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組織細胞內抗原的固定性2017/04/13

組織細胞內抗原的固定是免疫酶標和非標記免疫酶組織化學方法中的重要環節。經過固定，可以達到如下目的：1.標本在玻片上的吸著力增加；2.標本所含的類脂和蠟質等成分可以除去，從而有利于抗原與酶標記抗體的結合；3.標本的保存時間可以增長，組織切片固定后，在－20℃，可以存放一年以上而不改變免疫酶技術的染色；組織內有關抗原不同，則所用固定劑與固定方法也隨之改變。丙酮和乙醇是常用的兩種固定劑。但對于許多病毒與細菌的定位研究，選擇丙酮和四氯化化碳作為固定劑是zui合適的；對于可溶性蛋白抗原的定位，常用乙醇；對

細胞膜的作用2017/04/13

細胞膜的主要功能:細胞膜對于細胞整個結構的完整性以及細胞的正常生命活動都是至關重要的。其功能概括起來有以下幾個方面。(1)細胞的界膜，這是細胞膜zui重要的功能。無論是真核細胞還是原核細胞，都必定有一個由一定膜結構形成的界膜，不然的話就不會有細胞存在。細胞膜的出現使生命起源到了細胞的形式，也保證了細胞生命活動的正常進行。細胞膜的出現使各種生物大分子集中到一個相對穩定的微環境中，這樣有利于細胞的物質和能量代謝，也有利于細胞的生長發育。(2)物質的跨膜運輸膜的存在使細胞成為一個相對獨立的系統，但細胞

培養細胞污染的來源2017/03/23

污染來源細胞培養過程中污染的來源主要有以下幾條途徑：1、不潔的動物組織標本很多動物組織本該是無菌的(直接與外界相通的呼吸道和消化道、泌尿系統除外)，但由于取材時不小心也會有污染的機會。組織本身含有細菌，如取材時不用濃的抗生素洗液洗滌浸泡，也會帶菌，造成細胞污染。2、空氣空氣中含有大量的微生物，如果操作室與外界隔離不嚴或消毒不充分下，很容易造成污染。另外，凈化工作臺使用過久，濾板未定期更換或長久不更換，濾氣受塵埃堵塞，工作時不帶口罩或外界氣流過強，污染空氣進入操作區，也會導致污染。春夏季南方地區多

免疫組化實驗注意事項2017/03/09

免疫組化實驗注意事項1.蘇木素復染時間需要摸索，尤其陽性染色也在細胞核上。2.DAB顯色時間需要達到*化，鏡下觀察達到陽性染色明顯但背景不太深。3.抗體孵育時間和抗體濃度需要摸索。尤其一抗孵育溫度在4度。4.切片脫蠟和水化要充分；加反應液時要覆蓋組織充分；每次加液前甩干洗滌液，但又防止干片；用組化筆畫圈時盡量畫大一點，否則墨水排斥液體，引起片周邊干片。5.片子著色不均勻的原因如下：（1）脫蠟不充分。可以60℃烤20min，立即放入新鮮的xylene1；（2）水化不全。應經常配制新鮮的梯度乙醇；（

流式細胞術——補償微球篇2017/02/23

—多色流式分析的福音由于熒光光譜的重疊現象，在進行流式多色分析時，必須設置單染管進行熒光補償。OneComp/UltraCompeBeads微球大小和淋巴細胞相當，可連接各種熒光標記的抗體來調節補償。每滴微球中都含有兩群：一群是可以結合抗體的陽性群，一群是不會與抗體反應的陰性群。優點●使用方便，一滴即可。●與所有小鼠、大鼠和倉鼠來源的抗體反應，無論它們的輕鏈是kappa還是lambda。●適用于各種激發光---適用于488nm藍光，532nm綠光，561nm黃光，633-635nm紅光，Ultr

細胞核的分離提取2017/01/05

細胞核的分離提取（一）操作步驟1．用頸椎脫位的方法處死小白鼠后，迅速剖開腹部取出肝臟，剪成小塊（去除結締組織）盡快置于盛有0.9％NaCl的燒杯中，反復洗滌，盡量除去血污，用濾紙吸去表面的液體。2．將濕重約1g的肝組織放在小平皿中，用量筒量取8ml預冷的0.25mol／L蔗糖一0.003mol／L氯化鈣溶液，先加少量該溶液于平皿中，盡量剪碎肝組織后，再全部加入。3．剪碎的肝組織倒入勻漿管中，使勻漿器下端浸入盛有冰塊的器皿中，左手持之，右手將勻漿搗桿垂直插入管中，上下轉動研磨3～5次，用3層紗布過

培養基傳代細胞的制備操作方法2016/12/13

（一）原理體外培養基的原代細胞或細胞株要在體外持續地培養就必須傳代，以便獲得穩定的細胞株或得到大量的同種細胞，并維持細胞種的延續。培養的細胞形成單層匯合以后，由于密度過大生存空間不足而引起營養枯竭，將培養的細胞分散，從容器中取出，以1:2或l:3以上的比率轉移到另外的容器中進行培養，即為傳代培養。細胞“一代”指從細胞接種到分離再培養的一段期間，與細胞世代或倍增不同。在一代中，細胞培增3～6次。細胞傳代后，一般經過三個階段：游離期、指數增生期和停止期。常用細胞分裂指數表示細胞增殖的旺盛程度，即細胞

PVDF膜蛋白染色步驟2016/11/25

一、所需試劑1.2%麗春紅S濃貯存液（3-羥基-4-[2-磺基-4-硫代-苯偶氮基]-2，7-萘二磺酸）：溶于30%三氯醋酸和30%磺基水楊酸中。貯存液可在室溫下穩定存放1年以上。2.PBS。www.runwelltac.com二、操作步驟1.在染色之前，先配制麗春紅S的應用液。即將2%的麗春紅S濃貯存液用1%醋酸1:10稀釋即成為應用液（注意：如果使用硝酸纖維膜，須將麗春紅S應用液更換為用水1:10稀釋）；2.用麗春紅S應用液將PVDF膜洗1次；3.加入新鮮稀釋的麗春紅S應用液，并在室溫下攪動

免疫組化抗原修復注意事項2016/11/24

免疫組化抗原修復注意事項1、pH的應用范圍及選擇抗原修復液的pH非常重要，有效的抗原修復pH要比修復液的化學成分更重要，同樣的修復液隨著pH的升高染色的強度逐漸增強，但*pH范圍為6.0-10.0。目前大家*的的抗原修復液是pH6.0的檸檬酸鹽緩沖液和pH8.0的EDTA緩沖液。作為通用修復液堿性pH的修復液要比酸性的有效，而對固定很長時間舊的存檔組織，酸性pH的修復液則優于堿性的修復液。2、抗原修復時應選擇*溫度70-90℃的溫度對未經固定的蛋白質可發生變性，但經福爾馬林固定的蛋白質，溫度必須

常用培養基的制備2016/11/16

培養基（Medium）是供微生物、植物和動物組織生長和維持用的人工配制的養料，一般都含有碳水化合物、含氮物質、無機鹽（包括微量元素）以及維生素和水等。以下介紹培養基的制備流程：一、配料按培養基處方準確稱取各種成分，先在三角燒瓶中加入少量蒸餾水，再加入各種成分，以防蛋白胨等粘附于瓶底，然后再以剩余的水沖洗瓶壁。二、溶化將各種成分混勻于水中，以流通蒸氣溶化半小時，如在電爐上溶化應隨時攪拌，如有瓊脂成分時更應注意防止外溢。溶化完畢，補足失去的水分。三、矯正pH1.pH測定取與標準管同口徑的試管（通常用

培養基分為哪些類型2016/10/28

由于各種所需要的營養不同，所以培養基的種類很多。據估計目前約有數千種不同的培養基，這些培養基可根據所含成分、物理狀態、以及不同的使用目的等而分成若干類型。1.按照培養基的成分來分培養基按其所含成分，可分為合成培養基、天然培養基和半合成培養基三類。（1）合成培養基。合成培養基的各種成分*是已知的各種化學物質。這種培養基的化學成分清楚，組成成分，重復性強，但價格較貴，而且微生物在這類培養基中生長較慢。如高氏一號合成培養基、察氏（Czapek）培養基等。（2）天然培養基。由天然物質制成，如蒸熟的馬鈴薯

預防細胞污染及污染后對策2016/10/18

污染向來是在細胞培養中的大問題。預防或治理污染是細胞培養成功的關鍵因素。我們在細胞培養時，在開始階段就要十分重視污染問題，否則會前功盡棄，這樣不僅浪費時間，也會浪費人力、物力。(一)有哪幾類污染？在細胞培養過程中的污染不只是指微生物，而且還包括所有混入培養環境中的、對細胞生存有害或造成細胞不純的物質，包括生物和化學物質。1、細菌污染細菌污染是實驗室細胞培養中常見的污染，即使在細胞培養液中加入了抗菌素，也可能因為操作不慎而引起污染。zui常見的有革蘭氏陽性菌，如枯草桿菌以及大腸桿菌、假單胞菌等革蘭

微生物培養基及其成分2016/10/09

培養基通常指人工配制的適合微生物生長繁殖或積累代謝產物的營養物質。廣義上說，凡是支持微生物生長和繁殖的介質或材料均可以作為微生物的培養基。培養基的種類繁多，因考慮的角度不同，可將培養基分成以下一些類型：天然培養基：利用生物組織、器官及其抽取物或制品配成；根據對培養基成分了解的程度合成培養基：使用成分*了解的化學藥品配制而成；半合成培養基：由部分天然材料和部分已知的純化學藥品組成液體培養基：各營養成分按一定比例配制而成的水溶液或液體狀態的培養基；根據培養基物理狀態固體培養基：液體培養基中加入一定量

細胞裂解方法及細胞裂解液的特點2016/10/09

細胞裂解方法包括化學裂解、酶裂解和機械裂解。化學裂解和酶裂解通常是比較溫和的方法，通常會很少使DNA斷裂。這兩種方法（包括SDS和溶菌酶處理等）提取純化DNA中常用的方法。機械裂解可以更均一的裂解細胞，同化學裂解相比，機械處理具有更高的裂解效率和更低的選擇性。機械處理可以更劇烈和全面的裂解細胞，但也會造成DNA的斷裂。常用的方法是裂解液處理法細胞裂解液的主要目的：1.利用去污劑破壞脂質雙分子層，破裂細胞；2.溶解蛋白；3.蛋白變性使其穩定；4.抑制蛋白酶活性含有多種細胞裂解成分和蛋白酶抑制成分，

如何選擇蛋白酶抑制劑以提高蛋白純化率2016/09/22

當細胞破碎的時候，蛋白水解酶就會被釋放出來或被激活，使電泳結果復雜化，影響zui終結果分析。為了避免這些情況的出現，建議在樣品制備時盡可能在低溫下進行。此外，許多蛋白酶在PH9以上就失活了，因此Tris堿，碳酸鈉或堿性載體兩性電解質往往能抑制蛋白水解。但是有些蛋白酶在上述條件下仍然保持著活性，此時應當使用蛋白酶抑制劑。因此對于我們想要研究的蛋白來說，選擇性和有效的抑制這些蛋白酶對于蛋白純化路線設計來說顯得尤為重要。蛋白酶抑制劑與蛋白酶一樣，都是紛繁復雜的，通常使用許多化學物質作為蛋白酶抑制劑，如

培養基的濃度和理化2016/09/22

培養基的濃度和理化在同等條件下經多次使用無污染后，就沒必要再擺3d后才使用，而是冷卻凝固后就可使用了。(1)防塵已經滅好菌的培養基要注意防塵。如果培養基在衛生條件差的地方貯存，依附在塵埃中的細菌、真菌等會落在培養瓶表面，使用前若不進行表面滅菌處理，培養基的濃度和理化在接種時就容易隨著氣流進入容器，使其受到污染，影響組織培養工作的順利進行，因此培養基必須放在干凈、衛生的接種室內。(2)避光備用培養基應貯于光線較暗的房子里面，因為吲哚乙酸等某些物質易見光分解。在光照下，一些培養基添加物的成分也會發生

細胞支原體污染的熒光檢測方法2016/09/22

DNA螢光染色法·原理︰利用螢光染劑（bisbenzimide,Hoechst33258）偵測支原體污染。此染劑會結合到DNA之Adenosine-Thymidine（A-T）rich區域，因為支原體之DNA中A-T含量占多數（55～80%），所以可將其染色而偵測。被支原體污染之細胞經染色后，在細胞核外與細胞周圍可看到許多大小均一之螢光小點，即為支原體之DNA，證明有支原體之污染。·特點︰簡單、經濟與靈敏，廣泛使用，可作為例行之偵測步驟。可以偵測不易培養之支原體，例如M.hyorhinis，較直

怎么理解抗體的功能、規律？2016/09/21

抗體(英語:antibody)，(免疫球蛋白不僅僅只是抗體)是一種由漿細胞(效應B細胞)分泌，被免疫系統用來鑒別與中和外來物質如細菌、病毒等的大型Y形蛋白質，僅被發現存在于脊椎動物的血液等體液中，及其B細胞的細胞膜表面。抗體能識別特定外來物的一個*特征，該外來目標被稱為抗原。功能：抗體的主要功能是與抗原（包括外來的和自身的）相結合，從而有效地清除侵入機體內的微生物、寄生蟲等異物，抗體（antibody）是一種應答抗原產生的、可與抗原特異性結合的蛋白質。每種抗體與特定的抗原決定基結合。這種結合可以

細胞分離技術2016/09/21

離心是研究如細胞核、線粒體、高爾基體、溶酶體和微體，以及各種大分子基本手段。一般認為，轉速為10~25Kr/min的離心機稱為高速離心機；轉速超過25Kr/min，離心力大于89Kｇ者稱為超速離心機。目前超速離心機的zui高轉速可達100Kr/min，離心力超過500Kg。在密度均一的介質中由低速到高速逐級離心，用于分離不同大小的細胞和細胞器。在差速離心中細胞器沉降的順序依次為：核、線粒體、溶酶體與過氧化物酶體、內質網與高基體、zui后為核蛋白體。由于各種細胞器在大小和密度上相互重疊，而且某些慢

免疫組織染色注意事項2016/09/02

免疫組織染色注意事項，1、概念和基本原理免疫組織化學又稱免疫細胞化學，是指帶顯色劑標記的特異性抗體在組織細胞原位通過抗原抗體反應和組織化學的呈色反應，對相應抗原進行定位、定性、半定量測定的一項新技術。它把免疫反應的特異性和組織化學的可見性巧妙地結合起來，借助顯微鏡的現像和放大作用，在細胞、亞細胞水平檢測各種抗原物質，并可在原位顯示相應的基因和基因表達產物。免疫組織化學方法種類現已有：免疫熒光組織（細胞）化學技術、免疫酶組織（細胞）化學技術、親和組織化學技術、免疫金銀及鐵標記免疫組織化學技術等。免