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2019
10-18

western blot樣品制備注意事項(xiàng)及步驟
westernblot樣品制備注意事項(xiàng)及步驟WesternBlot樣品制備是這個(gè)關(guān)鍵步驟，要求盡可能的獲得所有蛋白質(zhì)。所以我們?cè)谧鰓tsternblot實(shí)驗(yàn)應(yīng)注意以下問題：1：在合適的鹽濃度下，應(yīng)保持蛋白質(zhì)的大溶解性和可重復(fù)性。2：選擇合適的表面活性劑和還原劑，破壞所有非共價(jià)結(jié)合的蛋白質(zhì)復(fù)合物和共價(jià)鍵二硫鍵，使其形成一個(gè)各自多肽的溶液。3：盡量去除核酸，多糖，脂類等干擾分子。4：防止蛋白質(zhì)在樣品處理過程中的人為的修飾，制備過程應(yīng)在低溫下進(jìn)行，以避免細(xì)胞破碎釋放出的各種酶類的修飾（建議加入合適的蛋
2019
10-17

蛋白marker發(fā)展史
蛋白marker發(fā)展史蛋白分子量標(biāo)準(zhǔn)，常稱之為蛋白Marker。在免疫印跡（Westernblot）試驗(yàn)中，分子量Marker雖不起眼，但意義重大，是陽性對(duì)照，是大小的標(biāo)準(zhǔn)，是必須的。只有Marker無誤了，實(shí)驗(yàn)結(jié)果才有說服力。除此之外，蛋白Marker還能夠提示電泳是否正常，轉(zhuǎn)移是否成功等信息。光陰似箭，日月如梭，不知不覺中蛋白Marker經(jīng)歷了普通Marker、預(yù)染Marker和曝光Marker三個(gè)發(fā)展階段。1.0代產(chǎn)品：普通蛋白Marker普通蛋白Marker，或稱之為未染色蛋白分子量標(biāo)準(zhǔn)
2019
10-12

細(xì)胞凍存與復(fù)蘇操作步驟與注意事項(xiàng)
細(xì)胞凍存與復(fù)蘇操作步驟與注意事項(xiàng)文檔細(xì)胞凍存是細(xì)胞保存的主要方法之一。利用凍存技術(shù)將細(xì)胞置于-196℃液氮中低溫保存，可以使細(xì)胞暫時(shí)脫離生長(zhǎng)狀態(tài)而將其細(xì)胞特性保存起來，這樣在需要的時(shí)候再復(fù)蘇細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)。而且適度地保存一定量的細(xì)胞，可以防止因正在培養(yǎng)的細(xì)胞被污染或其他意外事件而使細(xì)胞丟種，起到了細(xì)胞保種的作用。一、原理在不加任何條件下直接凍存細(xì)胞時(shí)，細(xì)胞內(nèi)和外環(huán)境中的水都會(huì)形成冰晶，能導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)發(fā)生機(jī)械損傷、電解質(zhì)升高、滲透壓改變、脫水、PH改變、蛋白變性等，能引起細(xì)胞死亡。如向培養(yǎng)液加入保護(hù)劑
2019
10-11

表面活性劑的作用有哪些
表面活性劑的作用有哪些表面活性劑(surfactant)，是指加入少量能使其溶液體系的界面狀態(tài)發(fā)生明顯變化的物質(zhì)。表面活性劑分為離子型表面活性劑（包括陽離子表面活性劑與陰離子表面活性劑）、非離子型表面活性劑、兩性表面活性劑、復(fù)配表面活性劑、其他表面活性劑等。那么表面活性劑的作用是什么呢？表面活性劑的作用（1）乳化作用：由于油脂在水中表面張力大,當(dāng)水中滴入油脂后,用力攪拌,油脂被粉碎成細(xì)珠狀,互相混合成乳濁液,但攪拌停止又重新分層.如果加入表面活性劑,用力攪拌,停止后很長(zhǎng)時(shí)間內(nèi)卻不易分層,這就是乳
2019
10-10

維生素C：大航海時(shí)代的榮耀
維生素C：大航海時(shí)代的榮耀大航海時(shí)代是西方的人到世界各處淘金的時(shí)代，小船和大海之間里辨不清情結(jié)，割舍不斷的愛戀。在這你恬靜，我欣喜；你憤怒我忐忑的年代中，在船上工作的船員們受到了各種厄難的威脅，這里我們來聊聊病魔主宰之壞血病的興衰吧。曾經(jīng)叱咤大海，威震時(shí)代的一代霸主--壞血病也難以逃脫被治的厄運(yùn)。那什么是壞血病呢？這是百科解釋：維生素C缺乏后數(shù)月，患者感倦怠、全身乏力、精神抑郁、多疑、虛弱、厭食、營(yíng)養(yǎng)不良、面色蒼白、輕度貧血、牙齦腫脹、出血，并可因牙齦及齒槽壞死而致牙齒松動(dòng)、脫落，骨關(guān)節(jié)肌肉疼痛
2019
10-09

25格×16格的血球計(jì)數(shù)板使用方法介紹
25格×16格的血球計(jì)數(shù)板使用方法介紹血球計(jì)數(shù)板介紹用厚玻璃制成。每塊計(jì)數(shù)板由H形凹槽分為2個(gè)同樣的計(jì)數(shù)池。計(jì)數(shù)池兩側(cè)各有一支持柱，將特制的蓋玻片覆蓋其上，形成高0.10mm的計(jì)數(shù)池。計(jì)數(shù)池畫有長(zhǎng)、寬各3.0mm的方格，分為9個(gè)大方格，每個(gè)大格面積為1.0mm。容積為0.1mm3（ul），其中，中央大方格用雙線分成25個(gè)中方格，位于正中及四角5個(gè)中方格是紅細(xì)胞計(jì)數(shù)區(qū)域，用單線劃分為16個(gè)小方格。四角的4個(gè)大方格是白細(xì)胞計(jì)數(shù)區(qū)域，用單線劃分為16個(gè)中方格。根椐標(biāo)準(zhǔn)局（NBS）規(guī)定，大方格每邊長(zhǎng)度允
2019
10-08

內(nèi)毒素鱟實(shí)驗(yàn)，如何消除樣品干擾？
內(nèi)毒素鱟實(shí)驗(yàn)，如何消除樣品干擾？在鱟試劑檢驗(yàn)內(nèi)毒素試驗(yàn)中有些樣品嚴(yán)重干擾鱟試驗(yàn)生化反應(yīng)，甚使反應(yīng)不能進(jìn)行。這就需要采用特殊方法對(duì)樣品進(jìn)行預(yù)處理。1稀釋法相當(dāng)大一部分樣品的干擾因素在一定濃度下才起作用，把樣品適量稀釋后即可按常規(guī)方法測(cè)定。如甘露醇、慶大霉素、人血白蛋白、肝素鈉和維生素C等注射液等。2加熱法有些干擾因素為不耐熱的物質(zhì)，將樣品在適當(dāng)溫度下保溫一段時(shí)間，即可按常規(guī)方法測(cè)定。如某些血液制品和生物藥品等。3調(diào)整pH值法有些樣品PH值偏高或偏低，且鱟試劑中pH緩沖劑不能將反應(yīng)液調(diào)整正常范圍。這
2019
09-30

RNA的提取方法大總結(jié)
RNA的提取方法大總結(jié)這篇文章主要講的是幾種常用的RNA提取方法。1、異硫氰酸胍氯化銫超速離心法原理：使用蛋白質(zhì)變性劑異硫氰酸胍有效抑制RNA酶的活性，經(jīng)過起始密度為1.78g/ml的氯化銫介質(zhì)，進(jìn)行密度梯度超速離心，RNA沉淀于管底，而DNA與蛋白質(zhì)在上清中。使用這種方法，不但能得到高質(zhì)量的RNA，而且能同時(shí)分離出細(xì)胞染色體DNA.本法對(duì)于冷凍時(shí)間長(zhǎng)、細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核不易分離的組織標(biāo)本以及富含RNA酶的組織細(xì)胞（如胰腺）的RNA提取尤其適合。此法提取的RNA的質(zhì)量好和成功率高，已成為提取哺乳動(dòng)物
2019
09-29

抗體洗脫液的原理介紹
抗體洗脫液的原理介紹日益增長(zhǎng)的抗體使用，研究目的蛋白種類一日千里，那么膜的再使用能夠節(jié)約研究時(shí)間，推進(jìn)研究進(jìn)程，在不影響實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)確的前提下，那么在使用的意義是很明顯的。現(xiàn)在這里我來講一下抗體洗脫液--strippingbuffer。在介紹抗體洗脫液的原理前，先來看看抗原抗體結(jié)合的一些環(huán)境條件吧，通常我們的抗體稀釋液選擇是：TBST和PBST，這里的兩種抗體稀釋液的pH值均在7.4-7.8之間。那么問題就來了，為什么抗體稀釋液的pH值是這樣的呢？抗原抗體的結(jié)合反應(yīng)：抗原與抗體能夠特異性結(jié)合是基于抗原
2019
09-27

簡(jiǎn)述tbst與pbst的區(qū)別及配置
簡(jiǎn)述tbst與pbst的區(qū)別及配置TBST是TBS+Tween的縮寫，生物實(shí)驗(yàn)中提到的PBST是指PBS溶液加上Tween-20。那么tbst與pbst都有上面區(qū)別呢？tbst與pbst的區(qū)別：1、TBST的pH值隨溫度變化大一點(diǎn)，而PBST似乎容易有沉淀，若稀釋抗體后需要反復(fù)使用的話建議使用TBST溶解。2、兩種洗液用起來沒有什么區(qū)別，都是提供一個(gè)緩沖的PH值環(huán)境，加上吐溫20有助于蛋白的洗脫。PBST的磷酸鹽緩沖液加Tween-20，而TBST是Tris緩沖液加Tween-20。PBS溶液是
2019
09-20

Western Blot內(nèi)參抗體選擇原則
WesternBlot內(nèi)參抗體選擇原則內(nèi)參抗體種類很多，比如beta-actin、beta-tubunlin、GAPDH、α-tubunlin等，那么針對(duì)自己的實(shí)驗(yàn)，我們?cè)撊绾芜x擇呢?下面簡(jiǎn)單介紹下選擇內(nèi)參抗體應(yīng)遵循的原則：一.樣本種屬來源：先要考慮的就是實(shí)驗(yàn)樣本來源于什么物種。1、哺乳動(dòng)物的組織或者細(xì)胞樣本，通常選擇β-actin、β-tubulin、GAPDH、LaminB、HistoneH3、Na,Katpase等。2、植物來源實(shí)驗(yàn)樣本，則可以選擇plantactin、Rubisco等。3
2019
09-19

淀粉知多少
淀粉知多少淀粉是我們?nèi)粘Ｉ钪薪?jīng)常接觸到的物品，但它并不像我們想象中的那么簡(jiǎn)單。淀粉都有種類呢？它們又有哪些區(qū)別？下面我們主要了解以下三種淀粉：1、直鏈淀粉2、支鏈淀粉3、可溶性淀粉。共同特點(diǎn)：白色粉末狀（可溶性淀粉優(yōu)勢(shì)也呈淡黃色）；無臭，無味；有吸濕性；不溶于冷水、乙醇不同點(diǎn)：1、結(jié)構(gòu)上：直鏈淀粉是D-葡萄糖基以a-(1,4)糖苷鍵連接的多糖鏈，支鏈淀粉是借a-(1，4)糖苷鍵和4%的a-(1，6)糖苷鍵相連的支鏈葡萄糖單位組成的。可溶性帶奶粉又稱為淀粉糊精，是淀粉經(jīng)過一定比例的酸堿反應(yīng)后的衍
2019
09-19

Tris的主要應(yīng)用及緩沖能力
Tris的主要應(yīng)用及緩沖能力Tris中文名稱：三（羥甲基）氨基甲烷英文名稱：Tris;Tris(Hydroxymethyl)aminomethaneTris是一種有機(jī)化合物，白色微黃色結(jié)晶性粉末或塊，化學(xué)式C4H11NO3，溶于乙醇和水，微溶于乙酸乙酯、苯，不溶于四氯化碳。25°C時(shí)溶解度（mg/mL）：水550、乙二醇79.1、甲醇26、無水乙醇14.6、95%乙醇22.0、N，N-二甲基甲酰胺14，戊醇2.6，丙醇2.0，乙酸乙酯0.5、環(huán)己烷0.1。水溶液不吸收二氧化碳，對(duì)銅、鋁有腐蝕作用
2019
09-18

干酪素的性狀及用途
干酪素的性狀及用途英文名稱：casein。別名：乳酪素，酪蛋白，酪脘，酪素。干酪素的性狀：干酪素為白色無定形粉末或顆粒。是一種含磷復(fù)合蛋白。經(jīng)電泳分析有不少于20中的磷蛋白組分，主要成分為α-酪蛋白和β-酪蛋白。干粉無臭，無味。有吸濕性。干燥時(shí)性質(zhì)穩(wěn)定，潮濕時(shí)易變壞。溶于堿性水溶液，溶于濃鹽酸呈淺紫色，幾乎不溶于水和非極性有機(jī)溶劑。相對(duì)密度1.25～1.31，等電點(diǎn)4.7。干酪素的制備方法：（1）新鮮牛奶脫脂，加酸（乳酸、乙酸、鹽酸或硫酸），將pH調(diào)4.7，使干酪素微膠粒失去電荷而凝固沉淀。用這
2019
09-16

果膠酶的化學(xué)性質(zhì)及用途介紹
果膠酶的化學(xué)性質(zhì)及用途介紹果膠酶廣泛分布于高等植物和微生物中，本質(zhì)上是聚半乳糖醛酸水解酶,果膠酶水解果膠主要生成β-半乳糖醛酸,可用次碘酸鈉法進(jìn)行半乳醛酸的定量,從而測(cè)定果膠酶活力。果膠酶的化學(xué)性質(zhì)：一般為灰白色粉末，或棕黃色液體。商業(yè)用果膠酶的有效成分主要有三種酶。一種是果膠甲酯酶(Pectinpectylhydrolase)(EC3.1.1.11)，主要作用為催化甲酯果膠以脫去甲酯基，產(chǎn)生聚半乳糖醛酸苷鍵和甲醇。另一種是聚半乳糖醛酸酶(Polygalacturonase；EC3.2.1.15
2019
09-12

幾種感受態(tài)細(xì)胞的用途、基因型和特點(diǎn)
幾種感受態(tài)細(xì)胞的用途、基因型和特點(diǎn)1、DH5菌株用途:克隆菌，用于分子克隆、質(zhì)粒提取。基因型:supE44△lacU169（?80lacZ△M15）hsdR17recAlendAlgyrA19thi-1relAl特點(diǎn):一種用于鋪制與培養(yǎng)質(zhì)粒平板和粘性平板的抑制型菌株.其?80lacZ△M15基因的產(chǎn)物可與pUC載體編碼的β-半乳糖苷酶氨基端實(shí)現(xiàn)α互補(bǔ)，可用于藍(lán)白斑篩選。recAl和endAl的突變有利于克隆DNA的穩(wěn)定和高純度質(zhì)粒的提取。2、0菌株用途：克隆菌，用于分子克隆，質(zhì)粒提取。基因型：F
2019
09-12

真菌常用培養(yǎng)基匯總
真菌常用培養(yǎng)基匯總培養(yǎng)基是供微生物、植物組織和動(dòng)物組織生長(zhǎng)和維持用的人工配制的養(yǎng)料，一般都含有碳水化合物、含氮物質(zhì)、無機(jī)鹽（包括微量元素）以及維生素和水等。本文主要講述的是用于真菌培養(yǎng)的常用培養(yǎng)基。真菌常用培養(yǎng)基匯總1、液體沙氏培養(yǎng)基（liquidsabourandmedium，SDB）貨號(hào)：L8300主要成分：蛋白胨（10g/L），葡萄糖（40g/L）用途：用于真菌、酵母菌增菌（GB標(biāo)準(zhǔn)）。2、沙氏瓊脂培養(yǎng)基（sabourand’sagarmedium，SDA），又稱為沙堡弱培養(yǎng)基貨號(hào)：S97
2019
09-11

POD辣根過氧化物酶的溶解性及分類說明
POD辣根過氧化物酶的溶解性及分類說明說明：POD是一種具有氧化還原酶性質(zhì)的血紅素蛋白。用于生化研究，是酶標(biāo)記法所用的一種主要酶。也用于生物液體中葡萄糖和半乳糖的測(cè)定。別名：Donor:hydrogen-peroxideoxidoreductase；Horseradishperoxidase；HRPCAS：9003-99-0外觀：棕褐色結(jié)晶或凍干粉類型：TypeVI-A酶活：250-330U/mg固體溶解性：溶于0.1M磷酸鹽緩沖液,pH6.0，參考濃度10mg/mlHRP是一種分子量達(dá)4400
2019
09-10

索萊寶質(zhì)粒小量提取試劑盒的使用方法
索萊寶質(zhì)粒小量提取試劑盒的使用方法質(zhì)粒是細(xì)胞內(nèi)的一種環(huán)狀的小分子DNA，是DNA重組的常用載體，在DNA重組中，質(zhì)粒或經(jīng)過改造后的質(zhì)粒載體可通過連接外源基因構(gòu)成重組體。在質(zhì)粒提取過程中，多數(shù)質(zhì)粒粗提取物中含有三種構(gòu)型的質(zhì)粒：共價(jià)閉合環(huán)DNA（cccDNA）、質(zhì)粒的兩條鏈沒有斷裂、超螺旋開環(huán)DNA（ocDNA）、質(zhì)粒的一條鏈斷裂、松弛的環(huán)狀分子線形DNA（lDNA）：質(zhì)粒的兩條鏈均斷裂；線性分子質(zhì)粒DNA的分子構(gòu)型。質(zhì)粒小量提取的方法1.將3~5ml菌液13,000rpm離心30秒收集沉淀（菌體）
2019
09-07

MTT法檢測(cè)細(xì)胞活性步驟
MTT法檢測(cè)細(xì)胞活性步驟及原理要知道MTT法檢測(cè)細(xì)胞活性步驟先要知道MTT是什么？MTT是一種粉末狀化學(xué)試劑，全稱為3-(4,5)-dimethylthiahiazo(-z-y1)-3,5-di-phenytetrazoliumromide，漢語化學(xué)名為3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑溴鹽，商品名：噻唑藍(lán)。是一種黃顏色的染料。MTT法檢測(cè)細(xì)胞活性原理檢測(cè)原理為活細(xì)胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性MTT還原為水不溶性的藍(lán)紫色結(jié)晶甲瓚（Formazan）并沉積在細(xì)胞中，而死細(xì)胞

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