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膠體金探針的質量鑒定2012/04/07

1。金顆粒的大小及均勻度用有Formvar支持膜的鎳網蘸取金標記試劑，空氣干燥后，透射電鏡下觀察金顆粒的大小及均勻度，計算平均直徑，如電鏡放大倍數10萬，照片放大為2．5倍，100000×2．5＝250000＝25nm?？諝庵懈稍锖笠宜徕欂撊荆谕干潆婄R下觀察，可見金顆粒周圍有一明顯的空暈，表示顆粒表面吸附著蛋白質分子。支持膜（火棉膠膜）的制備；50mil5％的火棉膠+50mi乙酸戊酯，戊酯火棉膠。2。用免疫細胞化學濾紙模型鑒定免疫金制劑的特異性和敏感性制得2．5％的乙酸在WhatmamI號濾紙

真核細胞基因組提取2012/03/24

一.實驗目的及背景高等動物，高等植物的基因組相當龐大，如人類細胞基因組由30億個堿基對組成，果蠅基因組有1.4×108個堿基對，水稻基因組有1.4×109個堿基對。真核細胞基因組中，約1萬－1.5萬個可表達的結構基因，其它大量存在的是調控序列和內含子序列?？梢哉f某特定物種的基因組，包含了該物種生長，發育，繁殖等各項生理活動的幾乎全部信息量，因而對真核細胞基因組的結構，組成，以及表達調控的研究是至關重要的，而研究的起點就是要獲得純度高--不含蛋白質、糖類、酚、氯仿等污染；得率好--以便有足夠量用于

B因子溶血活性的檢測2012/03/07

將RRBC加入正常人血清中，可使B因子活化，激活補體旁路途徑致使BRBC溶解。將正常人新鮮血清加熱使B因子喪失活性（簡稱RB），旁路途徑不能激活，當加入RRBC時不發生溶血。此時再加入含有B因子的待測血清，旁路途徑即被激活，RRBC發生溶血反應。根據溶血程度可測定待測血清中B因子的活性。1．RRBC懸液制備（見ACH50測定）。2．RB的制備取新鮮正常人混合血清（3人以上），56℃水浴加熱15min，滅活其中B因子，新鮮使用或分裝后凍干保存。3．取一定稀釋度的受檢血清與一定量的RB和1％RRBC

透射比濁法測定血清C3含量2012/03/03

1．原理血樣本中C3與抗C3血清在液相中反應，比例合適時形成可溶性免疫復合物。聚乙二醇（PEG6000）可沉淀其免疫復合物，使溶液的透光率（T）下降。免疫復合物的量與C3和抗C3量呈函數關系，當固定抗C3濃度時，免疫復合物的形成量主要取決于樣本中C3的含量，并與其呈正相關。故通過檢測溶液吸光度值即可判定樣本中C3含量。2．主要試劑（1）抗C3血清：有試劑出售，一般按說明書的效價使用，也可預先用方陣法滴定其效價。試驗時按zui適工作濃度稀釋。（2）稀釋液：PEG61300dO．00g，NaF10．

火箭免疫電泳法測定補體C4、B因子2012/03/03

1．主要試劑（1）羊抗人C4抗血清：按說明書所示單擴效價擴大2—4倍稀釋，或分別用含不同濃度抗體的瓊脂糖凝膠澆板，選擇峰高、清晰度適當的抗體濃度為zui適工作濃度。（2）羊抗人B因子抗血清：按說明書所示單擴效價擴大3—5倍稀釋，也可按選擇C4抗血清稀釋濃度的方法確定zui適工作濃度。（3）電泳緩沖液：稱取10．30g巴比妥鈉，1．83g巴比妥，溶于1000mL蒸餾水中。此液為pH8．6，離子強度0．05的巴比妥緩沖液。（4）凝膠緩沖液：以定量測定時用1：4稀釋的電泳緩沖液，B因子定量時1：5稀釋

補體遺傳多態性的檢測2012/02/25

補體遺傳多態性的檢測大多分二步進行，*步是用瓊脂糖高壓電泳或聚丙烯酰胺等電聚焦電泳將EDTA抗凝血漿通過凝膠電泳，根據分子量的大小、所帶電荷的多少及等電點（p1）將血漿蛋白分開。第二步是免疫固定或溶血鑒定，瓊脂糖高壓電泳或聚丙烯酰胺等電聚焦后，在凝膠板上鋪上抗補體某一成分的抗血清，使其與凝膠板上的抗原結合，形成分子量較大的免疫復合物沉淀嵌在凝膠孔中，不易漂洗掉，故稱免疫固定。將免疫固定后的凝膠板在生理鹽水中漂洗，除去其他蛋白成分?？靖?，考馬斯亮藍染色。依照第六屆補體定型會議標準或標準品，判斷待測

補體C4溶血覆蓋技術2012/02/25

電泳是通過電場作用將C4遷移率不同的同種異型分離開，然后依照分型標準定型。在某些情況下，C4A某種同種異型與C4B某種同種異型遷移率相同不易區分開，此時可用溶血覆蓋技術加以區別。1．原理用肼處理豚鼠血清，可滅活其補體成分C4，使之成為幟缺乏的血清。將C4缺乏的豚鼠血清與致敏的SRBCl昆合，因缺乏C4，補體的攻膜效應不能發揮，將?昆合物與一定濃度瓊脂糖混合傾注在電泳完畢的凝膠板上，凝膠板上C4區帶使混合物中的C4成分得以補償，溶血反應發生，凝膠板上C4條帶區可出現透明溶血帶。C4B的溶血活性較C

聚乙二醇(PEG)沉淀試驗檢測CIC2012/02/08

聚乙二醇(polyethyleneglycol，PEG)是一種無電荷的直鏈大分子多糖，可非特異性地引起蛋白質沉淀。沉淀具有可逆性，被沉淀的蛋白質生物活性亦不受影響。不同濃度的PEG可沉淀分子量不同的蛋白質，在pH值、離子濃度等條件固定時，蛋白質分子量越大，用以沉淀的PEG濃度越小。由于PEG6000對蛋白質沉淀具有良好的選擇性，所以在IC測定中主要采用PEG6000。PEG使IC沉淀的機理可能在于使其自液相中空間排斥而析出，此外，PEG還可抑制CIC解離，促進CIC進一步聚合成更大的凝聚物而被沉

聚乙二醇(PEG)沉淀補體消耗試驗2012/02/08

用低濃度PEG將IC沉淀，沉淀物中加入補體，以溶血反應檢測補體消耗率。(一)試劑1．熱聚合人ISC：制備方法同PEG沉淀試驗。2．硼酸緩沖鹽水(朋S)含硼酸0．1mol/L，硼砂25mmol/L，NaCl75mmol/L，調整為pH8.43．PEG用BBS將PEG配成12.5%和2.5%。4．0.2mol/LEDTA-Na2用1mol/LNaOH調整為pH7．2。5．5XVB保存液NaCl85，0g，巴比妥5．75g，巴比妥鈉3．75g，加蒸餾水約1500ral，加熱溶解后補加蒸餾水至2000m

細胞受體結合免疫測定CIC法2012/02/04

細胞受體結合免疫測定法是根據CIC可與某些細胞表面的Fc受體或補體受體結合而建立的細胞技術，這類方法有靈敏度較高，特異性較強等優點，但需進行活細胞培養或細胞分離，影響因素多，重復性較差，目前僅適用于實驗研究。此類技術有多種方法。Raji細胞是從Burkitt淋巴瘤患者分離建株的B淋巴細胞系?？稍隗w外連續傳代培養，細胞表面沒有膜免疫球蛋白，Pc受體的親和力很低，但有C3、C3b和C3d受體及Clq受體，而且不易脫落。因此能使結合補體的IC吸附在細胞上，然后再于反應系統中加入熒光素或i125標記的抗

特異性循環免疫復合物的測定2012/02/04

特異性CIC分為單特異性CIC和雙特異性CIC兩類。前者適用于檢測已知抗原及其相應抗體組成的CIC。雙特異性CIC是指對組成CIC的抗原、抗體和補體中某兩種成分組合明確的CIC，常采用的檢測方法為ELISA和RIA技術，需要兩種特異性各異的抗體。因此，檢測要求條件較高，但能較全面地反映CIC的病理意義。在檢測雙特異性CIC時，由于要求有兩種特異性抗體，每種抗體均可用作包被或檢測抗體，故具體到檢測某類雙特異性CIC時，根據兩種抗體的不同，可使用兩種方法。以ELISA法為例，如檢測HBsAg／IgC

中國體外診斷產業發展歷史2011/12/30

體外診斷產品按檢驗醫學的檢測項目可分為幾個主要大類：生化、免疫、血液及臨檢、微生物、分子診斷等。體外診斷產業也是隨著醫學事業的不斷發展而成長起來的。從上世紀八十80年代中期開始陸續有些外資、民營的企業開始開發生產相應產品，也有些屬于國有的企業單位生產了一些產品，但沒有大規模的政府主導和投入，也沒有相應的產業政策。當時的產品主要是以檢測試劑為主，和一些半自動小型儀器。隨著20二十年的發展，中國的體外診斷產業已經有了巨大發展和變化。，目前中國體外診斷產品已經包括了這個領域的幾個主要大類，并且從試劑到

ASA抗精子抗體ELISA試劑盒2011/12/30

用于人血清中抗精子表面抗原自身抗體體外定量檢測的酶免試劑盒。1、說明在西方國家，不孕夫婦的比例占總人群的10-15%（Haasetal，1980）。目前人們還不能的知道由免疫學因素導致不孕的發病率是多少。由于有很多不同的檢測方法，人們對抗精子抗體在不孕中的作用存在著很大爭議。在檢測抗精子抗體的傳統檢測方法中，精子凝集檢測和精子固定檢測已被廣泛應用。這些方法及其它凝集檢測都很耗費時間，并且結果與其操作不協調。與傳統的檢測方法相比，用ELISA檢測抗精子抗體具有很多優點。IBL公司的抗精子抗體ELI

細菌與結腸癌之間存在聯系2011/12/21

細菌與結腸癌之間存在點擊次數：26發布時間：2011-11-7達納法伯癌癥研究所和布洛德研究所的科學家們在結腸直腸癌中發現存在大量細菌，他們認為這有可能是導致癌癥的一個信號，同時也是診斷、預防和治療這種癌癥的一個關鍵。研究人員在《基因組研究》雜志網絡版上報告說，他們在9例結腸直腸腫瘤的樣本中發現大量的梭菌屬細胞。盡管這不一定意味著這些細菌會幫助結腸直腸癌的形成，但它提供了未來的研究方向。該雜志還發表了加拿大卑詩癌癥中心和西蒙弗雷澤大學研究人員的文章，他們報告了類似的發現。在美國，結腸直腸癌是因癌

兩項研究揭示益生菌作用機制2011/12/21

：近年來益生菌倍受矚目，這類小小細菌能通過改善宿主腸道菌群生態平衡而發揮有益作用，那么它們為什么能幫助改善宿主的健康水平呢？近期兩個研究組分別在Science-TranslationalMedicine，PNAS雜志上發表文章，報道了益生菌的作用機制，以及腸道對于益生菌的反應。生物通www.ebiotrade.com生物通www.ebiotrade.com生物通報道：近年來益生菌倍受矚目，這類小小細菌能通過改善宿主腸道菌群生態平衡而發揮有益作用，那么它們為什么能幫助改善宿主的健康水平呢？近期兩個

表皮生長因子（EGF）的測定方法2011/12/17

EGF主要來源于頒下腺。成年人許多組織中也表達EGF。人成纖維細胞、唾液腺癌細胞等也可產生EGF。EGF的作用沒有種屬特異性，人和小鼠的EGF對人成纖維細胞的作用相同。1．Swiss3T3細胞增殖法（1）用含5％FCS的DMEM培養液將Swiss3T3細胞調整成1×104／mL，接種于60mm的培養皿中（5mL），置37C5％C02溫箱中培養4～5d，待細胞匯合后，更換上述培養液，繼續培養2～3d，此時細胞數不再增多。（2）分別加入200ral系列稀釋的待測樣品或標準品，陰性對照加培養液，繼續培

轉化生長因子α（TGF-α）的測定2011/12/17

轉化生長因子α（transforminggrowthfactor-α，TGF-α）的結構和功能與TGF相似，屬EGF家族。檢測EGF生物學活性的方法也可以檢測TGF-α的活性。此外，EGF能誘導3T3小鼠的J2細胞合成DNA，TGF-α與EGF競爭受體，抑制EGF的作用，故可通過抑制EGF誘導的DNA合成試驗檢測TGF-α的活性。1．將3T3J2細胞培養在含0．5％FCS的DMEM培養液中，用0．25％胰蛋白酶消化細胞，用細胞培養液洗滌細胞2次，并配成6×104／mL。2．于24孔培養板每孔加入

MTF比色法測定slL-1的生物活性2011/12/17

四甲基偶氮唑鹽[3—（4.5-dimethylthiazol-2-Y1）-2，5-diphenyltetmzolimnbromide，MTF）在活細胞線粒體的琥珀酸脫氫酶作用下，被還原成藍黑色的MTr-甲脂，形成MTr-甲鐕的量與細胞增殖程度呈正相關。故通過測定細胞形成MTF-甲鐕量，可間接定量分析細胞的增殖情況，具體步驟如下：（1）用PBS溶解MTT為5mg／mL，用0．22／zm膜濾器除菌及雜質。（2）加MTF至培養的細胞及IL-1樣品中，10uL／孔，37~C溫育4ho（3）于每孔加酸化異

神八實驗揭秘:線蟲受輻射 太空中長蛋白質2011/12/09

11月18日凌晨，神舟八號飛船搭載的生物培養箱在神八落地后幾乎是刻不容緩地被送回北京。據介紹，培養箱中裝載樣品33種，開展了17項空間生命科學實驗。如今實驗有了什么進展？我們就從中選取幾項實驗，介紹給您——神八實驗揭秘線蟲的太空之旅我是一條線蟲,但不是你想象中的寄生蟲，你可以叫我的英文名字：C.elegans。我坐著神八飛船，在太空進行了長達十六天半的旅行。自然狀態下，我生活在泥土中，以細菌為食。成年后身長約1毫米，人類在顯微鏡下才能看清。我通體透明，長得不好看?？纱筮B海事大學環境系統生物學研究

武大生科院PNAS文章2011/12/09

生物通報道：來自武漢大學生命科學學院的研究人員發表了題為“Tripartitemotif8（TRIM8）modulatesTNFα-ａndIL-1β–triggeredNF-κBactivationbytargetingTAK1forK63-linkedpolyubiquitination”的文章，發現了TRIM蛋白家族成員：TRIM8的關鍵作用，這為進一步分析TNFα和IL-1β介導的NF-κB途徑提供了新思路，也有助于科學家們深入了解NF-κB途徑相關的病理機制。相關成果公布在《美國國家科學