培養(yǎng)或者細胞生長狀況不良時，常常會先使用有血清的培養(yǎng)液進行培養(yǎng)，待細胞生長旺盛以后，再換成無血清培養(yǎng)液。細胞轉入無血清培養(yǎng)基培養(yǎng)要有一個適應過程，一般要逐步降低血清濃度，從10%減少到5%，3%，1%，直至無血清培養(yǎng)。在降低過程中要注意觀察細胞形態(tài)是否發(fā)生變化，是否有部分細胞死亡，存活細胞是否還保持原有的功能和生物學特性等。在實驗后這些細胞一般不再繼續(xù)保留，很少有細胞能夠長期培養(yǎng)于無血清培養(yǎng)基而不發(fā)生改變的。細胞

白細胞介素的基本介紹及重要性2017/07/25

白細胞介素是由多種細胞產生并作用于多種細胞。由于zui初是由白細胞產生又在白細胞間發(fā)揮作用，所以由此得名，現(xiàn)仍一直沿用。白細胞介素interleukin縮寫為IL。有來源于淋巴細胞或巨噬細胞等許多因子參與。來源于淋巴細胞的有淋巴細胞活素，來源于巨噬細胞的總稱為monokine，其中的各個因子的生物活性各有不同（例如巨噬細胞活化，促進T細胞繁殖等），因子自身的物理化學性質多不清楚。研究團體提出了在淋巴細胞活素及巨噬細胞因子（monoki-ne）中，已作為一種提純并弄清了性質的稱為白細胞間[殺菌]素

細胞培養(yǎng):細胞生長緩慢怎么辦?2017/06/16

在細胞培養(yǎng)的實驗中，難免會遇到這樣那樣的問題，比如細胞不貼壁、HP值變化迅速、細胞凋亡、等等。細胞生長緩慢1.培養(yǎng)基或血清改變：比較不同培養(yǎng)基配方中葡萄糖、氨基酸及其他成分有無差異；通過生長實驗比較新老批次血清有無差異；增大細胞初始接種密度；使細胞逐步適應新的培養(yǎng)基。2.必需生長促進成分（如L-谷氨酰胺或生長因子）耗竭、缺乏或分解：去除原培養(yǎng)基，加入新鮮培養(yǎng)基；向培養(yǎng)基中添加生長促進成分（如L-谷氨酰胺）。3.輕度細菌或真菌污染：在不添加抗生素的條件下進行培養(yǎng)，如細胞被污染，滅菌處理后丟棄。4.

轉化細胞培養(yǎng)的基本過程2017/05/22

一、準備工作準備工作對開展細胞培養(yǎng)異常重要,工作量也較大,應給予足夠的重視,準備工作中某一環(huán)節(jié)的疏忽可導致實驗失敗或無法進行.準備工作的內容包括器皿的清洗、干燥與消毒,培養(yǎng)基與其他試劑的配制、分裝及滅菌,無菌室或超凈臺的清潔與消毒,培養(yǎng)箱及其他儀器的檢查與調試,具體內容可參閱有關文獻.二、取材在無菌環(huán)境下從機體取出某種組織細胞,經過一定的處理(如消化分散細胞、分離等)后接入培養(yǎng)皿中,這一過程稱為取材.如是細胞株的擴大培養(yǎng)則無取材這一過程.機體取出的組織細胞的培養(yǎng)稱為原代培養(yǎng)。三、培養(yǎng)將取得的組織

RNA純化方法及沉淀2017/05/18

RNA純化要求---RNA樣品中不應存在對酶（如逆轉錄酶）有抑制作用的有機溶劑和過高濃度的金屬離子，避免其他生物大分子如蛋白質，多糖和脂類分子的污染，排除DNA分子的污染。一、RNA純化方法及沉淀---有機溶劑抽提法1、抽提在使用RNA提取試劑進行RNA提取時，常使用進行抽提，以去除蔗糖、蛋白質等雜質，并促進水相與有機相的分離，從而達到純化RNA的目的。抽提RNA后，一般采用異丙醇或乙醇來沉淀水相RNA。加入0.6倍水相體積的異丙醇或與水相等體積的異丙醇，室溫沉淀20-30min，高速離心，可獲

影響細胞生長的幾點因素2017/04/13

影響細胞生長的幾點因素，摘要：細胞在體外進行培養(yǎng),失去了機體的調節(jié)和控制,因此,除滿足營養(yǎng)的要求外,還必須使細胞生存環(huán)境晝接近活體的環(huán)境.外環(huán)境的培養(yǎng)條件如溫度、滲透壓、酸堿度等均能影響細胞的生長.一、溫度：一般哺乳類及禽類細胞體外培養(yǎng)的適宜溫度是37~38℃.溫度過高或過低都會影響到細胞的生長.細胞耐受低溫的能力比抗熱的能力強,在低溫下,細胞的代謝活力及核分裂降低.溫度低于0℃時,雖影響細胞代謝,但并無傷害作用.把細胞置于23~25℃時,細胞仍能生存和生長,但速度減緩,不過,魚類細胞的適宜培養(yǎng)