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1%瓊脂糖膠配制操作步驟2023/11/02

1%瓊脂糖膠配制步驟1、制備1%瓊脂糖凝膠(大膠用70ml,小膠用50ml):稱取0.7g(0.5g)瓊脂糖置于錐形瓶中,加入70ml(50ml)1×TAE,瓶口倒扣小燒杯.微波爐加熱煮沸3次至瓊脂糖全部融化,搖勻,即成1.0%瓊脂糖凝膠液。2、膠板制備:取電泳槽內的有機玻璃內槽(制膠槽)洗干凈,晾干,放入制膠玻璃板.取透明膠帶將玻璃板與內槽兩端邊緣封好,形成模子.將內槽置于水平位置,并在固定位置放好梳子.將冷卻到65℃左右的瓊脂糖凝膠液混勻小心地倒入內槽玻璃板上,使膠液緩慢展開,直到整個玻璃板

多克隆抗體抗原的制備步驟2023/11/02

多克隆抗體的制備一般包括以下幾個步驟：1、制備抗原。2、選擇實驗動物。3、動物免疫。4、試取血進行測試，看看是否成功免疫。5、如果成功免疫，殺死實驗動物，采集全部血清。6、純化出抗體。7、鑒定抗體。包括純度以及特異性。（一）抗原制備Ig是免疫球蛋白，對異種動物而言，是良好的抗原物質。可以刺激異種動物產生抗Ig血清，經適當提取后，產生抗Ig抗體，又叫第二抗體或抗抗體。在多數的間接標記反應中，均需制備抗Ig抗體。（二）材料與試劑1．提取的動物Ig2．弗氏wan全佐劑和弗氏不wan全佐劑3．青霉素和鏈

革蘭氏染色與細菌抗酸染色技術操作技巧分享2023/11/01

蘭氏染色和抗酸染色都屬于細菌形態學檢查法，提到革蘭氏染色大家肯定都非常熟悉，但是說到抗酸染色你不一定了解。今天我們進入細菌的世界，聊一聊細菌界的這兩大染色法：革蘭氏染色（Gramstain）用途：由丹麥病理學家ChristainGram于1884年創立，直到現今，革蘭氏染色法仍是細菌學中廣泛使用的一種鑒別染色法。通過革蘭氏染色，可將細菌鑒別為革蘭陽性菌(G+)和革蘭陰性菌(G-)兩大類。原理：細菌經龍膽紫初染和碘液媒染后，在細胞壁內形成了不溶于水的龍膽紫與碘的復合物，革蘭氏陽性菌(G+)由于其細

麗春紅染色液的配制與使用2023/11/01

麗春紅（PonceauS）也稱猩紅，可以用于PVDF膜、硝酸纖維素膜（nitrocellulosemembrane）和醋酸纖維素膜（celluloseacetatemembrane）上的蛋白的檢測。麗春紅帶負電荷，可以與帶正電荷的氨基酸殘基結合，同時麗春紅也可以與蛋白的非極性區相結合，從而形成紅色的條帶。麗春紅染色的靈敏度不及考馬斯亮藍染色。麗春紅對蛋白的染色是可逆的，染色后可以用蒸餾水，PBS或其它適當溶液洗去。因此，蛋白質N端測序時將SDS-PAGE膠上的蛋白轉移到PVDF膜，用麗春紅染色后

關于微量分析對試劑的要求標準2023/10/31

微量分析是化學分析方法的一種，用于測定微量物質的方法．被測物質的許可量僅約為常量的百分之一。重量約為1~15毫克，體積約為0.01~2毫升。分為微量定性分析和微量定量分析，采用點滴反應和顯微結晶反應．試劑用量少。但應有高度靈敏性，儀器小巧，構造特殊。操作復雜，技術要求較高。微量分析適用于極少量物質的分析，該方法已經應用了許多年了—比如，馬爾施的砷檢驗法和奈斯勒的氨檢驗法—而作為一種標準分析操作法的微量分析則是20世紀發展起來的。它主要是奧地利格拉茨大學的普列格爾和埃米希兩人工作的結果。定量微量分

斐林試劑和班氏試劑區別分析2023/10/31

斐林試劑和班氏試劑的使用方法及原理不盡相同。斐林試劑和班氏試劑都是檢驗還原性糖的試劑，二者的使用方法及原理、成分也有區別，下面就從這幾種試劑的使用原理、成分及使用方法等方面做一簡單總結。（1）班氏試劑常用于尿糖的鑒定，其配方與斐林試劑不一樣，其配方為：①400mL水中加85g檸檬酸鈉和50g無水碳酸鈉；②50mL加熱的水中加入8.5g無水硫酸銅。制成溶液；③把CuSO4溶液倒入檸檬酸鈉溶液中，邊加邊攪，如產生沉淀可濾去。（2）其反應原理與斐林試劑略有差別。利用斐林試劑鑒定時，斐林試劑甲和斐林試劑

對照品的保存與使用方法2023/10/30

對照品系指用于鑒別、檢查、含量測定的標準物質，包括雜質對照品，不包括色譜用的內標物質。在藥品檢驗工作中我們常會用到一種用來檢查藥品質量的特殊參照物——藥品標準物質(對照品)。它在藥品檢驗中具有十分重要的地位。隨著儀器分析的廣泛使用，必將越來越多地使用藥品標準物質。下面遠慕生物就來介紹一下如何對對照品進行保存和使用：(1)對照品應按說明書規定的條件妥善保存，一般置干燥陰涼處保存，某些對照品如維生素E等需避光低溫保存。要注意對照品的使用期限，過期、變質的對照品不宜再使用。開瓶后建議短期內用完，避免開

標準品與對照品怎么區分？2023/10/30

對照品與標準品區分對照品與標準品是2個不同的概念，中國藥典凡例中已有明確的定義：對照品系指用于鑒別、檢查、含量測定和校正檢定儀器性能的標準物質，而標準品系指用于生物檢定、抗生素或生物藥品中含量或效價測定的標準物質，以效價單位(U)表示。文獻中常將2種概念混淆，認為對照品就是標準品，是1種物質2種提法而已，造成錯誤的原因，可能是有的藥品既有對照品，又有標準品。例如當用微生物法測定頭孢克羅效價時，用頭孢克羅標準品，用高效液相色譜儀HPLC或紫外分光光度計UV法測定時，則用對照品;非那西丁當用作熔點校

常用蛋白質染色法原理及優缺點2023/10/27

凝膠電泳是研究蛋白質性質的一種相對簡單、快速和高靈敏度的工具。它是分析化學、生物化學和分子生物學的主要工具。通過電泳分離蛋白質是基于這樣一個事實，即帶電分子將在施加電場時通過基質遷移。蛋白質電泳分離的基質是聚丙烯酰胺。用于形成聚丙烯酰胺的化學試劑是單體丙烯酰胺和N，N'-雙丙烯酰胺（雙-丙烯酰胺）。聚合丙烯酰胺和雙丙烯酰的方法是使用TEMED（四*基乙二胺）和過硫酸銨。聚丙烯酰胺凝膠內部的聚合形成了一個交聯的微孔網絡。這種孔隙網絡允許小蛋白質分子快速通過，同時減緩較大蛋白質的遷移，這導致蛋白質基

結晶紫染色液使用說明2023/10/27

產品內容：1.結晶紫染色液(CrystalVioletStainingSolution)是一種組織或細胞染色時常用的可以把細胞核染成深紫色的染色液。2.結晶紫是一種堿性染料，可以和細胞核中的DNA結合，從而產生細胞核染色。3.一個包裝的本染色液至少可以染色200個樣品。4.室溫避光保存，一年有效。使用說明：1.樣品處理a)對于石蠟切片：二甲苯中脫蠟5-10分鐘。換用新鮮的二甲苯，再脫蠟5-10分鐘。無水乙醇5分鐘。90%乙醇2分鐘。70%乙醇2分鐘。蒸餾水2分鐘。b)對于冰凍切片：蒸餾水2分鐘。

大腸桿菌質粒DNA的提取流程2023/10/26

大腸桿菌質粒DNA的提取質粒DNA的提取是從事基因工程工作中的一項基本實驗技術，但提取方法有很多種，以下介紹一種最chang用的方法：堿裂解法：此方法適用于小量質粒DNA的提取，提取的質粒DNA可直接用于酶切、PCR擴增、銀染序列分析。方法如下：1、接1%含質粒的大腸桿菌細胞于2mlLB培養基。2、37℃振蕩培養過夜。3、取1.5ml菌體于Ep管，以4000rpm離心3min，棄上清液。4、加0.lml溶液I（1％葡萄糖，50mM/LEDTApH8.0，25mM/LTris-HClpH8.0）充

常見三種質粒提取方法介紹2023/10/26

質粒提取主要有堿裂解法，煮沸裂解法，小量一步提取法等。1、堿裂解法原理：根據共價閉合環狀DNA與線性DNA的拓撲學結構差異來分離的。在強堿環境下，細菌的細胞壁和細胞膜被破壞，基因組DNA和質粒DNA被釋放出來，線性DNA雙螺旋結構被破壞而發生變性。雖然在強堿的條件下共價閉合環狀質粒DNA也會發生變性，但兩條互補鏈仍會互相盤繞，并緊密的結合在一起。當加入pH4.8的乙醋酸鉀高鹽緩沖液使pH恢復中性時，共價閉合環狀質粒DNA復性快，而線性的染色體DNA復性緩慢，細菌蛋白質、破裂的細胞壁和變性的染色體

pH緩沖溶液的用途與正確保存使用2023/10/25

1.什么是pH標準緩沖溶液？它有哪些特點？pH緩沖溶液是一種能使pH值保持穩定的溶液。如果向這種溶液中加入少量的酸或堿，或者在溶液中的化學反應產生少量的酸或堿，以及將溶液適當稀釋，這個溶液的pH值基本上穩定不變，這種能對抗少量酸堿或大或稀釋，而使pH值不變化的溶液就稱為緩沖溶液。pH標準緩沖液有以下特點：（1）標準溶液的pH值是已知的，并達到規定的準確度；（2）標準溶液的pH值有良好的復現性和穩定性，具有較大的緩沖容量，較小的稀釋值和較小的溫度系數；（3）溶液的制備方法簡單；2.如何配制pH標準

標準溶液的知識點，看這篇就夠了2023/10/25

標準溶液的取得有兩種方法，一種是用基準物質直接配制，一種是用基準物質或已知準確濃度的標準溶液進行標定來取得。用于配制或標定標準溶液濃度的最高純度化學試劑稱為基準試劑或基準物質，用基準試劑或基準物質配制成已知準確濃度的溶液稱為標準溶液。標準溶液的濃度準確與否直接關系檢測結果的精密度、準確度。因此配制和標定中你必須知道這些事：1、用于配制或標定的標準溶液濃度的基準物質必須符合以下條件：（1）純度高、雜質含量一般不得超過0.001%，達到優級純。（2）化學性質穩定，不易吸濕，不被空氣氧化，干燥時不分解

抗原抗體的生物活性體現在這些方面2023/10/24

抗原抗體的生物活性體現在這些方面：（1）特異性結合抗原：抗體本身不能直接溶解或殺傷帶有特異抗原的靶細胞，通常需要補體或吞噬細胞等共同發揮效應以清除病原微生物或導致病理損傷。然而，抗體可通過與病毒或毒素的特異性結合，直接發揮中和病毒的作用。（2）激活補體：IgM、IgG1、IgG2和IgG3可通過經典途徑激活補體，凝聚的IgA、IgG4和IgE可通過替代途徑激活補體。（3）結合細胞：不同類別的免疫球蛋白，可結合不同種的細胞，參與免疫應答。（4）可通過胎盤及粘膜：免疫球蛋白G（IgG）能通過胎盤進入

【免疫學檢測】抗原、抗體檢測原理和應用2023/10/24

免疫學檢測即根據抗原、抗體反應的原理,利用已知的抗原檢測未知的抗體或利用已知的抗體檢測未知的抗原。由于外源性和內源性抗原均可通過不同的抗原遞呈途徑誘導生物機體的免疫應答,在生物體內產生特異性和非特異性T細胞的克隆擴增,并分泌特異性的免疫球蛋白(抗體)。由于抗體-抗原的結合具有特異性和專一性的特點,這種檢測可以定性、定位和定量地檢測某一特異的蛋白(抗原或抗體)。免疫學檢測技術的用途非常廣泛,它們可用于各種疾病的診斷、療效評價及發病機制的研究。最初的免疫檢測方法是將抗原或抗體的一方或雙方在某種介質中

如何看出細胞培養液體中存在支原體？2023/10/23

如何看出細胞培養液體中存在支原體？1.觀察細胞的形態和生長特征:支原體污染比較嚴重時可出現生長減慢，有的培養基pH明顯變酸，并出現細胞病變，以此可依次對支原體污染進行檢測，但有些情況下支原體污染引起的病變特征與病毒感染相似，因此不能準確診斷。2.分離培養法:大多數支原體可出現te有的典型菌落。因而可依次盡心檢測，該方法準確、可靠，但時間長，敏感性不夠高。3.DNA結合熒光素染色法:利用熒光染劑(bisbenzimide,Hoechst33258)偵測支原體污染。熒光染料會結合到DNA之Adeno

支原體污染對細胞的影響說明2023/10/23

支原體早發現于1898年，1956年Robinson等*從細胞培養物中分離出支原體，之后國內外關于支原體污染細胞的報道屢見不鮮。它廣泛存在于自然界中，有80余種，污染細胞常見的支原體包括發酵支原體（M.fementans）、豬鼻支原體（M.hyorhinis）、口腔支原體（M.orale）、精氨酸支原體（M.arginina）、梨支原體（M.pirum）、唾液支原體（M.salivarium）和人型支原體（M.hominis）。支原體通常附著在細胞的表面，并影響其宿主細胞的生理、遺傳等多方面的正

標準溶液與基準物質有什么關聯？2023/10/20

先來認識下標準溶液與基準物質標準溶液：已知準確濃度的溶液，在各種滴定分析方法中都要用到標準溶液，可根據溶質的性質、特點，按不同方法配置，配制方法有直接配置法和間接配置法。基準物質：能用來配制標準溶液或測定標準溶液濃度的物質。應具備如下條件：1、組成恒定并與化學式相符，若含結晶水，其結晶水的實際含量也應與化學式嚴格相符。2、純度足夠高(達99.9%以上)，雜質含量應低于分析方法允許的誤差限。3、性質穩定，不易吸收空氣中的水分和二氧化碳，不分解，不易被空氣氧化。4、有較大的摩爾質量，以減少稱量時的相

鹽酸標準溶液的配制與標定方法2023/10/20

原理由于濃鹽酸容易揮發，不能用它們來直接配制具有準確濃度的標準溶液，因此，配制HCl標準溶液時，只能先配制成近似濃度的溶液，然后用基準物質標定它們的準確濃度，或者用另一已知準確濃度的標準溶液滴定該溶液，再根據它們的體積比計算該溶液的準確濃度。標定HCl溶液的基準物質常用的是無水NaCO，其反應式如下：NaCO+2HCl→2NaCl+CO+HO滴定至反應wan全時，溶液pH為3.89，通常選用溴甲酚綠—甲基紅混合液作指示劑。試劑1.濃鹽酸（密度1.19）2.溴甲酚綠-甲基紅混合液指示劑：量取30m