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如何構(gòu)建耐藥細(xì)胞株？2022/03/10: 如何構(gòu)建耐藥細(xì)胞株？腫瘤細(xì)胞對(duì)化療藥物產(chǎn)生耐藥性是腫瘤治療失敗的重要因素之一，成為目前阻礙腫瘤治療的絆腳石。因此，探索腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生耐藥的原因以及如何改善腫瘤細(xì)胞對(duì)化療藥物耐藥仍是目前研究的熱點(diǎn)和難點(diǎn)。腫瘤細(xì)胞耐藥的產(chǎn)生是一個(gè)復(fù)雜的過程，它的機(jī)制廣泛牽涉到藥物代謝學(xué)、病理學(xué)、生理學(xué)等多個(gè)學(xué)科，這就決定了腫瘤細(xì)胞對(duì)化療藥物產(chǎn)生耐藥的機(jī)制是復(fù)雜的，因此體外建立化療藥物耐藥細(xì)胞株仍然是研究腫瘤細(xì)胞耐藥機(jī)制的重要方法。一種藥物長(zhǎng)期作用于某類細(xì)胞，殺死其中沒有抗性的細(xì)胞，而對(duì)這類細(xì)胞中具有抗性的細(xì)胞不能殺死

如何選擇ELISA試劑盒2022/03/09: ELISA試劑盒又稱為酶聯(lián)免疫試劑盒，用于對(duì)液體樣本中的目標(biāo)物質(zhì)進(jìn)行定性和定量檢測(cè)。隨著國家對(duì)科研項(xiàng)目的重視，在科研單位和廣大科研類院校也越來越受歡迎。ELISA試劑盒之所以受歡迎和它自身的優(yōu)點(diǎn)是分不開的。首先適合檢測(cè)的樣本很廣泛包括血清、血漿、尿液、胸腹水、灌洗液、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清、組織勻漿等標(biāo)本，具體根據(jù)試劑盒說明書決定，通常檢測(cè)靈敏度比較高。其次ELISA是將酶催化的放大作用與特異性抗原抗體反應(yīng)結(jié)合起來的一種微量分析技術(shù)。酶標(biāo)記抗原或抗體以后，既不影響抗原抗體反應(yīng)的特異性，也不改變酶本

細(xì)胞培養(yǎng)中黑點(diǎn)的問題~~2022/03/08: 24、培養(yǎng)中常出現(xiàn)一些黑點(diǎn)，是污染嗎?首先肉眼觀察培養(yǎng)液是否變渾濁，如果變渾濁，基本可以確定是污染;如果肉眼觀察培養(yǎng)液沒有變渾濁：在顯微鏡下觀察黑點(diǎn)大小和形狀是否規(guī)則，是否運(yùn)動(dòng)，是做布朗運(yùn)動(dòng)還是呈直線型快速移動(dòng)。如果黑點(diǎn)大小不規(guī)則，做布朗運(yùn)動(dòng)，黑點(diǎn)可能是細(xì)胞碎片(可能是細(xì)胞狀態(tài)不佳或者消化過度引起的)，也可能是血清反復(fù)凍融產(chǎn)生的蛋白沉淀引起的，也可能是細(xì)胞的代謝產(chǎn)物。如果黑點(diǎn)大小一致，快速移動(dòng)，很可能是細(xì)菌污染。25、如何預(yù)防細(xì)胞培養(yǎng)中黑點(diǎn)的產(chǎn)生?掌握細(xì)胞傳代的最佳時(shí)機(jī)，不要細(xì)胞長(zhǎng)老了再傳代;掌

胎牛血清常見問題集合~2022/03/07: ①保存血清最好方法是什么？我們建議血清應(yīng)保存在-5℃至-20℃。但是若存放于4℃時(shí)，請(qǐng)勿超過一個(gè)月。若您一次無法用完一瓶，建議您無菌分裝血清至恰當(dāng)?shù)臒o菌容器內(nèi)，再放回冷凍。反復(fù)凍融會(huì)對(duì)血清的品質(zhì)造成不良影響。②如何解凍血清才不會(huì)使產(chǎn)品質(zhì)量受損？我們建議您將血清從冷凍箱取出后，先置于2-8℃冰箱使之溶解，然后在室溫下使之全溶。但必須注意的是，溶解過程中必須規(guī)則地?fù)u晃均勻。③血清解凍后發(fā)現(xiàn)有絮狀沉淀物出現(xiàn)，該如何處理？血清在解凍過程（包括沒有*解凍）或儲(chǔ)存在2-8℃時(shí)，血清中的各種蛋白和脂蛋白（如凝

經(jīng)費(fèi)不是很充足，但是用量也蠻大，怎么選血清2022/03/04: 經(jīng)費(fèi)不是很充足，但是用量也蠻大，怎么選血清這個(gè)是最多的一個(gè)群體，有些老師有錢，但是這個(gè)錢也是自己辛辛苦苦取得的，所以我覺得可以考慮一些小品牌，但是小品牌不代表是假貨，不代表是國產(chǎn)，也不代表是假洋品牌。買的初期，需要去多找?guī)讉€(gè)牌子的試用裝同時(shí)測(cè)試。教你一眼判斷血清的質(zhì)量淡黃色，透明——2小時(shí)以內(nèi)的國產(chǎn)新生牛血清，膽紅素含量較少；金黃色，透明——產(chǎn)下較長(zhǎng)時(shí)間的新生牛血清，一般超過2小時(shí)了；金黃色，不透明——產(chǎn)下幾天或更久的小牛血清；淡黃色，帶一點(diǎn)微紅，透明——等級(jí)高的進(jìn)口胎牛血清，如特級(jí)的北美；淡紅

WinSeran細(xì)胞培養(yǎng)常見兩個(gè)問題（抱團(tuán)+空泡問題）2022/03/03: WinSeran細(xì)胞培養(yǎng)常見兩個(gè)問題（抱團(tuán)+空泡問題）細(xì)胞抱團(tuán)怎么處理?一些懸浮細(xì)胞抱團(tuán)生長(zhǎng)是正常現(xiàn)象，大部分懸浮細(xì)胞在細(xì)胞密度很高的情況下，很可能會(huì)出現(xiàn)部分細(xì)胞抱團(tuán)生長(zhǎng)的現(xiàn)象，聚團(tuán)細(xì)胞很容易死亡并演化成絮狀物，殃及周圍的懸浮細(xì)胞，因此在培養(yǎng)懸浮細(xì)胞時(shí)需控制好細(xì)胞密度。如果出現(xiàn)了細(xì)胞團(tuán)，可以通過細(xì)胞篩去掉部分較大的細(xì)胞團(tuán)，也可以嘗試一下方法：將細(xì)胞懸液收集到15ml離心管中，靜置20min左右，小心取上層細(xì)胞上清培養(yǎng)(該方法只能去除部分較大的細(xì)胞團(tuán))。細(xì)胞內(nèi)有空泡，是否是正常現(xiàn)象?部分細(xì)胞本身存

如果細(xì)胞發(fā)生微生物污染時(shí)，應(yīng)如何處理？2022/03/02: 如果細(xì)胞發(fā)生微生物污染時(shí)，應(yīng)如何處理？原則上：直接滅菌后丟棄之。當(dāng)重要的培養(yǎng)污染時(shí)，研究者可能試圖消除或控制污染。首先，確定污染物是細(xì)菌、真菌、支原體或酵母，把污染細(xì)胞與其它細(xì)胞系隔離開，用實(shí)驗(yàn)室消毒劑消毒培養(yǎng)器皿和超凈臺(tái)，檢查HEPA過濾器。高濃度的抗生素和抗霉菌素可能對(duì)一些細(xì)胞系有毒性，因而，做劑量反應(yīng)實(shí)驗(yàn)確定抗生素和抗霉菌素產(chǎn)生毒性的劑量水平。這點(diǎn)在使用抗生素如霉素b和抗霉菌素如泰樂菌素時(shí)尤其重要。下面是推薦的確定毒性水平和消除培養(yǎng)污染的實(shí)驗(yàn)步驟。1.在無抗生素的培養(yǎng)基中消化、計(jì)數(shù)和稀釋細(xì)

細(xì)胞培養(yǎng)中，黑點(diǎn)已經(jīng)產(chǎn)生了，如何進(jìn)行處理?2022/03/01: 黑點(diǎn)已經(jīng)產(chǎn)生了，如何進(jìn)行處理?如果判定黑點(diǎn)是污染，請(qǐng)及時(shí)將細(xì)胞處理后丟棄。其他情況，可參照以下進(jìn)行：如果是懸浮細(xì)胞：收集細(xì)胞上清慢速離心(500-600rpm/min，5-6min)并更換新的培養(yǎng)瓶;如果是貼壁細(xì)胞：將細(xì)胞用PBS洗2-3遍，洗的時(shí)候，輕輕拍打培養(yǎng)瓶，讓貼壁不牢的碎片和顆粒脫落，再棄去PBS，消化時(shí)先加低濃度的胰酶如0.05%胰酶消化1min左右，讓細(xì)胞間隙中的顆粒和碎片脫落下來，去掉低濃度胰酶，然后正常消化細(xì)胞，將收集的細(xì)胞懸液慢速離心(500-600rpm/min，5-6mi

27個(gè)細(xì)胞傳代培養(yǎng)常見問題匯總2022/02/24: 1、一般拿到細(xì)胞后，應(yīng)該注意什么?收到細(xì)胞先不開蓋,用酒精將整個(gè)細(xì)胞瓶外壁進(jìn)行消毒，放在培養(yǎng)箱靜置若干小時(shí)后(看細(xì)胞密度而定)在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況，并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照(建議收細(xì)胞時(shí)的培養(yǎng)基拍一張照片，觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況，顯微鏡下拍細(xì)胞100X，200X各兩張)，排除細(xì)胞本身污染的情況。2、何時(shí)須更換培養(yǎng)基?視細(xì)胞生長(zhǎng)密度而定，常規(guī)細(xì)胞2-3天更換培養(yǎng)基。3、細(xì)胞何時(shí)進(jìn)行傳代較好?一般情況下細(xì)胞生長(zhǎng)至*匯合后就應(yīng)該傳代，所有細(xì)胞生長(zhǎng)都有一個(gè)要求不宜生長(zhǎng)過密(也就是常說

如何確認(rèn)細(xì)胞交叉污染2022/02/22: 交叉污染雖不如微生物污染普遍，但與HELA細(xì)胞及其他生長(zhǎng)迅速的細(xì)胞系間廣泛的交叉污染是個(gè)明確的問題，會(huì)造成嚴(yán)重后果。從聲譽(yù)好的細(xì)胞庫獲取細(xì)胞系、定期檢查細(xì)胞系性質(zhì)及采用良好的無菌技術(shù)有助于避免交叉污染。通過DNA指紋圖譜、核型分析和同位素分析可確認(rèn)有無交叉污染。血清與培養(yǎng)基通常血清的添加比例為10%，當(dāng)然也可根據(jù)細(xì)胞狀態(tài)和生長(zhǎng)速率適當(dāng)增加或減少添加比例。在更換血清品牌或者批次時(shí)，最好需對(duì)血清的品質(zhì)進(jìn)行驗(yàn)證，防止對(duì)實(shí)驗(yàn)造成影響。對(duì)于培養(yǎng)基，目前商品化的比較成熟，穩(wěn)定性也較好。如若需自配培養(yǎng)基時(shí)，過

WinSera胎牛血清的儲(chǔ)存和融化方法~2022/02/18: 儲(chǔ)存條件：-20°C凍存。胎牛血清一次解凍后，應(yīng)按單次習(xí)慣用量分裝，分裝后的血清仍-20°C凍存。若置于4°C的血清，應(yīng)在一周內(nèi)用完。為保證細(xì)胞培養(yǎng)的最佳效果，血清和培養(yǎng)基的配置，應(yīng)遵循“現(xiàn)用現(xiàn)配”原則。配好的培養(yǎng)液，應(yīng)于一周內(nèi)用完。血清避免反復(fù)凍融，避免在4°C或更高溫度儲(chǔ)存過久，否則會(huì)破壞血清中有效活性成分，影響血清品質(zhì)。血清融化專業(yè)方法：目的;更好保留血清中活性成分，使細(xì)胞培養(yǎng)更穩(wěn)定。推薦血清廠家專業(yè)融化方法（此方法國際通用，適用于所有種類的血清）：操作溫度100ml500ml1000ml

細(xì)胞培養(yǎng)常見問題大集合~2022/02/17: 01、復(fù)蘇細(xì)胞的正確打開方式?復(fù)蘇過程應(yīng)快融，目的是防止小冰晶形成大冰晶，即冰晶的重結(jié)晶。凍存細(xì)胞從液氮中取出后，立即放入37℃水浴中，輕輕搖動(dòng)冷凍管，使其在1分鐘內(nèi)全部融化(不要超過3分鐘)。解凍后的細(xì)胞可以直接接種到含有*培養(yǎng)液的細(xì)胞培養(yǎng)瓶中直接進(jìn)行培養(yǎng)，24小時(shí)后再用新鮮*培養(yǎng)液替換舊培養(yǎng)液，以去除DMSO。如果細(xì)胞對(duì)冷凍保護(hù)劑特別敏感，解凍后的細(xì)胞應(yīng)先通過離心去除冷凍保護(hù)劑，然后再接種到含*生長(zhǎng)培養(yǎng)液的培養(yǎng)瓶中。注：操作時(shí)戴好手套，防止凍傷;帶上防護(hù)眼鏡可以防止液氮罐里剛剛拿出來的管子液

細(xì)胞培養(yǎng)常見問題及其解決辦法2022/02/16: 細(xì)胞培養(yǎng)常見問題及其解決辦法1.如何選用特殊細(xì)胞系培養(yǎng)基？培養(yǎng)某一類型細(xì)胞沒有固定的培養(yǎng)條件。在MEM中培養(yǎng)的細(xì)胞，很可能在DMEM或M199中同樣很容易生長(zhǎng)。總之，MEM做粘附細(xì)胞培養(yǎng)、RPMI-1640做懸浮細(xì)胞培養(yǎng)是一個(gè)好的開始。2.何時(shí)須更換培養(yǎng)基？視細(xì)胞生長(zhǎng)密度而定，或遵照細(xì)胞株基本數(shù)據(jù)上之更換時(shí)間，按時(shí)更換培養(yǎng)基即可。3.可否使用與原先培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基？不能。每一細(xì)胞株均有其特定使用且已適應(yīng)之細(xì)胞培養(yǎng)基，若驟然使用和原先提供之培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基，細(xì)胞大都無法立即適應(yīng)，造成細(xì)胞無

外泌體樣本收集2022/02/16: 外泌體是由細(xì)胞分泌的納米級(jí)膜性小囊泡，直徑約30~150nm。外泌體來源多樣，廣泛存在并分布于各種生物液體中，富含來源細(xì)胞的蛋白質(zhì)、脂質(zhì)和核酸，參與細(xì)胞間的信息交流。不同病理和生理?xiàng)l件下，外泌體的內(nèi)容物不盡相同，因此外泌體可以很好地反映生物體的疾病與健康狀態(tài)。此外，外泌體特殊的膜結(jié)構(gòu)能夠保護(hù)其內(nèi)容物如RNA（microRNA、mRNA、lncRNA、circRNA）免受酶的降解，保證其能在各類體液中被穩(wěn)定檢測(cè)到，因此外泌體是研究各種疾病的良好生物學(xué)材料，可作為腫瘤潛在的biomarker和治療靶

國產(chǎn)WINSERA胎牛血清是你明智選擇2022/02/07: 國產(chǎn)WINSERA胎牛血清是你明智選擇選擇胎牛血清的標(biāo)準(zhǔn)血源可追溯性選擇來源安全、可追溯的FBS對(duì)于細(xì)胞培養(yǎng)來說至關(guān)重要。目前市面上存在較多以假亂真的FBS產(chǎn)品，科研工作者對(duì)血清的真實(shí)產(chǎn)地、來源難以鑒別。對(duì)此，國際血清行業(yè)協(xié)會(huì)（ISIA）實(shí)施了供應(yīng)鏈可追溯性的行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，以確保FBS的質(zhì)量和安全性。例如，F(xiàn)BS供應(yīng)商是否保留原產(chǎn)地的可追溯記錄？是否持有血清生產(chǎn)各階段處理、運(yùn)輸和商業(yè)交易的文件？這些都是判斷FBS可追溯性需要考慮的因素。產(chǎn)品檢測(cè)每款FBS在生產(chǎn)上市之前，必須經(jīng)過嚴(yán)格的質(zhì)控檢測(cè)。質(zhì)控環(huán)

細(xì)胞培養(yǎng)常見問題及其解決2022/01/25: 細(xì)胞培養(yǎng)常見問題及其解決1.如何選用特殊細(xì)胞系培養(yǎng)基？培養(yǎng)某一類型細(xì)胞沒有固定的培養(yǎng)條件。在MEM中培養(yǎng)的細(xì)胞，很可能在DMEM或M199中同樣很容易生長(zhǎng)。總之，選MEM做粘附細(xì)胞培養(yǎng)、RPMI-1640做懸浮細(xì)胞培養(yǎng)是一個(gè)好的開始。2.何時(shí)須更換培養(yǎng)基？視細(xì)胞生長(zhǎng)密度而定，或遵照細(xì)胞株基本數(shù)據(jù)上之更換時(shí)間，按時(shí)更換培養(yǎng)基即可。3.可否使用與原先培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基？不能。每一細(xì)胞株均有其特定使用且已適應(yīng)之細(xì)胞培養(yǎng)基，若驟然使用和原先提供之培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基，細(xì)胞大都無法立即適應(yīng)，造成細(xì)胞無法

蘇州千舍主營產(chǎn)品--胎牛血清2021/12/06: 我司主營產(chǎn)品是國內(nèi)傳代細(xì)胞系和細(xì)胞培養(yǎng)相關(guān)的生物試劑。WinSera、、NTC、SIGMA、以色列BI、GEMINI、PAN、德國Cegrogen、SERANA和SBI無外泌體血清等血清。常規(guī)液體培養(yǎng)基、胰酶、雙抗、無血清凍存液、日本三菱產(chǎn)品、ELISA試劑盒、Sigma現(xiàn)貨試劑等產(chǎn)品。售后完善，我們以飽滿的熱情歡迎新老客戶選購！血清是一種天然培養(yǎng)基，含有細(xì)胞生長(zhǎng)繁殖所需的多種營養(yǎng)成分，如蛋白質(zhì)、多肽等，多用于細(xì)胞培養(yǎng)、生物制品及診斷試劑的生產(chǎn)。血清的主要成分是蛋白質(zhì)，血清的組成成分與含量常常與

為什么細(xì)胞培養(yǎng)用牛血清，而不用其他動(dòng)物血清2021/12/01: 牛血清是細(xì)胞培養(yǎng)中用量最大的天然培養(yǎng)基,含有豐富的細(xì)胞生長(zhǎng)必須的營養(yǎng)成份,常用于動(dòng)物細(xì)胞的體外培養(yǎng),具有極為重要的功能.1.提供對(duì)維持細(xì)胞指數(shù)生長(zhǎng)的激素,基礎(chǔ)培養(yǎng)基中沒有或量很少的營養(yǎng)物,以及主要的低分子營養(yǎng)物.2.提供結(jié)合蛋白,能識(shí)別維生素、脂類、金屬和其他激素等,能結(jié)合或調(diào)變它們所結(jié)合的物質(zhì)活力.3.有些情況下結(jié)合蛋白質(zhì)能與有毒金屬和熱原質(zhì)結(jié)合,起到解毒作用.4.是細(xì)胞貼壁、鋪展在塑料培養(yǎng)基質(zhì)上所需因子來源.5.起酸堿度緩沖液作用.6.提供蛋白酶抑制劑,使在細(xì)胞傳代時(shí)使剩余胰蛋白酶失活,保護(hù)

細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢的原因2021/11/16: 一.個(gè)別人的培養(yǎng)體系出現(xiàn)問題1.檢查你所培養(yǎng)的細(xì)胞是否存在污染。(a)如果培養(yǎng)細(xì)胞未添加抗生素(必須添加!),細(xì)胞污染則是不可避免的。1)用肉眼和顯微鏡進(jìn)行檢查2)如果細(xì)胞被污染則要棄掉。(b)由于支原體污染不容易覺察到，因此必須定期檢測(cè)(c)檢測(cè)可能污染的途徑和原因2.檢查你用于培養(yǎng)細(xì)胞的培養(yǎng)基和血清(例如:是否批次不同或廠商不同)。如果你常規(guī)使用的是粉劑或10X儲(chǔ)存液，而現(xiàn)在購買的培養(yǎng)基更換為1X液體，而隨后證明問題就出自于此，處理方法請(qǐng)參見下則分享內(nèi)容。3.如果問題與培養(yǎng)基無關(guān)，那么很可能

原代細(xì)胞培養(yǎng)那些事兒2021/11/15: 原代細(xì)胞培養(yǎng)之分離注意事項(xiàng)1、組織塊培養(yǎng)法1）組織塊接種后的前3天，在觀察和移動(dòng)的過程中，注意不要引起液體的振蕩。要避免經(jīng)常翻動(dòng)和振動(dòng)，否則組織塊不易附著于瓶壁上或附著后也會(huì)脫落飄起。2）加入的培養(yǎng)液不宜過多，避免浸泡的組織塊受輕微的波動(dòng)而脫落下來。3）當(dāng)細(xì)胞向外遷徙出來后要注意記錄并去除漂浮的組織塊和殘留的細(xì)胞，它們產(chǎn)生的有毒物質(zhì)會(huì)影響原代細(xì)胞的生長(zhǎng)。4）為促進(jìn)組織塊盡快粘貼在培養(yǎng)瓶皿上，可以在種植前先將膠原薄層涂在培養(yǎng)瓶底壁上。2、貼壁型原代細(xì)胞1)原代培養(yǎng)的分離細(xì)胞在初次接觸體外環(huán)境時(shí)，它

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