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細胞技術專題：小鼠腹腔巨噬細胞原代培養實驗2014/02/18

標簽：小鼠腹腔巨噬細胞原代培養小鼠腹腔巨噬細胞原代培養可以：（1）用于細胞保種；（2）用于分子生物學研究；（3）用于基因治療研究。實驗方法腹腔取材法實驗方法原理巨噬細胞屬免疫細胞，有多種功能，是研究細胞吞噬、細胞免疫和分子免疫學的重要對象。巨噬細胞容易獲得，便于培養，并可進行純化。巨噬細胞屬不繁殖細胞群，在條件適宜下可生活2－3周，多用做原代培養，難以長期生存。巨噬細胞也建有無限細胞系，大多來自小鼠，如P331、S774A.1、RAW309Cr.l等，均獲惡性，培養中呈巨噬細胞形態和吞噬功能，易

細胞技術專題：細胞自噬的研究方法2014/02/13

正常培養的細胞自噬活性很低，不適于觀察，因此，必須對自噬進行人工干預和調節，經報道的工具藥有：一、自噬誘導劑(1)BredeldinA/Thapsigargin/Tunicamycin：模擬內質網應激(2)Carbamazepine/L-690，330/LithiumChloride（氯化鋰）：IMPase抑制劑（即Inositolmonophosphatase，肌醇單磷酸酶）(3)Earle's平衡鹽溶液：制造饑餓(4)N-Acetyl-D-sphingosine（C2-ceramide）：C

細胞技術專題：細胞計數及活力測定實驗2014/02/13

一、原理培養的細胞在一般條件下要求有一定的密度才能生長良好，所以要進行細胞計數。計數結果以每毫升細胞數表示。細胞計數的原理和方法與血細胞計數相同。在細胞群體中總有一些因各種原因而死亡的細胞，總細胞中活細胞所占的百分比叫做細胞活力，由組織中分離細胞一般也要檢查活力，以了解分離的過程對細胞是否有損傷作用。復蘇后的細胞也要檢查活力，了解凍存和復蘇的效果。用臺盼蘭染細胞，死細胞著色，活細胞不著色，從而可以區分死細胞與活細胞。利用細胞內某些酶與特定的試劑發生顯色反應，也可測定細胞相對數和相對活力。二、儀器

細胞技術專題：新生大鼠心肌細胞原代培養實驗2014/02/13

標簽：新生大鼠心肌細胞原代培養新生大鼠心肌細胞原代培養可以：（1）細胞保種；（2）用于細胞形態研究；（3）應用于臨床研究。實驗方法胰酶消化法實驗方法原理將大鼠的心肌細胞從機體中取出，經胰酶、螯合劑（常用EDTA）處理，分散成單細胞，置合適的培養基中培養，使細胞得以生存、生長和繁殖。實驗材料SD乳鼠試劑、試劑盒低糖DMEM、胰酶EDTA青鏈霉素碳酸氫鈉液新生牛血清谷氨酰胺D-Hank's液新潔爾滅碘酒酒精儀器、耗材鋁盒眼科直剪眼科彎剪眼科直鑷眼科彎剪玻璃培養皿廣口瓶棉球燒杯錐形瓶離心管磁力攪拌器攪

細胞技術專題：PI3K/Akt/mTOR信號通路2014/02/13

目的：通過特異性阻斷PI3K和mTOR，觀察HepG2和Hep3B細胞株PI3K/Akt/mTOR信號通路活性及生物學行為的改變，探討相關的分子機制。方法：在培養的HepG2、Hep3B人肝癌細胞株和人正常肝細胞株QSG-7701上，以免疫印跡方法（Westernblot）檢測各細胞株中PI3K（p110α亞單位）、PTEN、pAkt（S473，T308）和p-mTOR（S2448）的表達情況；分別用PI3K抑制劑LY294002（50μmol/ml）和mTOR抑制劑Rapamycin（RAPA

細胞技術專題：細胞原代培養實驗2014/02/13

標簽：細胞原代培養細胞原代培養可以：（1）為研究生物體細胞的生長、代謝、繁殖提供有力的手段；（2）為傳代培養創造條件；（3）服務于臨床實踐，用于藥物篩選等。實驗方法胰酶消化法組織塊直接培養法實驗方法原理將動物機體的各種組織從機體中取出，經各種酶（常用胰蛋白酶）、螯合劑（常用EDTA）或機械方法處理，分散成單細胞，置合適的培養基中培養，使細胞得以生存、生長和繁殖，這一過程稱原代培養。因此，較為嚴格地說是指成功傳代之前的培養，此時的細胞保持原有細胞的基本性質，如果是正常細胞，仍然保留二倍體數。但實際

細胞技術專題：小鼠胚胎成纖維細胞（MEF）原代培養實驗2014/02/13

標簽：小鼠胚胎成纖維細胞培養小鼠胚胎成纖維細胞(MEF)原代培養可以：（1）用于細胞保種；（2）用于分子生物學研究；（3）用于基因治療相關研究。實驗方法胰酶消化法1胰酶消化法2實驗方法原理將小鼠的胚胎成纖維細胞（MEF）從機體中取出，經胰酶、螯合劑（常用EDTA）處理，分散成單細胞，置MEF生長培養基中培養，使細胞得以生存、生長和繁殖。實驗材料孕鼠試劑、試劑盒PBSEDTA胰酶MEF生長培養基FBS高糖DMEM儀器、耗材眼科直剪眼科直鑷眼科彎鑷玻璃平皿3尼龍濾網離心管手術刀片實驗步驟一、實驗材料

細胞技術專題：流式細胞儀檢測細胞凋亡：PI單染色法2014/02/10

一、基本原理其原理主要是根據細胞凋亡時在細胞、亞細胞和分子水平上所發生的特征性改變。這些改變包括細胞核的改變、細胞器的改變、細胞膜成分的改變和細胞形態的改變等，其中細胞核的改變特征性，主要包括以下幾個方面：1、細胞核的改變由于凋亡細胞核的改變，造成各種染色體熒光染料對凋亡細胞DNA可染性發生改變。研究表明，用各種染色體熒光染料對經固定的凋亡細胞進行染色，其DNA可染性降低。許多學者把這種DNA可染性的降低認為是凋亡細胞的標志之一。2、光散射特性凋亡細胞形態上的改變影響它們的光散射特性。在流式細胞

細胞技術專題：體外細胞的原代培養、傳代培養、凍存和復蘇2014/02/10

一、實驗原理細胞培養可分為原代培養和傳代培養。直接從體內獲取的組織細胞進行培養為原代培養；當原代培養的細胞增殖達到一定密度后，則需要做再培養，即將培養的細胞分散后，從一個容器以1：2或其他比率轉移到另一個或幾個容器中擴大培養，為傳代培養，傳代培養的累積次數就是細胞的代數。細胞凍存及復蘇的基本原則是慢凍快融，實驗證明這樣可以zui大限度的保存細胞活力。目前細胞凍存多采用甘油或DMSO作保護劑，這兩種物質能提高細胞膜對水的通透性，加上緩慢冷凍可使細胞內的水分滲出細胞外，減少細胞內冰晶的形成，從而減少

細胞技術專題：細胞凋亡實驗步驟及注意事項2014/02/10

一、實驗目的1、掌屋凋亡細胞的形態特征2、學會用熒光探針對細胞進行雙標記來檢測正常活細胞、凋亡細胞和壞死細胞的方法二、實驗原理細胞死亡根據其性質、起源及生物學意義區分為凋亡和壞死兩種不同類型。凋亡普遍存在于生命界，在生物個體和生存中起著非常重要的作用。它是細胞在一定生理條件下一系列順序發生事件的組合，是細胞遵循一定規律自己結束生命的自主控制過程。細胞凋亡具有可鑒別的形態學和生物化學特征。在形態上可見凋亡細胞與周圍細胞脫離接觸，細胞變園，細胞膜向內皺縮、胞漿濃縮、內質網擴張、細胞核固縮破裂呈團塊狀

生物化學技術專題：對乙酰氨基酚片溶出度測定2014/02/10

一、試驗目的1．掌握片劑溶出度的測定方法2．能正確使用溶出度測定儀二、實驗指導片劑等固體制劑服用后，在胃腸道中要先經過崩解和溶出兩個過程，然后才能透過生物膜吸收。對于許多藥物來說，其吸收量通常與該藥物從劑型中溶出的量成正比。對難溶性藥物而言，溶出是其主要過程，故崩解時限往往不能作為判斷難溶性藥物制劑吸收程度的指標。溶解度小于0.1～1.0(g/L)的藥物，體內吸收常受其溶出速度的影響。溶出速度除與藥物的晶型、顆粒大小有關外，還與制劑的生產工藝、輔料、貯存條件等有關。為了有效地控制固體制劑質量，除

生物化學技術專題：鞣質類化合物的鑒別2014/02/10

1．檢品溶液的制備：取五倍子（含可水解鞣質），兒茶（含縮合鞣質），沒食子酸（鞣質水解產生偽鞣質）少量（約0.1克）分別置大試管中，加蒸餾水約10ml，加熱煮沸，過濾，濾液作以下試驗：2．鞣質的一般反應（鞣質與偽鞣技的區別鑒定）（1）感觀試驗：取制備的鞣質和偽鞣質溶液，嘗其味，并以石蕊試紙檢查溶液是否呈酸性反應。（2）三氯化鐵反應：取制備的鞣質溶液（五倍子溶液或兒茶溶液）及偽鞣溶液（食子酸溶液）各1~2ml，分別加入三氯化鐵試液,鞣質產生綠色或蘭黑色反應或沉淀;偽鞣質產生蘭色反應。（3）沉淀蛋白反

生物化學技術專題：揮發油的定性鑒別2014/01/14

1．外觀性狀：（1）取各種揮發油（松節油、薄荷油、丁香油、陳皮油及桂皮油）觀察其色澤，是否有特殊香氣，及辛辣燒灼味感。（2）揮發性：取濾紙屑一小塊，滴加薄荷油一滴，放置2小時或微熱后觀察濾紙上有無清晰的油跡（與菜油作對照實驗）。（3）pH檢查：（檢游離酸或酚類）。取樣品一滴加乙醇5滴，以預先用蒸餾水濕潤的廣泛pH試紙進行檢查，如顯酸性，示有游離的酸或酚類化合物，剩下的樣品乙醇液供下面（7）（8）試驗用。（4）FeCl3反應（檢酚類）：取樣品一滴，溶于1ml乙醇中，加入1%得FeCL3醇液1~2滴

生物化學技術專題：皂苷的鑒別2014/01/14

1．檢品溶液的制備：1）取皂角碎塊1g于大試管（或小燒杯）中，加蒸餾水15ml，于30~90°水浴上浸漬15分鐘后過濾，濾液供鑒別用。2）取薯蕷碎塊0.5g加上法同樣制備得薯蕷水浸液。3）取薯蕷碎塊0.5g于大試管或小錐形瓶中加95%乙醇10ml于水浴上溫浸15分鐘，濾液供鑒別。2．鑒別試驗：（1）溶血試驗：取濾紙片一小塊，于小心處滴加皂角浸液一滴，待干后于同處再滴加一滴，如是反復操作至滴加數滴，干燥后無噴霧血球試液（取牛血、羊血或兔血一份，用玻棒或棉簽攪和，除去凝集的血蛋白，加pH7.4磷酸鹽

生物化學技術專題：強心苷的鑒別2014/01/14

1．檢品溶液的制備：取夾竹桃葉碎塊粉末3g，于100ml錐形瓶中加70%乙醇40ml，水浴上浸煮5分鐘，放冷，過濾，濾液（或經處理后--方法參照注二）供鑒別用。[注1]：強心苷的試驗都是在較強的堿性條件下進行，如果樣品中含有蒽醌，也具有紅色反應，防礙檢查，因此在檢查前需先檢查有無蒽醌類成分，若有則應先將其除去，即將乙醇浸液在水浴上蒸發，殘渣加CHCl3熱溶后過濾，CHCl3液用1%NaOH液振搖，去除蒽醌后，CHCl3液供鑒別用。[注2]：夾竹桃葉或毛地黃葉綠素，常使醇提液帶較深的綠色，影響反應

生物化學技術專題：蒽苷的鑒別2014/01/14

1．檢品溶液的制備：取大黃粉末2克，加乙醇20ml，在沸水浴上回流浸提10分鐘，過濾供鑒別用。2．鑒別試驗：（1）與堿成鹽顯色反應（Borntrager反應）：取1ml乙醇提取液，加入1ml10%NaOH溶液，如產生紅色反應，加入少量30%過氧化氫液，加熱后紅色不褪，加酸使呈酸性時，則紅色消褪再堿化又出現紅色。注：或取大黃粉末少許，置小試管中，加水1~2ml，加濃H2SO42-3滴，置水浴中加熱10分鐘，冷卻，加乙1-2ml振搖。用吸管吸取醚液（黃色）于另一潔凈試管中，加入NaOH試液1ml振搖

生物化學技術專題：秦皮中七葉苷、七葉內酯的提取、分離和鑒定2014/01/09

秦皮為本樨科白蠟樹屬植物白蠟樹（FraxinusChinensisPoxb）或苦瀝白蠟樹（F.rhynchophyllaHance）或小葉白蠟樹（F.bungeanaDC）的樹皮,味苦，性微寒。具有清熱、燥濕、收澀作用。主治溫熱痢疾、目赤腫瘤等癥。秦皮中含有多種內酯類成分及皂苷、鞣質等，其中主要有七葉苷、七葉內酯、秦皮苷及秦皮素等。多有抗菌消炎的生理活性，七葉內酯對細菌性痢疾、急性腸炎有較好治療效果，兼有退熱作用，毒付作用小，幾無苦味。適于小兒服用。秦皮中主要成分的結構及性質1．七葉苷（escu

生物化學技術專題：薯蕷皂苷元的提取和鑒別2014/01/09

目的要求：1．掌握甾體皂苷元（親脂性和中性成分）的提取方法。2．熟悉薯蕷皂苷元的性質及鑒定法。簡介：薯蕷皂苷元（Diosgenin）是一種甾體皂苷元，分子式（C27H42O31）,分子量414.61，為白色結晶，mp204～207℃，[]25D-129.3（CHCl3），溶于一般有機溶劑和醋酸，不溶于水。目前，是制造多種甾體藥物如口服避孕藥（I號，II號避孕藥片）和甾體激素（如可的松）等的重要原料。在植物界主要分布在薯蕷科薯蕷屬（Dioscorea）植物中，我國的薯蕷屬植物有80余種，其中只有薯

生物化學技術專題：巴馬汀提取及延胡索素制備的方法2014/01/09

巴馬汀為季銨生物堿，溶于水和極性大的有機溶劑（如甲醇、乙醇等）所以可用甲醇、乙醇或水進行提取。然后通過鹽析，降低其在水中的溶解度而沉淀，與其它雜質分離。巴馬汀是有機堿，盡管它帶正電荷，但和水的親和力仍小于NaCl，NaCl和水的強親和力，降低了巴馬汀在水中的溶解度，使它被“擠”出。1．流程2．工藝（1）提取：黃藤粗粉20g，用95%EtOH回流提取2次，每次1小時，乙醇用量為100ml，合并二次醇提取液，濃縮至3~4ml，用吸管轉移到5ml小錐形瓶中，放置，析晶，抽濾得巴馬汀粗晶。（2）分離：將

生物化學技術專題：大黃中蒽醌類成分的提取分離和鑒定2014/01/09

概述大黃記載于《神農本草經》等許多文獻中，用于泄下、健胃、清熱、解毒等。自古以來，大黃在植物性瀉下藥中占有重要位置，是一位很早就被各國藥典所收載的世界性生藥。大黃的種類繁多，大黃是蓼科植物掌葉大黃（RheumpalmatclmL），大黃（R.officinaleBaill）及唐古特大黃（R.tangutiumMaxim.etRegll）的根莖及根，大黃中含有多種游離的羥基蒽醌類化合物以及它們與糖所形成的苷。已經知道的羥基蒽醌主要有下列五種：大黃中蒽醌苷元，其結構不同，因而酸性強弱也不同。大黃酸連