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上海吉至生化科技有限公司
初級(jí)會(huì)員 | 第8年
簡(jiǎn)單介紹蛋白質(zhì)分離純化的方法2020/10/21
分子大小不同進(jìn)行分離純化;蛋白質(zhì)是一種大分子物質(zhì),并且不同蛋白質(zhì)的分子大小不同,因此可以利用一些較簡(jiǎn)單的方法使蛋白質(zhì)和小分子物質(zhì)分開,并使蛋白質(zhì)混合物也得到分離。根據(jù)蛋白質(zhì)分子大小不同進(jìn)行分離的方法主要有透析、超濾、離心和凝膠過濾等。透析和超濾是分離蛋白質(zhì)時(shí)常用的方法。透析是將待分離的混合物放入半透膜制成的透析袋中,再浸入透析液進(jìn)行分離。超濾是利用離心力或壓力強(qiáng)行使水和其它小分子通過半透膜,而蛋白質(zhì)被截留在半透膜上的過程。這兩種方法都可以將蛋白質(zhì)大分子與以無機(jī)鹽為主的小分子分開。它們經(jīng)常和鹽析、
電化學(xué)檢測(cè)器介紹2020/10/16
電化學(xué)檢測(cè)器主要有安培、極譜、庫侖、電位、電導(dǎo)等檢測(cè)器,屬選擇性檢測(cè)器,可檢測(cè)具有電活性的化合物。目前它已在各種無機(jī)和有機(jī)陰陽離子、生物組織和體液的代謝物、食品添加劑、環(huán)境污染物、生化制品、農(nóng)藥及醫(yī)藥等的測(cè)定中獲得了廣泛的應(yīng)用。其中,電導(dǎo)檢測(cè)器在離子色譜中應(yīng)用多。電化學(xué)檢測(cè)器的優(yōu)點(diǎn)是:①靈敏度高,小檢測(cè)量~般為ng級(jí),有目可達(dá)pg級(jí);②選擇性好,可測(cè)定大量非電活性物質(zhì)中極痕量的電活性物質(zhì);③線性范圍寬,一般為4~5個(gè)數(shù)量級(jí);④設(shè)備簡(jiǎn)單,成本較低;⑤易于自動(dòng)操作。
胡蘿卜素與葉黃素優(yōu)缺點(diǎn)介紹2020/10/14
葉黃素具有*的保健功能和良好的著色性能,可在食品行業(yè)廣泛應(yīng)用,在焙烤食品、飲料、冷凍食品、果凍及果醬類食品中著色,色彩鮮艷且持久。攝入足夠量的葉黃素能保護(hù)視黃斑,有效地預(yù)防視力下降。葉黃素作為抗氧化劑,能清除自由基和游離基,限制由于新陳代謝和關(guān)心所致的組織損傷,提高肌體的免疫力,預(yù)防衰老。葉黃素作為著色劑根據(jù)不同產(chǎn)品建議添加量為(葉黃素晶體)。葉黃素與β-胡蘿卜素的性能對(duì)比:1.兩者都為胡蘿卜素類物質(zhì),呈色都為金黃色,即色調(diào)一致;2.β-胡蘿卜素在油質(zhì)產(chǎn)品里只能少量溶解,在100℃的植物油里只能
培養(yǎng)基常用的滅菌方法2020/10/13
高壓蒸汽滅菌:高壓蒸汽滅菌適合于耐高溫培養(yǎng)基、接種器械和蒸餾水的滅菌。培養(yǎng)基在愛制備過程中混入各種雜菌,分裝后應(yīng)立即滅菌,至少應(yīng)在24h內(nèi)完成滅菌工作。滅菌時(shí)一般是在0.105MPa壓力下,溫度121℃時(shí),滅菌15~30min即可。消毒時(shí)間不宜過長(zhǎng),也不能超過規(guī)定的壓力范圍,否則有機(jī)物質(zhì)特別是維生素類物質(zhì)就會(huì)在高溫下分解,失去營(yíng)養(yǎng)作用,也會(huì)使培養(yǎng)基變質(zhì)、變色,甚至難以凝固。可將蒸餾水或自來水裝在三角瓶中,裝水量一般不超過瓶的2/3,用牛皮紙或硫酸紙包扎封口,然后放入高壓鍋中滅菌后即為無菌水。滅菌
緩沖溶液的緩沖能力介紹2020/10/10
緩沖溶液中加入少量強(qiáng)酸或強(qiáng)堿,其溶液pH值變化不大,但若加入酸,堿的量多時(shí),緩沖溶液就失去了它的緩沖作用。這說明它的緩沖能力是有一定限度的。緩沖溶液的緩沖能力與組成緩沖溶液的組分濃度有關(guān)。0.1mol·L-1HAc和0.1mol·L-1NaAc組成的緩沖溶液,比0.01mol·L-1HAc和0.01mol·L-1NaAc的緩沖溶液緩沖能力大。關(guān)于這一點(diǎn)通過計(jì)算便可證實(shí)。但緩沖溶液組分的濃度不能太大,否則,不能忽視離子間的作用。組成緩沖溶液的兩組分的比值不為1∶1時(shí),緩沖作用減小,緩沖能力降低,當(dāng)
核酸提取或純化技術(shù)主要有幾類2020/09/30
1、傳統(tǒng)方法(操作復(fù)雜,耗時(shí)長(zhǎng))2、離心柱法(試劑盒)3、磁珠法(可單獨(dú)采購(gòu)磁珠或買成品試劑盒)其中,磁珠法可實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化操作,是目前比較主流的方法。核酸提取應(yīng)用在疾病控制中心、臨床疾病診斷、輸血安全、法醫(yī)學(xué)鑒定、環(huán)境微生物檢測(cè)、食品安全檢測(cè)、畜牧業(yè)和分子生物學(xué)研究等多種領(lǐng)域。核酸提取的注意事項(xiàng):1、儀器的安裝環(huán)境:正常的大氣壓(海拔高度應(yīng)該低于3000m)、溫度20-35℃、典型使用溫度25℃、相對(duì)濕度10%-80%、暢通流入的空氣為35℃或以下。2、避免將儀器放置在靠近熱源的地方,如電暖爐;同
實(shí)驗(yàn)室純水可分幾個(gè)等級(jí)2020/09/29
實(shí)驗(yàn)室純水分四個(gè)等級(jí):1、蒸餾水:實(shí)驗(yàn)室常用的一種純水,雖設(shè)備便宜,但極其耗能和費(fèi)水且速度慢,應(yīng)用會(huì)逐漸減少。蒸餾水能去除自來水內(nèi)大部分的污染物。2、去離子水:應(yīng)用離子交換樹脂去除水中的陰離子和陽離子,但水中仍然存在可溶性的有機(jī)物,可以污染離子交換柱從而降低其功效,去離子水存放后也容易引起細(xì)菌的繁殖。3、反滲水:反滲水克服了蒸餾水和去離子水的許多缺點(diǎn),利用反滲透技術(shù)可以有效的去除水中的溶解鹽、膠體,細(xì)菌、病毒、細(xì)菌內(nèi)毒素和大部分有機(jī)物等雜質(zhì)。4、超純水:超純水在TOC、細(xì)菌、內(nèi)毒素等指標(biāo)方面并不
質(zhì)粒小量提取試劑盒能提取多大的質(zhì)粒2020/09/28
大提質(zhì)粒和小提質(zhì)粒的基本原理是一樣的,都是通過一定的方法(如加堿裂解)使在細(xì)菌內(nèi)大量擴(kuò)增的質(zhì)粒釋放出來,然后經(jīng)過去蛋白去RNA等一系列步驟純化DNA,終將DNA提取出來。區(qū)別:1.大提用于大量菌液的提取,100ml-500ml均可,而小提用的菌液量很少,一般1.5-5ml。2.一般試劑盒中大提比小提多了溶菌酶、異丙醇(回收沉淀核酸)、含一定量PEG的氯化物(回收質(zhì)粒DNA)及乙酸銨等,其作用及目的都是有利于細(xì)菌的裂解和質(zhì)粒的純化,所以大提的產(chǎn)物比小提的量多很多,而且純度很高。3.小提一般用于質(zhì)粒
試劑盒REF與LOT分別代表什么2020/09/24
REF是商品號(hào),LOT是生產(chǎn)批號(hào)。1、REF:Reference參考號(hào),可以是商品號(hào)或合同號(hào)。2、LOT:生產(chǎn)批號(hào)。就是同一批貨物共有的序列號(hào)。一般的,根據(jù)批號(hào)可以追蹤產(chǎn)品的生產(chǎn)情況(生產(chǎn)日期、質(zhì)量等級(jí)、出廠時(shí)間等等)。若發(fā)現(xiàn)產(chǎn)品有問題,可以根據(jù)批號(hào)來檢查同批次的其它產(chǎn)品有無問題。試劑盒用于盛放檢測(cè)化學(xué)成分、藥物殘留、病毒種類等化學(xué)試劑的盒子。一般醫(yī)院、制藥企業(yè)使用。使用時(shí)根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要購(gòu)買提取試劑盒,不是試劑盒,提出RNA,不能確保其質(zhì)量以及完整性,會(huì)影響RT-PCR、Northernblot、
蛋白質(zhì)生物合成中涉及到那幾種RNA2020/09/23
涉及到三種:mRNA、tRNA和rRNA。蛋白質(zhì)生物合成步是轉(zhuǎn)錄,也就是以DNA分子的一條鏈為模板合成mRNA的過程,所形成的mRNA是單鏈結(jié)構(gòu)的,它的作用是作為合成的蛋白質(zhì)的模反,所以mRNA被稱為信使RNA。信使RNA進(jìn)入細(xì)胞質(zhì)后,與細(xì)胞質(zhì)中的核糖體結(jié)合進(jìn)來,而核糖體則是由蛋白質(zhì)和rRNA組成的,這里的rRNA叫核糖體RNA,是組成核糖體的成分,而核糖體則是合成蛋白質(zhì)的場(chǎng)所。要想合成蛋白質(zhì),有了模板和場(chǎng)所還不夠,還需要另一種RNA,這是一種用來搬運(yùn)氨基酸的工具,被稱為轉(zhuǎn)運(yùn)RNA,簡(jiǎn)寫成tRN
核苷酸的種類介紹2020/09/22
核苷酸由核苷和磷酸組成,核苷又可分為堿基和戊糖(即五碳糖,DNA中是脫氧核糖,RNA中是核糖)兩部分,因此核苷酸可以分為脫氧核苷酸和核糖核苷酸兩大類。就脫氧核苷酸而言,其中的堿基包括腺嘌呤(A)、胸腺嘧啶(T)、胞嘧啶(C)和鳥嘌呤(G)四種,所以脫氧核苷酸可分為腺嘌呤脫氧核苷酸、胸腺嘧啶脫氧核苷酸、胞嘧啶脫氧核苷酸和鳥嘌呤核苷酸4種;由于書寫過于煩瑣,為簡(jiǎn)潔起見,通常都習(xí)慣用4種堿基的符號(hào)(A、T、C和G)分別代替4種核苷酸書寫。核糖核苷酸也是這樣,只是核糖核苷酸中以尿嘧啶(U)取代了胸腺嘧啶
PBS 與PBST的區(qū)別2020/09/21
PBS是磷酸鹽緩沖液,PBST是磷酸鹽吐溫緩沖液PBST含有Tween-20成分,PBS不含有。磷酸鹽緩沖液(PhosphateBufferedSaline,簡(jiǎn)稱PBS)的是常用的用于生物學(xué)研究的一個(gè)緩沖溶液。PBS可以為三種溶液的英文縮寫,分別是磷酸鹽緩沖溶液(phosphatebufferedsolution)、磷酸鹽緩沖鹽水(phosphatebufferedsaline)及磷酸鹽緩沖鈉(phosphatebufferedsodium),其配制方法不同,pH值不同,發(fā)揮的生物學(xué)作用亦不*相
重組基因的篩選的方法2020/09/18
不同的重組DNA分子獲得的轉(zhuǎn)化子中鑒定出含有目的基因的轉(zhuǎn)化子即陽性克隆的過程就是篩選。成熟篩選方法如下:插入失活法:外源DNA、片段插入到位于篩選標(biāo)記基因(抗生素基因或β-半乳糖苷酶基因)的多克隆位點(diǎn)后,會(huì)造成標(biāo)記基因失活,表現(xiàn)出轉(zhuǎn)化子相應(yīng)的抗生素抗性消失或轉(zhuǎn)化子顏色改變,通過這些可以初步鑒定出轉(zhuǎn)化子是重組子或非重組子。常用的是β-半乳糖苷酶顯色法即藍(lán)白篩選法。PCR篩選和限制酶酶切法:提取轉(zhuǎn)化子中的重組DNA分子作模板,根據(jù)目的基因已知的兩端序列設(shè)計(jì)特異引物,通過PCR技術(shù)篩選陽性克隆。PCR
抗體稀釋液的介紹2020/09/15
抗體稀釋液,顧名思義,用于稀釋抗體的溶液。通常在進(jìn)行抗原抗體反應(yīng)的實(shí)驗(yàn)中,是用已經(jīng)制備的抗體(試劑)檢測(cè)(鑒定或分析)樣本中的抗原(及其組成成分)。常用的抗體試劑的濃度(效價(jià)或滴度)很高,需要稀釋(合適的倍數(shù))后才可以用于檢測(cè)抗原的試驗(yàn)反應(yīng)中。在這一步,用于稀釋抗體的溶液,也就是稀釋劑,稱為抗體稀釋劑。抗體稀釋劑通常由磷酸緩沖液為主體,加牛血清白蛋白(0.5~1%)作為蛋白穩(wěn)定劑(因?yàn)榭贵w稀釋后在低濃度下容易失活),另外還需要加疊氮鈉(0.05%~0.1%)或硫柳汞(0.05%)作為防腐劑(保存
紫外可見分光光度計(jì)使用注意事項(xiàng)2020/09/14
在使用紫外可見分光光度計(jì)時(shí),必須要注意一些使用后的維護(hù)、保養(yǎng),和一些基本使用注意事項(xiàng),才能達(dá)到更好的使用效果。1、使用的吸收池必須潔凈,并注意配對(duì)使用。量瓶、移液吸管均應(yīng)校正、洗凈后使用。2、取吸收池時(shí),手指應(yīng)拿毛玻璃面的兩側(cè),裝盛樣品以池體的4/5為度,使用揮發(fā)性溶液時(shí)應(yīng)加蓋,透光面要用擦鏡紙由上而下擦拭干凈,檢視應(yīng)無溶劑殘留。吸收池放入樣品室時(shí)應(yīng)注意方向相同。用后用溶劑或水沖洗干凈,晾干防塵保存。3、供試品溶液濃度除各該品種已有注明外,其吸收度以在0.3~0.7之間為宜。4、測(cè)定時(shí)除另有規(guī)定
極低密度脂蛋白和低密度脂蛋白區(qū)別2020/09/10
極低密度脂蛋白:極低密度脂蛋白,是由肝臟利用乳糜顆粒殘粒、膽汁酸、脂肪酸、糖和蛋白質(zhì)的中間代謝物與肝臟內(nèi)合成的載脂蛋白組成的一種脂蛋白。因其密度極低(0.96~1.063),分子大小為25~80NNL,內(nèi)含三酰甘油60%。低密度脂蛋白:低密度脂蛋白是一種運(yùn)載膽固醇進(jìn)入外周組織細(xì)胞的脂蛋白顆粒,可被氧化成氧化低密度脂蛋白,當(dāng)?shù)兔芏戎鞍祝绕涫茄趸揎椀牡兔芏戎鞍祝∣X-LDL)過量時(shí),它攜帶的膽固醇便積存在動(dòng)脈壁上,久了容易引起動(dòng)脈硬化。因此低密度脂蛋白被稱為“壞的膽固醇”。
抗體的作用及作用特點(diǎn)2020/09/08
特異性結(jié)合是抗體的作用的特點(diǎn),相應(yīng)的抗原表面均含有抗原表位,也就是抗原決定基,這個(gè)表位含有和抗體結(jié)合的對(duì)應(yīng)基因位點(diǎn),當(dāng)抗原和抗體結(jié)合時(shí),就會(huì)緊密連接并將抗原吞噬直至崩解或與抗原結(jié)合成大分子物質(zhì),被免疫系統(tǒng)視為大分子異物排出體內(nèi)。機(jī)體由于抗原的刺激而產(chǎn)生的具有保護(hù)作用的蛋白質(zhì)。它(免疫球蛋白不僅僅只是抗體)是一種由漿細(xì)胞(效應(yīng)B細(xì)胞)分泌,被免疫系統(tǒng)用來鑒別與中和外來物質(zhì)如細(xì)菌、病毒等的大型Y形蛋白質(zhì),僅被發(fā)現(xiàn)存在于脊椎動(dòng)物的血液等體液中,及其B細(xì)胞的細(xì)胞膜表面。抗體的功能與其結(jié)構(gòu)密切相關(guān)。同一抗
糖醛酸代謝的介紹2020/09/03
糖醛酸代謝主要在肝臟和紅細(xì)胞中進(jìn)行,它由尿嘧啶核苷二磷酸葡萄糖(UDPG)上聯(lián)糖原合成途徑,經(jīng)過一系列反應(yīng)后生成磷酸戊糖而進(jìn)入磷酸戊糖通路,從而構(gòu)成糖分解代謝的另一條通路。1-磷酸葡萄糖和尿嘧啶核苷三磷酸(UTP)在尿二磷葡萄糖焦磷酸化酶(UDPG焦磷酸化酶)催化下生成尿二磷葡萄糖(UDPG),UDPG經(jīng)尿二磷葡萄糖脫氫酶的作用進(jìn)一步氧化脫氫生成尿二磷葡萄糖醛酸,脫氫酶的輔酶是NAD+。尿二磷葡萄糖醛酸(UDPGA)脫去尿二磷生成葡萄糖醛酸。葡萄糖醛酸在一系列酶作用下,經(jīng)NADPH+H+供氫和N
MTris-HCl 配制的方法介紹2020/09/01
濃度1MTris-HCl配制量1L方法:1.稱量121.1gTris置于lL燒杯中。2.加入約800ml的去離子水,充分?jǐn)嚢枞芙狻?.按下表加入濃HCl量調(diào)節(jié)所需要的pH值。pH值濃HCl7.4約70ml7.6約60ml8.0約42ml4.將溶液定容至1L。5.高溫高壓滅菌后,室溫保存。注意:應(yīng)使溶液冷卻至室溫后再調(diào)定pH值,因?yàn)門ris溶液的pH值隨溫度的變化差異很大,溫度每升高1℃,溶液的pH值大約降低0.03個(gè)單位。1.5MTris-HCl(pH8.8)濃度1.5MTris-HCl配制量1
蔗糖的性質(zhì)和用途2020/08/31
蔗糖的性質(zhì)是雙糖,晶體白色,具有旋光性,用途是食品中重要的添加劑,用作冷凍點(diǎn)的改良劑、結(jié)晶改良劑和膨松劑。物理性質(zhì):蔗糖極易溶于水,其溶解度隨溫度的升高而增大。蔗糖屬結(jié)晶性物質(zhì)。純蔗糖晶體的比重為1.5879,蔗糖溶液的比重依濃度和溫度的不同而異。化學(xué)性質(zhì):發(fā)生熱分解作蔗糖的功效:蔗糖對(duì)人類的營(yíng)養(yǎng)和健康起了重要的作用。人類享受著蔗糖的甜美及利用蔗糖為添加劑生產(chǎn)出來的食品,還應(yīng)用著以蔗糖為原料生產(chǎn)出的成百上千種的生活物質(zhì)。蔗糖被人食用后,在胃腸中由轉(zhuǎn)化酶轉(zhuǎn)化成葡萄糖和果糖,一部分葡萄糖隨著血液循環(huán)
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