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白介素ELISA試劑盒結果異常的原因分析2024/03/26

白細胞介素，簡稱白介素，是指在白細胞或免疫細胞間相互作用的淋巴因子，它和血細胞生長因子同屬細胞因子。兩者相互協調，相互作用，共同完成造血和免疫調節功能。白細胞介素在傳遞信息，激活與調節免疫細胞，介導T、B細胞活化、增殖與分化及在炎癥反應中起重要作用。白介素ELISA檢測試劑盒兩大問題問題一：造成白介素ELISA試劑盒結果異常的原因A、試劑盒沒有按規定進行保存，受高溫影響。B、試劑盒、樣品用前未平衡至室溫。C、加入試劑的體積和時間有誤，移液器計量不準，吸嘴內水分太多或不清潔。D、必須在有效期內使用

流式細胞術(FCM)實驗原理與應用詳解2024/03/25

流式細胞術：即FCM。很多小伙伴在做實驗過程中會碰到很多問題，比如：無信號、熒光強度高等一系列問題，接下來就來聊聊流式細胞技術！目前，流式細胞術廣泛應用于細胞表面和細胞內分子表達特征的分析，界定不同種類的細胞群，測定分離出的亞類純度，分析細胞的大小和總量，它可以同時分析單個細胞的多個參數。它主要用于檢測標記在抗體上的熒光強度，這些熒光抗體則可以檢測與特定細胞分子結合的蛋白或配體，如與DNA結合的溴化丙啶(PI)等。實驗原理待測樣品(如細胞、染色體、精子或細菌等)經熒光染料染色后制成樣品懸液，在一

細胞株培養過程中常見問題解決2024/03/22

細胞株是用單細胞分離培養或通過篩選的方法，由單細胞增殖形成的細胞群。細胞株的特殊性質或標志必須在整個培養期間始終存在。然而，細胞株在體外培養的過程中會出現一些問題，比如：細胞株無法在培養皿上貼壁生長，細胞株生長緩慢，細胞株死亡等。那么該如何解決呢？一、細胞株無法在培養器皿上貼壁生長細胞株胰酶消化過度：縮短胰酶消化時間或減少胰酶用量。2.支原體污染：隔離細胞株，檢測是否感染支原體；清洗通風廚和培養箱，如細胞株被污染，滅菌處理后丟棄。3.培養基中無附著因子：如果使用的是無血清配方，應確保含有附著因子

96孔板接種細胞鋪勻詳細步驟2024/03/21

做實驗，細胞鋪勻是常見的一種。然而，有許多人不是很成功，分布也不均勻:要么中間密集，周圍稀疏，要么周圍密集，中間禿頂。以下是利用96孔板把細胞鋪勻，希望對大家有用!方法/步驟1、通常，在96孔板的每個孔中加入100微升細胞懸浮液。從底部附近的井的左側添加細胞懸浮液。加入一半平板后，混合細胞懸液，不要再加入，繼續加入剩余的一半平板。添加完所有板后，蓋上板，用左手輕輕握住板的左側，用右手輕輕輕敲板的右邊緣，注意抓力(我通常輕敲三次)。如果它太強或太多次，細胞就會被濃縮和堆積。順時針旋轉盤子(逆時針效

免疫組化(IHC)實驗流程一目了然2024/03/20

實驗流程簡介一、SP三步法1）石蠟切片，常規脫蠟至水。2)0.3%或3%H2O2去離子水（無色液體）孵育10-30分鐘，以滅活內源性過氧化物酶活性。3）蒸餾水沖洗，PBS浸泡5分鐘4）候選步驟：采用抗原修復：微波（建議30分鐘內4次中火）、高壓、酶修復方法。自然冷卻，再用3分鐘×3次.5）血清封閉：室溫15-30分鐘，盡可能與二抗來源一致。傾去，勿洗。6）滴加適當比例稀釋的一抗，37℃孵育2~3小時或4℃過夜（最好復溫）。PBS沖洗，3分鐘×5次。7）滴加生物素標記的二抗，室溫或37℃孵育30分

大腸桿菌感受態細胞的制備經驗分享2024/03/19

細菌處于容易接受外源DNA的狀態稱之為感受態，通過物理或化學的方法，人工誘導細菌細胞成為敏感的感受態細胞是重組DNA轉化細菌技術的關鍵。制備出感受態細胞，我們就可以方便的將需要克隆的質粒導入其中，使其繁殖，從而獲得大量的質粒。CaCl2轉化法是常用的感受態細胞制備方法，其制備流程簡單，快捷，成本低，并且能夠滿足普通的轉化和克隆的需求。判斷感受態細胞制備的優劣主要是通過轉化效率來檢測。經轉化外源質粒DNA的大腸桿菌在含抗性的LB平板過夜培養后，平板上長滿克隆且陰性對照（未轉入外源DNA的感受態）沒

基準物質標定法vs標準溶液標定法的區別2024/03/18

先跟著遠慕一起來認識下標準溶液與基準物質標準溶液：已知準確濃度的溶液，在各種滴定分析方法中都要用到標準溶液，可根據溶質的性質、特點，按不同方法配置，配制方法有直接配置法和間接配置法。基準物質：能用來配制標準溶液或測定標準溶液濃度的物質。應具備如下條件：1、組成恒定并與化學式相符，若含結晶水，其結晶水的實際含量也應與化學式嚴格相符。2、純度足夠高(達99.9%以上)，雜質含量應低于分析方法允許的誤差限。3、性質穩定，不易吸收空氣中的水分和二氧化碳，不分解，不易被空氣氧化。4、有較大的摩爾質量，以減

熒光定量PCR中的8種對照詳細介紹2024/03/15

對照的目的是對檢測的各個環節進行監控，因此我們按照檢測的流程對對照進行梳理。常規熒光定量PCR的流程是：樣品采集-運輸-樣品處理-核酸提取-反轉錄（RNA病毒）-擴增-結果讀取。下面看看各個環節都可以使用哪些對照:1.陽性對照（Positivecontrol，PC）和陰性對照（Negativecontrol，NC）陽性對照和陰性對照是指在相同的處理條件下，比如一份已知的感染樣品和一份已知的未感染樣品，都進行了提取和擴增最終獲得了陽性結果和陰性結果。陰陽性對照強調處理過程與樣品一致，并且有明確的預

【細胞培養】支原體污染來源及影響說明2024/03/14

支原體（Mycoplasma）是一種大小介于細菌和病毒之間（0.1-0.6μm），沒有細胞壁、并獨立生活原核生物，形態呈高度多形性，呈圓形、絲狀或梨形。由于支原體直徑較小，進行除菌過濾是，約1%的支原體可以直接穿過常規的0.22μm的微孔除菌濾膜，造成細胞的支原體污染。支原體污染的來源包括：（1）工作環境的污染，實驗器材帶來的污染；（2）操作者本身的污染（一些支原體在人體是正常菌群）；（3）已受污染的培養基、血清，或用來制備細胞的原始組織或器官的污染；（4）污染支原體的細胞造成的交叉污染。目前，

PCR反應的核心成份——DNA聚合酶的選擇2024/03/13

PCR即聚合酶鏈式反應，對于常年狂奔在實驗室的實驗人來說并不陌生。那么，對于PCR反應的核心成份，DNA聚合酶，你選對了嗎？常見的DNA聚合酶如Taq、Phanta、Pfu、KOD、Primerstar、Klenow、Bst、Phi29等等。根據耐熱性來分可分為耐熱酶和常溫酶。耐熱聚合酶如Taq、Pfu、KOD、Primerstar等，常溫聚合酶包括Klenow、Bst、Phi29等。根據保真度來分，高保真聚合酶Pfu、KOD、Phanta等，普通聚合酶Taq等。DNA聚合酶的功能1）通過核苷酸

【定量分析】外標法和內標法選擇不再困難！2024/03/12

在實驗室里做了無數次定量分析實驗的你知道內標法和外標法有何區別嗎？對于內標與外標哪種更好用，我們不能一概而論，畢竟面對著不同的分析、不同的要求。做定量分析實驗，只要能簡單又高效的進行定量分析才是最重要的。什么是內標法？內標法是一種間接或相對的校準方法。在分析測定樣品中某組分含量時，加入一種內標物質以校準和消除出于操作條件的波動而對分析結果產生的影響，以提高分析結果的準確度。內標法例如加入一個不常見的元素如In等，測量曲線和樣品的時候同時測定這個元素相同濃度，假如內標物強度變化不大說明基體干擾小，

實驗室常用細胞裂解方法介紹2024/03/11

細胞破碎是指利用外力破壞細胞膜和細胞壁,使細胞內容物包括目的產物成分釋放出來的技術,是分離純化細胞內合成的非分泌型生化物質(產品)的基礎。結合重組DNA技術和組織培養技術上的重大進展,以前認為很難獲得的蛋白質現在可以大規模生產。但是由于細菌、酵母、植物細胞壁的組成成分不同,且同類細胞結成的網狀結構也不同,所以其細胞壁的堅固程度不同。而動物細胞雖沒有細胞壁,但具有細胞膜,也需要一定的細胞破碎方法來破膜,達到提取產物的目的。一般用物理或者化學方法來使得細胞裂解物理法：（1）反復凍融：將細胞反復放置于

質粒提取實驗常見問題分析2024/03/08

質粒提取原理現在較常用的質粒提取方法有三種:堿裂解法、煮沸法和去污劑裂解法，前兩種方法較為劇烈，適用于較小的質粒（＜15Kb），而去污劑裂解法則比較溫合，一般用于分子量較大的質粒（＞15Kb）。堿裂解法是一種廣泛使用的制備質粒DNA的方法。其原理為：染色體DNA遠遠大于質粒DNA，染色體DNA為線狀分子，而質粒為共價閉合環狀分子。當pH12.0-12.6堿性環境中，線性的大分子的染色體DNA完quan變性，而共價閉環質粒DNA在將PH調至中性后即可以恢復其天然構象，在高鹽濃度存在的條件下，染色體

【細胞解讀】細胞株GMP建庫及檢測法規2024/03/07

ICH指導原則國際人用藥品技術要求協調委員會(ICH)將監管機構和制藥行業聚集在一起討論藥品開發，注冊科學和技術，旨在簡化流程與組織結構，以加速醫藥開發管制流程，縮短病患采用新醫藥所需要的時間。2017年ICH會議通過了中國國家食品藥品監督管理總局的申請，總局成為國際人用藥品注冊技術協調會正式成員。目前，ICH指導原則已成為國際通用的指導原則。ICH指導原則分為四類，Q：質量指導原則；S:安全性指導原則；E:有效性指導原則；M:多學科指導原則，其中章節對細胞庫的質量有如下規定：一、細胞基質的來源

【基本操作】大腸桿菌菌種培育技術2024/03/06

為了能夠長期的保存大腸桿菌菌種且不破壞其結構，通常將含有足量細菌的液體培養基離心后在沉淀中加入等量40%甘油，-80℃凍存。之所以選擇甘油是因為甘油即使在超低溫凍結的情況下其體積也不會產生劇烈變化，不會導致由于其冰凍后體積的改變而壓迫菌種導致菌種結構的改變。等到需要的時候再將超低溫冷凍的菌體，融化并培養即可。由于此時僅僅需要將菌種培養至符合其種子液的數量要求而無需考慮培養產物以及繁殖速度等問題，所以一般采用最基礎的LB培養基即可。LB培養基配方胰化蛋白胨（Trypton）：10g/L；酵母提取物

PCR失敗因素與解決方法2024/03/05

一、模板質量問題：1）模板提取不完整，其中不含你的目的基因，或目的基因含量太低。可以跑個電泳看看提取的DNA，PCR陽性樣品與陰性樣品是否有明顯差別。如果確定是這種問題，可以增加模板量試試，但不一定行得通。2）模板里面殘留某種試劑成份，可能抑制Taq聚合酶的活性，如果是這種情況，可以用試劑盒把模板再純化一下，或將模板做個梯度稀釋以確定最佳的模板量。3）為什么跑電泳會出現拖帶呢？1.有可能的因為你的電壓調的太高了。電泳跟很多因素有關，其中就有一個是電壓，在適當的電壓范圍內增加是可以加快遷移速率，但

蛋白質分離純化也可以很簡單！2024/03/04

蛋白質的分離純化方法：一、根據蛋白質溶解度不同的分離方法1、蛋白質的鹽析法：中性鹽對蛋白質的溶解度有顯著影響，一般在低鹽濃度下隨著鹽濃度升高，蛋白質的溶解度增加，此稱鹽溶；當鹽濃度繼續升高時，蛋白質的溶解度不同程度下降并先后析出，這種現象稱鹽析。2、等電點沉淀法：蛋白質在靜電狀態時顆粒之間的靜電斥力最小，因而溶解度也最小，各種蛋白質的等電點有差別，可利用調節溶液的ph達到某一蛋白質的等電點使之沉淀，但此法很少單獨使用，可與鹽析法結合用。3、低溫有機溶劑沉淀法：用與水可混溶的有機溶劑，甲醇，乙醇或

抽提RNA實驗色素污染去除方法2024/03/01

用Trizol法沉淀RNA容易有一些雜質的。部分色素是會和RNA一起沉下來。這種情況可以用75%冷的乙醇多洗幾遍。對后續qRT-PCR多數情況下沒什么影響。另外可以用硅膠柱法純化RNA，色素殘留會少一些。RNase污染的來源1：手指頭–手指頭是外源酶的第1來源，所以必需戴手套并且頻繁更換。另外，口罩也必需戴，因為呼吸也是一個重要的酶來源。戴手套口罩的另外的好處是保護實驗人員。2：槍頭，離心管，移液器單純的滅菌是不能滅活RNase的，所以槍頭和離心管要用DEPC處理，即使是標明為DEPC處理過的。

細胞培養基的除菌方式及注意事項2024/02/29

細胞培養基滅菌的方式分為高壓滅菌和膜過濾除菌，不同的培養基由于其營養成份不同，滅菌方式也可能不同。某些培養基（如MEM）可進行高壓滅菌，這類培養基一般不含有L-谷氨酰胺和碳酸氫鈉，一般是在培養基高壓滅菌后才加入。另外可用耐高壓的谷氨酸鹽（如L-丙氨酰-L-谷氨酰胺）代替L-谷氨酰胺。可高壓滅菌的培養基在121℃、15psi，15分鐘的條件下wan全可達到滅菌效果及營養成分的最小損失，不需將滅菌時間延長。絕大多數細胞培養基不適宜高壓滅菌。因培養液中常含有維生素、蛋白質、多肽、生長因子等物質，這些物

發酵過程染菌及其防治步驟2024/02/28

發酵染菌：指在發酵過程中生產菌以外的其他微生物侵入了發酵系統，從而使發酵過程失去真正意義上的純種培養。染菌對發酵的影響一、染菌對不同發酵過程的影響1、青霉素發酵過程：由于許多雜菌都能產生青霉素酶，因此不管染菌是發生在發酵前期、中期或后期，都會使青霉素迅速分解破壞，使目的產物得率降低，危害十分嚴重。2、核苷或核苷酸發酵過程：由于所用的生產菌種是多種營養缺陷型微生物，其生長能力差，所需的培養基營養豐富，因此容易受到雜菌的污染，且染菌后，培養基中的營養成分迅速被消耗，嚴重抑制了生產菌的生長和代謝產物的