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2018
04-24

Western Blot（WB）實驗詳解
Western免疫印跡（WesternBlot）是將蛋白質轉移到膜上，然后利用抗體進行檢測。對已知表達蛋白，可用相應抗體作為一抗進行檢測，對新基因的表達產物，可通過融合部分的抗體檢測。我們將通過以下幾個方面來詳細地介紹一下WesternBlot技術：【原理】與Southern或Northern雜交方法類似，但WesternBlot采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳，被檢測物是蛋白質，“探針”是抗體，“顯色”用標記的二抗。經過PAGE分離的蛋白質樣品，轉移到固相載體（例如PVDF膜）上，固相載體以非共價鍵
2018
04-18

什么是預染蛋白Marker
預染蛋白marker是WesternBlot實驗中常用的一種試劑，那么預染蛋白marker到底是什么？用的時候又有哪些注意事項呢？預染蛋白marker其實就是一些純化好的蛋白混合物，通過與染料共價耦聯，在電泳過程中或者轉膜時可以直接觀察到。預染蛋白marker的出現方便了我們的實驗，可以幫助我們在電泳時、電泳后，以及轉膜后監測電泳情況和估計遷移率。比如使用垂直電泳時*分辨區域大約在膠的2/3處，我們使用預染Marker就可以預測電泳的進程。當目標蛋白進入*分辨區時就可以停止電泳，以期得到*分辨效
2018
04-18

愛必信（Absin®）重磅推出信號通路明星小分子抑制劑！
愛科研，必信它！科研百寶箱生化試劑領域專家，愛必信(Absin®)重磅推出信號通路明星小分子抑制劑！作為愛必信生化試劑產品線的補充版，明星小分子抑制劑系列延續了愛必信質量可靠，，產品全面的優勢，實現了對愛必信生化試劑的有力補充，更好地滿足廣大科研工作者的需要。愛必信，以親和力的價格,豐富全面的產品線，快速的售后服務為用戶提供質量可靠的小分子抑制劑！產品特點：☆質量可靠，提供高純度的化合物！☆產品豐富全面，超過5000種抑制劑可供選擇！☆確保再次供應！☆規格包裝靈活，可提供定制！☆部分熱銷產品現貨
2018
04-10

Forskolin的功能與作用
Forskolin在不與細胞表面受體相互作用前提下刺激腺苷酸環化酶活性。在脂肪細胞中Forskolin's促進cAMP產生進而可以抑制嗜堿性粒細胞和肥大細胞脫顆粒作用以及組胺釋放，降低血壓、眼內壓，抑制血小板聚集，促進血管舒張，支氣管擴張和甲狀腺激素分泌，刺激脂肪分解。Forskolin抑制血小板活化因子(PAF)的結合,這種抑制不依賴于cAMP形成可能是Forskolin直接作用于PAF或者通過干擾PAF與它的受體結合實現的，似乎對多種膜轉運蛋白也有效果并且可以抑制脂肪細胞，紅細胞，血小板，和
2018
03-28

ELISA trouble shooting
問題一:陰性對照出現陽性結果可能的原因解決的方法試劑/樣品污染試劑和樣品可能被污染，或者由于孔之間的濺灑交叉污染。使用新鮮試劑，小心操作移液器夾心ELISA-檢測抗體與包被抗體反應確定使用的是正確的包被抗體和檢測抗體，他們之間不會相互反應酶標板洗板不*用洗液充滿板空確保每孔被充分洗滌，洗板前確保所有的剩余抗體溶液被倒凈抗體量過多導致非特異性結合根據推薦用量使用抗體盡量使用較少的抗體問題二：酶標板整體背景高可能的原因解決的方法結合反應太強或時間過長檢查底物的稀釋，使用建議的稀釋度。當酶標儀顯色足夠
2018
03-26

IHC Trouble Shooting
問題一：缺乏染色可能的原因檢測方法和相應的措施沒有抗原用原位雜交的方法檢測蛋白表達（有時即使能檢測到mRNA。翻譯也有可能受阻）由于錯誤的儲存方法按照說明書儲存。通常，將抗體按照足夠配制單次實驗工作溶液的體積分裝。儲存在手動除霜冰箱中（-20到-70℃），避免反復凍融無效的一抗或二抗單獨檢查報告系統以評估試劑的有效性。固定不充分嘗試增加固定時間或改用不同的固定劑過度固定減少浸潤或固定后步驟的時間。如果必須使用浸潤法固定（例如病理實驗室中的尸檢組織或切片），可以用抗原修復試劑修復被遮蔽的表位不兼容
2018
03-26

羊血清在免疫組化中的作用
都說是封閉，羊血清究竟封閉的是什么（抗原？）那接下來加一抗怎么又能反應結合？不是封閉了嗎？封閉的目的是為了減少非特異染色。這里，允許小編介紹下免疫組化中封閉血清的原理，封閉血清的原理主要有兩點：*是待檢樣本會非特異性的和蛋白結合，從而導致背景過高，因此可以用BSA或血清封閉掉這部分非特異性的結合，從這點看，BSA和血清沒有明顯區別。第二是待檢樣本中可能會有Fc受體，可以和抗體恒定區結合，與抗體特異性無關，封閉血清中有抗體，因此用血清可以封閉掉一抗及二抗和樣本Fc受體之間結合。BSA則無法封閉Fc
2018
03-22

IP trouble shooting
問題一：高背景可能的原因解決方法去污劑不溶性蛋白有殘留離心后立即去除上清，沉淀中留有不溶性蛋白質，如果再次有懸浮發生，再次離心洗滌不充分蓋上管蓋離心前反復顛倒幾次非特異性蛋白質與珠子結合珠子用BSA預封閉不充分，確保牛血清白蛋白（組分V）新鮮，新鮮珠子與含1%牛血清白蛋白的PBS孵育1小時，使用前PBS洗3-4次使用的抗體特異性不強使用親和純化的抗體，預先吸收使用太多抗體導致非特異性結合檢查推薦抗體用量。嘗試使用更少的抗體細胞裂解液中含有太多的細胞或太多蛋白，導致洗脫液中很多額外的（假陽性）蛋白
2018
03-20

WB Trouble Shooting
問題一：轉膜不充分可能的原因驗證或解決方法膜沒有*均勻濕透使用100%甲醇浸透膜靶蛋白分子量小于10kDa選擇小孔徑的膜，縮短轉移時間靶蛋白等電點等于或接近轉移緩沖液PH值可嘗試使用其他緩沖液如CAPS緩沖液（pH10.5）或使用低pH值緩沖液如乙酸緩沖液甲醇濃度過高過高甲醇濃度濃度會導致蛋白質與SDS分離，從而沉淀在凝膠中，同時會使凝膠收縮或變硬，從而抑制高分子量蛋白的轉移。降低甲醇濃度或者使用乙醇或異丙醇代替轉移時間不夠對于厚的膠以及高分子量蛋白需要延長轉移時間問題二：背景高可能的原因驗證或
2018
03-15

預制膠常見問題指南
注意事項★一定要使用我們盒內配套的電泳緩沖液；★上樣量和濃度不能過高。1.我們的預制膠與哪些品牌電泳槽兼容？●Bio-RadMini-PROTEAN(II/3/TetraSystem)；●HoeferMightySmall(SE250/SE260/SE280)；●LifeTechnology(Invitrogen)；●NovexMini-Cell；●MiniGelTank(A25977)(請與EZbiolab特制擋板配合使用)；●北京六一DYCZ-25E；●君意東方JY-SCZ2+；●天能VE1
2018
03-13

【推薦】蛋白marker精彩問答
WesternBlot（WB）即蛋白免疫印跡實驗，是將蛋白樣本通過聚丙烯酰胺電泳按分子量大小講蛋白分離，再通過電場力將蛋白轉移到雜交膜上。然后通過一抗/二抗復合物對靶蛋白進行特異性檢測的方法。WB是進行蛋白質分析zui流行和成熟的技術之一。在WB過程中，分子量Marker就像個螺絲釘一樣，只是個小細節，然而就是這樣一個小細節對實驗結果有著不可忽視的作用。這個WB參照家族的一員的作用主要是用來指示蛋白條帶所對應的分子量大小，只有標準量無誤了，實驗結果才有說服力，除此之外，蛋白標準還有表示轉移成功或
2018
03-09

IHC、ELISA和WB區別
免疫學三大工具，IHC、Westernblot、ELISA，分別用于定位，定性和定量!IHC（免疫組化）是融合了免疫學原理（抗原抗體特異性結合）和組織學技術（組織的取材、固定、包埋、切片、脫蠟、水化等），通過化學反應使標記抗體的顯色劑(熒光素、酶、金屬離子、同位素)顯色，來對組織（細胞）內抗原進行定位、定性及定量的研究(主要是定位)。樣本是細胞或組織，要在顯微鏡下觀察結果，可能出現膜陽性、質陽性和核陽性。ELISA（酶聯免疫吸附試驗）用到了免疫學原理和化學反應顯色，待測的樣品多是血清、血漿、尿液
2018
03-07

血清那些事兒
血清小知識血清是由血漿去除纖維蛋白而形成的一種很復雜的混合物，其組成成份雖大部分已知，但還有一部分尚不清楚，而且血清組成及含量常隨供血動物的性別、年齡、生理條件和營養條件不同而異。血清中含有各種血漿蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生長因子、激素、無機物等，其主要作用是提供基本營養物質、提供激素和各種生長因子、提供結合蛋白、提供促接觸和伸展因子使細胞貼壁免受機械損傷、對培養中的細胞的起到某些保護作用。胎牛血清應取自剖腹產的胎牛;新牛血清取自出生24小時之內的新生牛;小牛血清取自出生10-30天的小牛
2018
02-28

免疫組化步驟剖析（二）
1、血清封閉：組織切片上有剩余的位點可以與一抗非特異性結合，造成后續結果的假陽性；因此需要使用封閉劑進行封閉。常用試劑為血清和BSA等。封閉血清一般是和二抗同一來源的，但不能與一抗來源一致。2、一抗和二抗濃度和孵育時間：一抗孵育條件在免疫組化反應中zui重要，包括孵育時間和抗體濃度。一抗孵育溫度有幾種：4度、室溫、37度，其中4度效果*；孵育時間與溫度、抗體濃度有關，一般37度1-2h，4度過夜（從冰箱拿出后37度復溫45min）。具體條件還要摸索。二抗一般室溫或37度30min-1h，具體時間
2018
02-24

免疫（共）沉淀（IP/CoIP）試劑盒常見問題匯總
Q：步驟上的可選步驟能否省略？A：該試劑盒是經過實驗驗證的，再進行驗證實驗的時候實驗室都是要做這個可選步驟的，建議不要省略，按照說明書操作。Q：proteinA和proteinGbeads怎么選？A：各5ul就可以了Q：超聲破碎冰上操作是必須的嗎？4℃條件能否微調？A：建議冰上操作，4℃是可以微調的。Q：beads出現吸不出來的情況，怎么處理？A：吸之前需注意槍頭要剪一下再吸，如若beads吸不上來，可加入等體積的20%乙醇混勻后再吸。Q：如果沒有超聲破碎儀的話，能不能用酶解的辦法破碎細胞？A：
2018
02-05

標簽抗體知多少
標簽抗體，別名為抗原表位，又稱抗原決定簇，是抗原分子中決定抗原特異性的特殊區域或基團，是與抗體特異性結合的結構或序列。隨著生物技術的發展，科研人員可以通過DNA重組技術，構建包含目的基因以及表位標記的融合蛋白，進而通過特異性標簽抗體對其鑒定與純化，以達到研究的需求。常用的標簽包括myc、HA、Flag、His、GST等。1.Flag標簽—抗Flag標簽抗體Flag標簽系統是利用一個短的親水性八氨基酸肽(DYKDDDDK)融合到目標蛋白。Flag標簽可位于蛋白質的C端或N端，該系統已廣泛應用于各種
2017
12-22

免疫組化的實驗步驟剖析（一）
1、標本固定：固定的目的是：①，防止標本從玻片上脫落；②，除去防礙抗原—抗體結合的類脂，使抗原抗體結合物易于獲得良好的染色結果；③，固定的標本易于保存。固定劑的選擇一般用4%多聚甲醛。2、脫水、石蠟包埋和制片：脫水用梯度乙醇（由低到高）充分脫水、對組織要*浸蠟、切片時刀片要干凈和鋒利。否則容易裂片和脫片等。3、脫蠟和水化：這是為了后面的抗體等試劑能夠充分與組織中抗原等結合反應。脫蠟可以先60度20min，然后立即二甲苯1-3分別10min，但當天制好的切片可以60度3-4h。水化用梯度乙醇（由高
2017
12-15

產品問答之霍亂毒素B亞單位（CTB）
Q:什么是霍亂毒素？A:霍亂毒素由（Choleratoxin,CT）兩個亞單位組成，即A亞單位（CTA）和B亞單位（CTB）。A亞單位是霍亂毒素的活性部分，B亞單位的主要功能是通過與哺乳動物小腸上皮細胞上的單唾液酸神經節苷脂GM1結合而使得A亞單位進入細胞。Q:霍亂毒素是如何反激活的？A:霍亂毒素由霍亂操縱子（ctx）編碼，從5'到3'方向，依次是反激活因子ToxR的識別序列、啟動子、A基因（ctxA）、B基因（ctxB）和不依賴于r因子的轉錄終止系列。現在普遍認為操縱子中只有一個啟動子，ctx
2017
11-30

血清常見問題解答
血清小知識血清是由血漿去除纖維蛋白而形成的一種很復雜的混合物，其組成成份雖大部分已知，但還有一部分尚不清楚，而且血清組成及含量常隨供血動物的性別、年齡、生理條件和營養條件不同而異。血清中含有各種血漿蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生長因子、激素、無機物等，其主要作用是提供基本營養物質、提供激素和各種生長因子、提供結合蛋白、提供促接觸和伸展因子使細胞貼壁免受機械損傷、對培養中的細胞的起到某些保護作用。胎牛血清應取自剖腹產的胎牛;新牛血清取自出生24小時之內的新生牛;小牛血清取自出生10-30天的小牛
2017
11-23

蛋白Marker使用指南
在westernBlot過程中，蛋白Marker雖然是其中小小的一環，但是這個小細節對實驗結果的影響不可忽視。Marker在蛋白電泳中的作用主要是用來指示蛋白條帶所對應的分子量大小，只有標準量無誤，實驗結果才有說服力。此外，Marker還能顯示轉膜是否成功以及蛋白在凝膠上的電泳程度的作用。因此選擇正確的蛋白Marker也是westernblot實驗成功的必要條件之一。總體來說，蛋白分子量標準可以分成未染蛋白分子量標準、預染蛋白分子量標準二個級別。未染色的蛋白分子量標準未染色的蛋白分子量標準是zu

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