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ELISA（雙抗體夾心法）—檢測HBsAg2015/02/27

以已知抗體(抗HBs)包被載體，然后將含有抗原的待檢標(biāo)本加入，共同孵育后，抗原結(jié)合于包被抗體上，再加入酶標(biāo)記特異抗體(酶標(biāo)抗HBs)，酶標(biāo)抗體連接到抗原上，zui后加入底物溶液，根據(jù)顏色反應(yīng)來判定抗原含量。【材料】HBsAg試劑盒，本試劑盒含:1、包被抗-HBs反應(yīng)條1瓶2、酶結(jié)合物1瓶3、HBSAg陽性對照1瓶4、HBsAg陰性對照1瓶5、洗滌液:用前每瓶作1：20稀釋1瓶6、顯色劑(TMB)A1瓶7、顯色劑(TMB)B1瓶8、終止液1瓶【方法】1、加入待測標(biāo)本每孔0.05ml，并設(shè)HBsAg

自行配制DMEM的方法2015/02/27

以下是一份GIBCO的低糖DMEM粉劑配制說明(普通高糖的DMEM培養(yǎng)基配法是一樣的)以及李玲、李雪峰編著的《細胞生物學(xué)實驗》中配制方法。TOPREPARE1*LIQUID1.Measrueout5%lessdistilledwaterthandesiredtotalvolumeofmediumusingamixingcontainerthatisasclosetothefinalvolumeaspossible.2.Addpowderedmediumto15to30℃(roomtemperat

關(guān)于ELISA檢測試劑盒的組成以及常用ELISA試劑盒2015/02/02

ELISA快速檢測技術(shù)越來越多的用于疾病診斷、食品安全檢測中，那么elisa試劑盒的主要組成成份是什么呢？根據(jù)ELISA試劑盒的應(yīng)用范圍，可將ELISA試劑盒分為拿幾種呢？完整的elisa試劑盒主要的組成成份如下：(1)已包被抗原或抗體的固相載體(免疫吸附劑);(2)C的抗原或抗體(結(jié)合物);(3)酶的底物;(4)陰性對照品和陽性對照品(定性測定中)，參考標(biāo)準(zhǔn)品和控制血清(定量測定中);(5)結(jié)合物及標(biāo)本的稀釋液;(6)洗滌液，在板式ELISA中，常用的稀釋液為含0.05%吐溫20磷酸緩沖鹽水;

ELISA實驗中緩沖溶液等試劑的配置方法2015/02/02

elisa實驗中是以抗原和抗體的免疫反應(yīng)為基礎(chǔ)，ELISA試劑以及各種溶液如何配置?zui近剛做了下ELISA實驗，把各種ELISA配置方法匯總?cè)缦拢?1)ELISA實驗包被緩沖液(2)ELISA實驗洗滌緩沖液(2)ELISA實驗洗滌緩沖液(3)ELISA實驗稀釋液;(4)ELISA實驗終止液(5)ELISA底物緩沖液(6)ELISA實驗TMB(四甲基聯(lián)苯胺)使用液(7)ELISA實驗ABTS使用液(8)ELISC。試劑(1)ELISA實驗包被緩沖液(PH9.60.05M碳酸鹽緩沖液):NaHC

免疫酶標(biāo)技術(shù)—酶標(biāo)記抗體制備2015/02/02

酶標(biāo)記物包括酶標(biāo)記抗原、酶標(biāo)記抗體和酶標(biāo)記SPA等。酶標(biāo)記物質(zhì)量的好壞直接關(guān)系到免疫酶技術(shù)的成功與否，因此被稱為關(guān)鍵的試劑。酶標(biāo)記物中zui常用的是酶標(biāo)記抗體，它是將酶與特異性抗體經(jīng)適當(dāng)方法連接而成。酶標(biāo)記抗體的質(zhì)量主要取決于純度好、活性強及親和力高的酶和抗體，其次要有良好的制備方法。目前，高質(zhì)量的酶(如辣根過氧化物酶，簡稱HRP)國內(nèi)已有商品供應(yīng)。高質(zhì)量的抗體則可通過提取純化而獲得。在制備方法上，宜選用產(chǎn)率高、不影響結(jié)合物的活性和不混雜干擾性物質(zhì)且操作簡便易行的方法。(一)酶制劑及其底物凡無毒

關(guān)于ELISA試劑盒如何正確選擇的一些個人心得2015/02/02

ELISA試劑盒以其敏感性高、特異性強、重復(fù)性好的優(yōu)點，在科研中深受廣大，科研工作者的喜愛．而市面上各種試劑盒，數(shù)不勝數(shù)．讓大家都產(chǎn)生了，選擇性綜合癥，也挑不出自已的那個試劑盒．現(xiàn)在我們公司列出了一下，一些選購的常識，希望能為大家選購時提供幫助．ELISA試劑盒雖然有多種類型，不過它們都有一個共同特點，就是進行抗原捕獲。一般捕獲形式包括將抗原吸附到微孔板或者用微孔板上的抗體進行捕獲。In-cellELISA和酶聯(lián)免疫斑點ELISPOT是兩種特殊的類型，In-cellELISA需要將微孔板中培養(yǎng)的

ELIS檢測試劑盒—酶標(biāo)板性能2015/01/30

常用的檢查方法為：以一定濃度的人IgG（一般為10ng/ml）包被ELISA板各孔，洗滌后每孔內(nèi)加入適當(dāng)稀釋度的酶標(biāo)抗人IgG抗體，保溫后洗滌，加底物顯色，終止酶反應(yīng)后，分別測每孔溶液的吸光度。控制反應(yīng)條件，使各孔讀數(shù)在吸光度0.8左右。計算全部讀數(shù)的平均值。所有單個讀數(shù)與全部讀數(shù)的均數(shù)之差，應(yīng)小于10%。以下以A、B、C三款酶標(biāo)板為例。直接法：檢測HumanIgG在酶標(biāo)板表面的吸附由上圖可以看出，這三類酶標(biāo)板中，A類酶標(biāo)板具有更好的蛋白吸附效果，同時也提高蛋白吸附的靈敏度，能夠提供更為可靠的實

ELISA檢測試劑盒—酶標(biāo)板分類2015/01/30

一、根據(jù)孔數(shù)，可分為96孔、48孔等，由于酶標(biāo)板主要是配合酶標(biāo)儀用，目前市面上的酶標(biāo)儀zui多為96孔，因此酶標(biāo)板zui為常用的也是96孔。二、根據(jù)其底部的不同，又分為平底的，U型底、V型底等。平底的折射率低，適于在酶標(biāo)儀檢測；U型底的酶標(biāo)板折射率較高，方便加樣、吸樣、混勻等操作，可以不用放在酶標(biāo)儀上，直接通過目測觀察顏色變化情況，從而判定有無相應(yīng)的免疫反應(yīng)。V底的酶標(biāo)板可以的吸取樣品。三、根據(jù)酶標(biāo)板與蛋白和其它分子結(jié)合能力的不同，又分為高結(jié)合力、中結(jié)合力和氨基化等。1）高結(jié)合力此種酶標(biāo)板，表面

ELISA實驗不可忽視的小細節(jié)—酶標(biāo)板2015/01/26

根據(jù)不同的分類標(biāo)準(zhǔn)，酶標(biāo)板有著不同的分類。一、根據(jù)孔數(shù)，可分為96孔、48孔等，由于酶標(biāo)板主要是配合酶標(biāo)儀用，目前市面上的酶標(biāo)儀zui多為96孔，因此酶標(biāo)板zui為常用的也是96孔。二、根據(jù)其底部的不同，又分為平底的，U型底、V型底等。平底的折射率低，適于在酶標(biāo)儀檢測；U型底的酶標(biāo)板折射率較高，方便加樣、吸樣、混勻等操作，可以不用放在酶標(biāo)儀上，直接通過目測觀察顏色變化情況，從而判定有無相應(yīng)的免疫反應(yīng)。V底的酶標(biāo)板可以的吸取樣品。三、根據(jù)酶標(biāo)板與蛋白和其它分子結(jié)合能力的不同，又分為高結(jié)合力、中結(jié)合

關(guān)于ELISA方法詳細過程及步驟2015/01/26

ELISA是酶聯(lián)接免疫吸附劑測定(Enzyme-LinkedImmunosorbnentAssay)的簡稱。它是繼免疫熒光和放射免疫技術(shù)之后發(fā)展起來的一種免疫酶技術(shù)。此項技術(shù)自70年代初問世以來，發(fā)展十分迅速，目前已被廣泛用于生物學(xué)和醫(yī)學(xué)科學(xué)的許多領(lǐng)域。(一)原理ELISA是以免疫學(xué)反應(yīng)為基礎(chǔ)，將抗原、牽9體的特異性反應(yīng)與酶對底物的催化作用相結(jié)合起來的一種敏感性很高的試驗技術(shù)。由于抗原、抗體的反應(yīng)在一種固相載體──聚苯乙烯微量滴定板的孔中進行，每加入一種試劑孵育后，可通過洗滌除去多余的游離反應(yīng)物

胎牛血清（FBS）的主要作用2015/01/23

血清(serum)是細胞培養(yǎng)基中的成份之一，血清的主要成份如：血漿蛋白、多肽、生長因子、激素等可以促進細胞生長或抑制生長活性。胎牛血清(fetalcalfserum，簡稱FBS)是血清中的一種，主要是來自剖腹產(chǎn)的胎牛。什么是胎牛血清?胎牛血清(fetalcalfserum，簡稱FBS)是在屠宰懷孕母牛的時候,通過心臟穿刺采血獲取的胎牛的血清，新生牛血清采自出生10至14天的小牛。胎牛血清的血清保存和使用須注意：血清應(yīng)保存在-5℃至-20℃，若存放在4℃不可超過一個月。解凍血清時，應(yīng)先將血清至于2

血清保存時必須注意的事項2015/01/23

血清保存時需注意的事項;血清，指血液凝固后，在血漿中除去纖維蛋白分離出的淡黃色透明液體或指纖維蛋白已被除去的血漿。其主要作用是提供基本營養(yǎng)物質(zhì)、提供激素和各種生長因子、提供結(jié)合蛋白、提供促接觸和伸展因子使細胞貼壁免受機械損傷、對培養(yǎng)中的細胞起到某些保護作用。我們在保存血清的時候需要注意以下幾點，以便順利完成您的實驗：1、瓶裝血清解凍需采用逐步解凍法:-20℃至-70℃低溫冰箱中的血清放入4℃冰箱中溶解1天.然后移入室溫,待全部溶解后再分裝.在溶解過程中需不斷輕輕搖晃均勻(小心勿造成氣泡),使溫度

細胞培養(yǎng)無菌操作步驟和注意事項2015/01/23

1.打開無菌工作臺及凈化室的紫外燈，消毒半小時以上。2.進入凈化室前先關(guān)閉紫外燈，打開超凈臺風(fēng)機，等待30min以上，以排盡臭氧。3.穿好隔離衣，戴好口罩，帽子。4.風(fēng)淋2分鐘。5.0.1%過氧乙酸水泡手，擦干。6.點燃酒精燈;超凈臺內(nèi)應(yīng)避免放入過多的物品;使用的吸管，滴管，試管，培養(yǎng)瓶等均事先滅菌。7.打開各類瓶蓋前先過火，以固定灰塵;打開的瓶口、試管口過火焰，鑷子使用前應(yīng)經(jīng)火焰燒灼。8.水平式風(fēng)機的超凈臺，應(yīng)使瓶口斜置，應(yīng)盡量避免瓶口敞開直立。9.同一根吸管或滴管不應(yīng)連續(xù)用于幾個不同的細胞系

常用試劑配制的注意事項2015/01/23

1、哪種濃度的酒精消毒效果?75%酒精殺菌力zui強，它能使蛋白質(zhì)脫水和變性，在3～5分鐘內(nèi)殺死細菌。因此，它用于消毒和防腐，適用于皮膚和器械、塑料制品等的消毒。高濃度的酒精(95～100%)能引起菌體表層蛋白質(zhì)凝固，形成保護層，使酒精分子不易透入，因此殺菌能力反而弱。2、試劑的等級有哪些?根據(jù)化學(xué)試劑的純度，按雜質(zhì)含量的多少可分為四級：一級試劑為純試劑，通常用G·R表示;二級試劑為分析純試劑，通常用A·R表示;三級試劑為化學(xué)純試劑，通常用C·R表示;四級試劑為實驗或工業(yè)試劑，通常用L·R表示。

細胞培養(yǎng)基和血清的選擇2015/01/15

細胞培養(yǎng)是實驗室里zui常見和zui基本的實驗了，但卻不是zui簡單的。別小看細胞培養(yǎng)，這里可蘊含著大學(xué)問。有時候細胞狀態(tài)不好，轉(zhuǎn)染、藥篩這些實驗根本就沒辦法做。影響細胞培養(yǎng)的因素很多，讓我們先從培養(yǎng)基和血清說起。經(jīng)典的培養(yǎng)基有很多種，Invitrogen(GIBCO)、thermofisher(HyClone)、Sigma等公司都可以提供。其中DMEM、RPMI1640、MEM、DMEM/F12都是應(yīng)用zui廣泛的培養(yǎng)基。其他如M199、IMDM、L15培養(yǎng)基等也用于某些細胞的培養(yǎng)。◆MEM是

血清保存的六點注意事項2015/01/15

(1)需要長期保存的血清必須儲存于-20℃-70℃低溫冰箱中。4℃冰箱中保存時間切勿超過1個月。由于血清結(jié)冰時體積會增加約10%，因此，血清在凍入低溫冰箱前，必須預(yù)留一定體積空間，否則易發(fā)生污染或玻璃瓶凍裂。(2)一般廠商提供的血清為無菌，無需再過濾除菌。如發(fā)現(xiàn)血清有懸浮物，則可將血清加入培養(yǎng)液內(nèi)一起過濾，切勿直接過濾血清。(3)瓶裝血清解凍需采用逐步解凍法:-20℃至-70℃低溫冰箱中的血清放入4℃冰箱中溶解1天。然后移入室溫，待全部溶解后再分裝。在溶解過程中需不斷輕輕搖晃均勻(小心勿造成氣泡

實驗室常用實驗生物試劑的配制大全2015/01/15

實驗室常用試劑的配制：無Ca2+、Mg2+Hanks液、Hanks液(原液)、甲基紅試劑、0.4%酚紅溶液、pH7.2Tris-NH4CI溶液(紅細胞崩解液)、0.05moI/LpH8.6巴比妥緩沖液、磷酸鹽緩沖液(PBS)、0.1mol/LPH8.4硼酸緩沖液(BBS)、0.05mol/LpH9.6碳酸緩沖液、0.01mol/LpH7.4PBS內(nèi)含2%BSA(牛血清白蛋白)、底物溶液、清潔液的配制、柯氏試劑(靛基質(zhì)試劑)。1.無Ca2+、Mg2+hanks液NaCl4.5gKCl0.2gNaH

細胞培養(yǎng)常用器材與試劑配制2015/01/15

器材與試劑干粉型培養(yǎng)基、胰蛋白酶，青霉素、鏈霉素.純凈水系統(tǒng)、電子天平、PH計、磁力攪拌器等具體步驟1.水：細胞培養(yǎng)用水必須非常純凈，不含有離子和其他的雜質(zhì)。需要用新鮮的雙蒸水、三蒸水或純凈水.2.PBS(也可用于其它BSS，如：Hanks，D-hanks液的配制)：主要用于免疫組化染色時組織或細胞的漂洗溶解定容：將藥品(NaCl8.0g，KCl0.2g，Na2HPO4?H2O1.56g，KH2PO40.2g)倒入盛有雙蒸水的燒杯中，玻璃棒攪動，充分溶解，然后把溶液倒入容量瓶中準(zhǔn)確定容至1000

實驗室各種板子的用法比較2015/01/15

1.酶標(biāo)板酶標(biāo)板是一種配在酶標(biāo)儀上做酶聯(lián)免疫實驗用的板子，常用的為96孔，主要是為了配合酶標(biāo)儀所設(shè)計，另外還有48孔的，但不常用。在酶聯(lián)免疫實驗中，抗原、抗體和其它生物分子通過多種機制吸附至酶標(biāo)板表面，然后于受檢樣本和酶標(biāo)抗原或抗體按不同的步驟進行反應(yīng)，通過酶標(biāo)儀來進行檢測。2.培養(yǎng)板培養(yǎng)板是用來培養(yǎng)細胞或者細菌的，有6孔、12孔、24孔、48孔、96孔之分。和透明的酶標(biāo)板樣子差不多，但是用途卻相差很大。在培養(yǎng)板的孔中加入適量的培養(yǎng)液，然后在適合的環(huán)境下進行細胞培養(yǎng)。一般的培養(yǎng)板都是平底的，適合

RNA病毒世界中*的分子結(jié)構(gòu):埃博拉病毒蛋白的秘密2015/01/06

目前西非爆發(fā)了埃博拉疫情，已經(jīng)報道了2000多個病例，強調(diào)了更深刻理解病毒的分子生物學(xué)的必要性，其可能對疫苗或抗病毒的藥物發(fā)展有著至關(guān)重要的作用，以治療或預(yù)防埃博拉出血發(fā)燒。現(xiàn)在，美國弗吉尼亞大學(xué)(UVA)的一個研究組，在病毒學(xué)家丹·恩格爾博士和結(jié)構(gòu)生物學(xué)家ZygmuntDerewenda博士的領(lǐng)導(dǎo)下，已獲得參與埃博拉病毒復(fù)制的關(guān)鍵蛋白質(zhì)的晶體結(jié)構(gòu)，扎伊爾埃博拉病毒核蛋白(NP)的C-末端結(jié)構(gòu)域。該研究小組解釋說，他們的結(jié)構(gòu)揭示了一個新的第三級折疊，這有助于導(dǎo)致對病毒核衣殼在感染的細胞中是如何組