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流式細胞凋亡實驗原理2016/03/30

其原理主要是根據細胞凋亡時在細胞、亞細胞和分子水平上所發生的特征性改變。這些改變包括細胞核的改變、細胞器的改變、細胞膜成分的改變和細胞形態的改變等，其中細胞核的改變特征性，主要包括以下幾個方面：1.細胞核的改變由于凋亡細胞核的改變，造成各種染色體熒光染料對凋亡細胞DNA可染性發生改變。研究表明，用各種染色體熒光染料對經固定的凋亡細胞進行染色，其DNA可染性降低。許多學者把這種DNA可染性的降低認為是凋亡細胞的標志之一。2.光散射特性凋亡細胞形態上的改變影響它們的光散射特性。在流式細胞儀上，前散射

細胞污染的檢測與排除2016/03/29

細胞污染主要是指細胞培養液中混入對細胞生存有害的成分或細胞成分不純。細胞培養時的污染主要包括3個方面：①微生物污染：如支原體、病毒、細菌和真菌。②化學污染：如重金屬或其他非培養必需化學試劑。③細胞交叉污染。一、細胞污染的檢測(一)真菌污染在微生物污染中，以真菌污染zui多。zui常見真菌：煙曲霉、黑曲霉、毛霉菌、白念珠菌、酵母菌等。真菌種類繁多，形態各異，但污染后很容易發現。肉眼可見，大多呈白色或zui黃色小點漂浮于培養液表面；鏡下觀察呈絲狀、管狀或樹枝狀菌絲，縱橫交錯穿行于細胞之間。但是念珠菌

單克隆與多克隆抗體的區別2016/03/25

這首先要從抗體的產生來探討。把某一抗原免疫某種動物而得到單抗或多抗。如果用經免疫過的動物的脾細胞獲得雜交瘤細胞，則得到單克隆抗體，如果用動物的血清，則得到多克隆抗體。但從理論上說，這些抗體都應針對抗原來自的動物，例如如果用抗原免疫小鼠，則這些為鼠抗人。由于一個大蛋白分子表面具有多種抗原決定簇，因此，免疫動物后，這些不同的決定簇分別誘導動物產生不同的抗體，每種抗體的特異性不同。單抗是有單個細胞起源的細胞克隆分泌的，所以只針對蛋白抗原的單一抗原決定簇，而多抗是有多個不同克隆的B細胞產生的，是多種細胞

污染的預防2016/03/25

細胞培養所用物品清洗、消毒要*，各種溶液滅菌除菌要仔細，并在無菌試驗陰性后才能使用。操作室及剩余的無菌器材要定期清潔消毒滅菌。抗生素對殺滅細菌較有效。聯合用藥比單獨用藥效果好。預防用藥比污染后再用藥效果好。預防用藥一般用雙抗生素（青霉素100u/mL加鏈霉素100μg/mL），污染后清除用藥需采用大于常用量5～10倍的沖洗法，于加藥后作用24～48小時，再換常規培養液。此法在污染早期可能有效。所用抗生素品種除青霉素、鏈霉素外，還可用慶大霉素、卡那霉素、多粘菌素、四環素、制霉菌素等。常用400～8

細胞培養的訣竅2016/03/24

1.確保所有實驗室材料都無菌交叉污染是細胞培養的大敵。即使是zui輕微的污染，也可能毀了幾個星期的成果。因培養箱內溫暖潮濕，真菌極易生長，因此必須注意定期清潔。此外，在將培養瓶、移液管及其他的相關物品放入超凈臺之前，應用酒精擦拭干凈，以避免污染。2.小心處理您的培養物細胞培養的脆弱性怎么強調也不為過。劇烈搖晃，或連續的溫度波動可能會對生長產生不利的影響。確保培養箱是水平的，溫度均一，且遠離電動儀器。此外，盡量避免一次處理多個細胞系，因為它可能會影響細胞的基因型和表型。您還應定期完成STR圖譜分析

地高辛檢測2016/03/24

地高辛標記技術源于一種從洋地黃類植物（毛地黃和毛花毛地黃）中提取的類固醇物質—Digoxidenin（DIG）。由于洋地黃植物的花和葉片Digoxidenin在自然界中的*來源，因此抗DIG的抗體不會與其他的生物物質結合，從而可以滿足特異性標記的需要。這一點，正式DIG勝于生物素的（Biotin）的地方—同樣是小分子標記物，生物素廣泛存在于各種組織中，對于靈敏度很高的標記檢測實驗來說，樣品自身含有的內源生物素，就會對結果產生干擾。地高辛就能夠很好地避免這個問題。地高辛技術特點可用于標記核苷酸或蛋

學習凋亡試劑盒的檢測步驟2015/12/21

實驗方法該實驗采用的是經過優化的喜樹堿誘導Jurkat細胞系凋亡實驗條件。其他類型的細胞需做相應調整。該試劑盒在傳統及Attune?聲波聚焦流式細胞儀上驗證過，使用Attune?聲波聚焦流式細胞儀時，各種流速（25μL/min到1,000μL/min）都可以。1.用有效方法誘導凋亡；設一不加誘導的陰性對照。2.孵育之后收集細胞并用冷的PBS洗滌。3.制備1×annexinV結合緩沖液：按10次分析的量計算，加1mL試劑C到4ml的去離子水中。4.制備100μg/mL的PI工作液：用45μl1×a

如何鑒別假冒偽劣ELISA試劑盒2015/12/21

在國內生物研究蓬勃發展的現在，假冒無視科學研究的嚴謹性和嚴肅性，讓廣大的科研工作者被動造假，嚴重破壞了科研氛圍，擾亂了市場秩序，聯科生物整理了一些鑒別這些假冒偽劣ELISA試劑盒的方法，供廣大的科研工作者和用戶參考，讓希望對廣大科研工作者有所幫助。購買前【方法一】向廠家索要或從其下載說明書，查找ELISA的性能指標：準確度(加標回收率、稀釋線性)、精密度(板內差、板間差)、靈敏度、樣本值、特異性、校準。一般來說，除了校準不一定每份說明書都有外，其余的指標一般都需要羅列(部分樣本需要高倍稀釋的，可

學習區分血清和血漿的不同2015/12/09

血液凝固析出的淡黃色透明液體。如將血液自血管內抽出，放入試管中，不加抗凝劑，則凝血反應被激活，血液迅速凝固，形成膠凍。凝血塊收縮，其周圍所析出之淡黃色透明液體即為血清，也可于凝血后經離心取得。在凝血過程中，纖維蛋白原轉變成纖維蛋白塊，所以血清中無纖維蛋白原，這一點是與血漿zui大的區別。而在凝血反應中，血小板釋放出許多物質，各凝血因子也都發生了變化。這些成分都留在血清中并繼續發生變化，如凝血酶原變成凝血酶，并隨血清存放時間逐漸減少以至消失。這些也都是與血漿區別之處。但大量未參加凝血反應的物質則與

ELISA常見樣本收集處理方法2015/12/09

ELISA檢測的目的是為實驗提供準確可靠定量分析實驗的依據。為了保證實驗數據的可靠性，在實驗過程中必須堅持全面質量控制和全過程質量控制。在收集標本前都必須有一個完整的計劃。以下是聯科生物整理的ELISAzui常見的幾種樣本收集處理方法：1．細胞培養上清細胞培養液在2500rpm/min離心20分鐘后，收集上清即刻檢測，或者分裝，-20℃貯存。避免反復凍融。2．血清樣本分離管分離血清。在1000g離心之前，使血樣凝集30分鐘。吸取血清樣本之后即刻檢測，或者分裝，-20℃貯存。避免反復凍融。3.血漿

為什么ELISA反應總是需要一定時間的溫育？2015/11/18

在ELISA中一般有兩次抗原抗體反應，即加標本和加酶結合物后。抗原抗體反應的完成需要有一定的溫度和時間，這一保溫過程稱為溫育(incubation)，有人稱之為孵育，在ELISA中似不恰當。ELISA屬固相免疫測定，抗原、抗體的結合只在固相表面上發生。以抗體包被的夾心法為例，加入板孔中的標本，其中的抗原并不是都有均等的和固相抗結合的機會，只有zui貼近孔壁的一層溶液中的抗原直接與抗體接觸。這是一個逐步平衡的過程，因此需經擴散才能達到反應的終點。在其后加入的酶標記抗體與固相抗原的結合也同樣如此。這

血清標本如何采取和保存2015/11/18

ELISA技術的-操作要點的試劑，良好的儀器和正確的操作是保證ELISA檢測結果準確可靠的必要條件。ELISA的操作因固相載體的形成不同而有所差異，國內醫學檢驗一般均用板式點。標本的采取和保存可用作ELISA測定的標本十分廣泛，體液(如血清)、分泌物(唾液)和排泄物(如尿液、糞便)等均可作標本以測定其中某種抗體或抗原成份。有些標本可直接進行測定(如血清、尿液)，有些則需經預處理(如糞便和某些分泌物)。大部分ELISA檢測均以血清為標本。血漿中除尚含有纖維蛋白原和抗凝劑外，其他成份均同等于血清。制

elisa試劑盒操作步驟2015/11/09

1.標準品的稀釋與加樣：在酶標包被板上設標準品孔10孔，在*、第二孔中分別加標準品100μl，然后在*、第二孔中加標準品稀釋液50μl，混勻；然后從*孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50μl，混勻；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉，再各取50μl分別加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul，混勻；混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl，混勻后從第七、

ELISA試劑盒測定方式4步驟2015/11/09

要使ELISA試劑盒測定得到準確的結果，不論是定性的還是定量的，必須嚴格按照規定的方法制備試劑和實施測定。主要試劑的制備要點已如前述，其他一般性試劑，如包被緩沖液、洗滌液、標本稀釋液、結合物稀釋液、底物工作液和酶反應終止液等，配制時不可掉以輕心。(一)加樣在ELISA試劑盒中除了包被外，一般需進行45加樣。在定性測定中有時不強調加樣量的準確性，例如規定為加樣一滴。此時應該使用相同口徑的滴管，保持準確的加樣姿勢，使每滴液體的體積基本相同。在定量測定中則加樣量應力求準確。標本和結合物的稀釋液應按規定

淺析影響胎牛血清質量的幾大因素2015/10/22

市場上的胎牛血清種類繁多，魚龍混雜，很多科研工作者，特別是剛接觸細胞培養的人，難以分辨血清質量的優劣。本人根據十多年來血清生產銷售的經驗，總結如下：一、外觀拿到血清，zui先接觸的是血清外觀，對于缺少細胞培養經驗的人來說，外觀的判斷尤為重要1、顏色根據血紅蛋白含量的不同，胎牛血清可表現出黃色或紅色，我國的細胞培養用血清標準是不高于20mg/dl，實際上，血紅蛋白含量的高低對血清并無直接影響，這個指標的意義在于能體現出采血過程的嚴謹規范程度，良好的操作能降低血清的溶血。國產血清的采血點很分散，大多

如何選購流式抗體？2015/10/22

由于在流式細胞實驗過程中，熒光抗體對單細胞懸液的標記效果直接影響實驗的數據質量。因此，需要考慮各種影響流式抗體品質及檢測效果的因素，例如抗體特異性、熒光素信號強弱、熒光素標記方式、同型對照等。流式抗體的選擇：1.流式抗體本身也是抗體，所以選擇流式抗體一定要滿足抗體選擇zui基本的條件：目標蛋白特異性，反應種屬以及應用實驗。2.流式抗體熒光標記的方式包括直接標記和間接標記兩種。在流式實驗過程中，盡量減少實驗工序和過程，以保證實驗的真實和準確性。因此在條件允許的范圍內，建議盡量用直接標記的抗體進行實

凋亡試劑盒使用9大注意事項2015/10/13

凋亡試劑盒使用9大注意事項1.進行PBS清洗時，每次清洗5分鐘左右。2.PBS清洗后，為了各種反應的有效進行，請盡量除去PBS溶液后再進行下一步反應。3.在載玻片上的樣本上加上實驗用反應液后，請蓋上蓋玻片或保鮮膜，或在濕盒中進行，這樣可以使反應液均勻分布于樣本整體，又可以防止反應液干燥造成實驗失敗。4.TUNEL反應液臨用前配制，短時間在冰上保存。不宜長期保存，長期保存會導酶活性的失活。5.如果20×DAB溶液顏色變深成為紫色，則不可使用，需重新配制。6.用甲基綠（MethylGreen）染液（

胎牛血清是細胞培養中用量Z大的天然培養基2015/10/13

胎牛血清功能：胎牛血清是細胞培養中用量zui大的天然培養基，含有豐富的細胞生長必須的營養成份，常用于動物細胞的體外培養，具有極為重要的功能。1.提供對維持細胞指數生長的激素，基礎培養基中沒有或量很少的營養物，以及主要的低分子營養物。2.提供結合蛋白，能識別維生素、脂類、金屬和其他激素等，能結合或調變它們所結合的物質活力。3.有些情況下結合蛋白質能與有毒金屬和熱原質結合，起到解毒作用。4.是細胞貼壁、鋪展在塑料培養基質上所需因子來源。5.起酸堿度緩沖液作用。6.提供蛋白酶抑制劑，使在細胞傳代時使剩

ELISA試劑盒的測定方式2015/08/27

要使ELISA試劑盒測定得到準確的結果，不論是定性的還是定量的，必須嚴格按照規定的方法制備試劑和實施測定。主要試劑的制備要點已如前述，其他一般性試劑，如包被緩沖液、洗滌液、標本稀釋液、結合物稀釋液、底物工作液和酶反應終止液等，配制時不可掉以輕心。(一)加樣在ELISA試劑盒中除了包被外，一般需進行45加樣。在定性測定中有時不強調加樣量的準確性，例如規定為加樣一滴。此時應該使用相同口徑的滴管，保持準確的加樣姿勢，使每滴液體的體積基本相同。在定量測定中則加樣量應力求準確。標本和結合物的稀釋液應按規定

關于血清的一些問題2015/08/14

關于血清的一些問題血清是細胞培養中zui重要的元素之一。因此，我們特別整理了一些實驗室里常會遇到的問題，供大家參考：1．存放血清的方法？我們建議血清應保存在－20℃以下。然而，若存放于4℃時，請勿超過半個月。若您一次無法用完一瓶，建議您無菌分裝血清至恰當的滅菌容器內，再放回冷凍。2．如何解凍血清才不會使產品質量受損？我們建議您將血清從冷凍箱取出后，先置于2～8℃冰箱使之融解，然后在室溫下使之全融。但必須注意的是，溶解過程中必須規則地搖晃均勻。3．血清解凍后發現有絮狀沉淀物出現，該如何處理？血清中