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細胞培養的各種器皿的物理消毒滅菌法2017/02/23
轉化細胞通過高潮、射線、微波以及器械進行滅菌或除菌的方法均為物理滅菌方法。(1)紫外線消毒用于消毒空氣、操作臺面和一些不能用干熱、濕熱滅菌的培養器皿，如塑料培養皿、培養板等。這是常使用的消毒方法之一。(2)干熱滅菌主要用于玻璃器皿的滅菌。將用于細胞培養的器皿放人干燥箱內，加熱至160℃，保溫90-120min。用于RNA提取實驗的用品則需180℃，保溫5-8h。(3)濕熱滅菌此方法也稱為高壓蒸汽滅菌，是zui有效的一種滅菌方法。主要應用范圍是布類、橡膠制品(如膠塞)、金屬器械、玻璃器皿、某些塑料
神經細胞培養需要注意的操作方法2017/02/21
神經細胞培養需要注意的操作方法神經細胞（神經元）不易培養，只有在適宜情況下，如接種在膠原底層上，或加入神經生長因子和膠質干細胞因子時，可出現一定程度的分化，長出突起等現象，但很難使之增值。而神經膠質細胞是神經組織中比較容易培養的成分。人、鼠等腦組織即可用于神經膠質細胞培養，不僅能獲得生長的膠質細胞，也可形成能傳代的二倍體細胞系。一般說來，膠質細胞在培養中生長不穩定，不易自發轉化，但對外界因素仍保持很好的敏感性，可用ROUS病毒和SV4等誘發轉化。1、從手術室無菌取腦髓灰質或白質后，仔細剝除腦膜、
體外培養的細胞對培養基的基本要求2017/02/16
體外培養的細胞對培養基的基本要求營養成分1.氨基酸：所有ATCC細胞都需要12種必須氨基酸：纈、亮、異亮、蘇、賴、色、苯丙、蛋、組、酪、精、胱氨酸。2.單糖：六碳糖是主要能源，也是合成某些氨基酸、脂肪、核酸的原料。細胞對葡萄糖的吸收能力zui高，半乳糖zui低。體外培養動物細胞時，幾乎所有的培養基或培養液中都以葡萄糖作為必含的能源物質。3.維生素：生物素、葉酸、煙酰胺、泛酸、吡哆醇、核黃素、硫胺素、維生素b12都是培養基常有的成分。4.無機離子與微量元素：細胞生長除需要鈉、鉀、鈣、鎂、氮和磷等基
貼壁細胞的傳代培養實驗操作方法2017/02/14
貼壁細胞的傳代培養實驗操作方法實驗原理細胞在培養瓶長成致密單層后，已基本飽和，為使干細胞能繼續生長，同時也將細胞數量擴大，就必須進行傳代(再培養)。傳代培養是一種將細胞種保存下去的方法，同時也是利用培養細胞進行各種實驗的必經過程。懸浮型細胞直接分瓶就可以，而貼壁細胞需經消化后才能分瓶。實驗材料CO2培養箱、倒置顯微鏡、超凈工作臺、培養瓶、試管、移液管、巴斯德吸管、廢液缸、75％秀精棉球、酒精燈、貼壁細胞株、*培養基(RPMLI640或DMEM)、0.25％胰蛋白酶、PBS液。操作步驟(1)傳代前
細胞毒理試驗原理2017/02/09
細胞毒理試驗原理新的藥物、化妝品、食品添加劑等在投放市場之前，都必須進行大量的腫瘤細胞毒性試驗。細胞毒性主要包括殺死細胞、殺傷細胞、細胞新陳代謝發生改變等機理，表現為細胞凋亡、細胞壞死、細胞生長繁殖抑制等現象。細胞毒性試驗中，除了觀察測定上述現象外，還可以采集培養細胞在藥物處理前后的代謝變化指標，如對處理細胞和對照細胞的DNA、RNA、蛋白質、多肽等特定種類和含量進行測定。用于抗腫瘤藥物與腫瘤細胞株系的體外試驗時，可以屬于細胞藥理試驗。如果針對某些抗腫瘤藥物是否對正常體細胞有毒性的體外試驗，則屬
ATCC細胞培養基操作技術分析2017/02/07
ATCC細胞培養基操作技術分析1.準備一個培養瓶，加入適宜細胞培養的培養基，液體體積按照說明書的推薦配置，并平衡培養基的溫度和pH（CO2）。2.在37℃水浴中或ATCC細胞的正常生長溫度下將凍存管輕輕搖動。解凍要快，約2分鐘或直到冰晶融化即可。3.從水浴中取出凍存管并用浸泡或噴灑70%乙醇的方式來消毒。進一步的操作均需在無菌操作臺中嚴格無菌條件下進行。4.擰開凍存管的管帽并將內容物轉移到一個含有9ml推薦培養基的無菌離心管中。通過溫和離心（125×g10min）除去冷凍保護劑（DMSO）。棄去
細胞分化的特點主要可以概括成三點2017/01/24
細胞分化的特點主要可以概括成三點①持久性:干細胞分化貫穿于生物體整個生命進程中,在胚胎期達到zui大程度②普遍性:生物界普遍存在,是生物個體發育的基礎③穩定性和不可逆性:一般來說,分化了的細胞將一直保持分化后的狀態,直到死亡正常情況下，細胞分化是穩定、不可逆的。一旦細胞受到某種刺激發生變化，開始向某一方向分化后，即使v引起變化的刺激不再存在，分化仍能進行，并可通過細胞分裂不斷繼續下去。但大量科學實驗證明，在植物細胞中高度分化的植物細胞仍具有發育成完整植株的能力，即植物細胞的性。在動物干細胞中，部
流式細胞實驗中熒光染料如何選擇2017/01/21
流式干細胞實驗中熒光染料如何選擇（1）確定熒光染料本身所適合的流式干細胞儀，需要了解染料的激發波長和發射波長、儀器所配制的檢測濾光片和激發光源。（2）了解熒光素的相對熒光強度：相對熒光強度反映的是熒光素-單抗結合物的亮度，其判斷標準是染色指數。影響相對熒光強度的因素包括：不同儀器的激光及濾片組合不同，熒光素的相對熒光強度不同；抗體上熒光素分子的多少會影響相對的熒光強度。（3）選擇原則：考慮抗原的密度【高密度表達的抗原可考慮選擇幾乎所有的熒光素；低密度表達的抗原需要可提供較高S/N比值的熒光素，如
如何識別細胞是屬于哪種生物污染2017/01/19
如何識別細胞是屬于哪種生物污染ATCC細胞培養中常見的生物污染類型有7種，分別是細菌污染、支原體污染、原蟲污染、黑膠蟲污染、真菌污染、病毒污染以及非細胞污染。他們在細胞培養中污染的特點如下：1、細菌：細菌在普通倒置顯微鏡下為黑色細沙狀，根據感染細菌的不同，可有不同的外形，培養液一般會渾濁變黃，對細胞生長影響明顯。2、支原體：黑色的，好象多為多形，培養液一般培養液一般會渾濁，原體感染，國內血清很多都沒有做支原體陰性檢測，而支原體是牛血清中zui常見的微生物之一。而且它不能用過濾的辦法除去。支原體感
細胞有機物中主要由幾大類分子所組成2017/01/17
細胞有機物中主要由幾大類分子所組成（一）糖類干細胞中的糖類既有單糖，也有多糖。細胞中的單糖是作為能源以及與糖有關的化合物的原料存在。重要的單糖為五碳糖（戊糖）和六碳糖（己糖），其中zui主要的五碳糖為核糖，zui重要的六碳糖為葡萄糖。葡萄糖不僅是能量代謝的關鍵單糖，而且是構成多糖的主要單體。多糖在細胞結構成分中占有主要的地位。細胞中的多糖基本上可分為兩類：一類是營養儲備多糖；另一類是結構多糖。作為食物儲備的多糖主要有兩種，在植物細胞中為淀粉（starch），在動物細胞中為糖元（glycogen）
檢測干細胞四唑鹽比色法試驗原理2017/01/12
檢測干細胞四唑鹽比色法試驗原理此法的原理是：活細胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性的MTT還原為難溶性的藍紫色結晶物，并沉積在細胞中，而干細胞無此功能。二甲基亞砜（DMSO）能溶解細胞中的藍紫色結晶物，用酶聯免疫檢測，以在490nm波長處測定其光吸收值，可間接反應活細胞數量。在一定細胞數范圍內，MTT結晶物形成的量與細胞數成正比?！?.25%胰蛋白酶消化細胞使其成為單細胞，用含0.1%胎牛血清的RPMI培養基配成1x10^9個/L的但細胞懸液，將細胞接種于96孔培養板中，每孔100ul。●將培養
腫瘤細胞培養的凍存和注意事項2017/01/10
腫瘤細胞培養的凍存和注意事項1.腫瘤細胞應遵守慢凍快融的原則。先將水浴鍋調至37-37。5度，取出凍存的細胞迅速放入后將細胞面浸至水面以下不斷搖動至融化。2.在無菌臺內將*培養基加入50ml的小培養瓶內，約5ml左右，然后用無菌吸管從凍存管內取出細胞，置培養并內輕輕搖晃，使細胞均勻后置培養箱內培養3.將貼壁細胞消化后離心收集，懸浮細胞直接離心收集，以*培養基或胎牛血清重懸細胞至終濃度約106/ml。加入10%的DMSO。以每管1～2ml分裝至凍存管中。用絕熱材料包裹置-70攝氏度冰箱冷凍。次日保
腫瘤細胞的結構和繁殖2017/01/05
腫瘤細胞的結構和繁殖腫瘤細胞通常很小，需用顯微鏡才能見到，但也有肉眼可見的大型卵細胞。細胞的形狀因其生長、分化和功能的不同而有很大變化，有卵圓形、柱形、鱗形、梭形、樹枝形等。真核細胞的構造主要可分為細胞核、細胞質和細胞膜三部分。細胞膜之內的生活物質包括細胞核和細胞質統稱為原生質?；罴毎幕瘜W組成主要是水，約占90%，其余為蛋白質、核酸、脂類、糖類以及少量無機物質。在細胞質中有一些稱為細胞器的結構，如線粒體、溶酶體、高爾基體、內質網等。植物細胞和動物細胞相比稍有不同，植物細胞外面有細胞壁，細胞質內
ATCC細胞培養基不同之處2017/01/03
培養基基礎培養基絕大多數是建立在平衡鹽溶液（BSS）基礎上，添加了氨基酸、維生素和其它與血清中濃度相似的營養物質。zui廣泛應用的基礎培養基是MEM，其中含有13種必須氨基酸、8種維生素。目前科研市場經典的培養基有很多種，其中DMEM、RPMI1640、MEM、DMEM/F12都是應用zui廣泛的培養基。其他如M199、IMDM、L15培養基等也用于ATCC細胞的培養。1.MEM是由基礎培養基(BME)發展而來的，其中增加了組分的范圍及濃度。2.改良的基礎培養基培養基也就是我們所說的DMEM培養
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