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細胞培養為什么要加入胎牛血清2022/04/13

細胞培養為什么要加入胎牛血清許多臨床和做科研的小伙伴們都要涉及到細胞培養，在細胞培養實驗中，血清無疑成為影響實驗成功與否的重要因素，而在眾多血清之中，牛血清是最為常用的。牛血清是細胞培養中用量最大的天然培養基，其中含有豐富的細胞生長所必須的營養成份，常用于動物細胞的體外培養，具有極為重要的功能。牛血清是一種成分復雜的混合物，而且血清的組成及含量通常隨供血動物的性別、年齡、生理條件和營養條件不同而存在差異。牛血清主要成分有蛋白質，多肽類，激素類，其他成分如氨基酸、葡萄糖、微量元素等。我們都知道牛血

關于胎牛血清熱滅活的問題2022/04/13

關于胎牛血清熱滅活的問題成為常規操作的血清熱滅活至少70%的研究者對血清的滅活僅僅是因為遵照常規操作，或者說認為是理所當然的。常規滅活建議的溫度在45℃到62℃之間，而時間則從15分鐘到60分鐘不等，其中常用的手法是56℃熱處理30分鐘。隨著血清采集、處理、加工工藝的提高，許多早先認為是熱滅活的原因已經不再成立，只有少數對血清進行熱滅活的研究者在實驗中證實了這一步驟的有效性和必要性。熱敏補體與熱滅活熱滅活目的是為了去除血清中補體等對熱敏感的物質，但是在胎牛血清中對補體的滅活則明顯沒有必要。Tri

千舍~教你一眼判斷血清的質量2022/04/11

教你一眼判斷血清的質量淡黃色，透明——2小時以內的國產新生牛血清，膽紅素含量較少；金黃色，透明——產下較長時間的新生牛血清，一般超過2小時了；金黃色，不透明——產下幾天或更久的小牛血清；淡黃色，帶一點微紅，透明——等級最高的進口胎牛血清，如特級的北美；淡紅色，透明——普通的進口胎牛血清；紅色偏深，透明——普通的進口胎牛血清，南美的居多，采血環節不夠嚴謹；紅色偏暗，透明——普通胎牛血清，保存不好，血紅蛋白氧化了；紅色，不透明——進口小牛血清，透明度越差，牛齡越大。

細胞凍存&細胞復蘇2022/04/08

03細胞凍存：試劑：凍存液，PBS，胰酶，含血清的培養基；流程：要凍存，先配置凍存液，凍存液包含了：DMSO：防止在低溫（零度以下至-196℃）保存細胞時，細胞內液會形成冰晶，滲透壓會發生改變，細胞結構會出現紊亂，會導致細胞出現損傷。凍存液制備時，一般需與血清一起配置：因為兩者互融時，會散發熱量，所以凍存液需提前制備。因為細胞太多了，需要凍存，所以要先看一看，吸一吸，洗一洗，分一分，中和一下，吹打制成細胞懸液，離心，吸掉上清液，加入凍存液，輕輕吹吸均勻，每管等量1ml裝入凍存管，4℃20min,

PAN胎牛血清的解凍正確方法2022/04/07

PAN胎牛血清的解凍正確方法胎牛血清的正確存放與解凍是各位實驗家尤為關注的一個問題，在保證質量的前提下，胎牛血清的正確存放與解凍的方法總結如下：1）胎牛血清從冷凍箱取出后，先置于2-8℃的冰箱使之全融。但必須注意的是，溶解過程中必須規則的搖晃均勻；2）長時間儲存在2-8℃時，血清中的各種蛋白和脂蛋白可能聚集而形成沉淀或可見的混濁。因此，推薦在-20℃以下存儲血清，避免反復凍融。3）建議血清硬保存在-20℃條件下。若存放于4℃時，請勿超過1個月。若一次無法用完一瓶，建議無菌分裝血清至恰當的滅菌容器

如何避免細胞培養過程中的污染?2022/04/06

如何避免細胞培養過程中的污染?主要還是考慮無菌環境，盡量做好操作臺的滅菌，別把培養基滴落在生物安全柜的入風口，別在培養箱里把培養基打翻。這兩個地方霉菌一旦滋生，那你就只能等著用甲醛熏蒸了。紫外無法殺滅霉菌，酒精也不行，只能用甲醛熏蒸，但是一定要注意安全。復蘇的時候，水浴鍋也需要進行滅菌處理。一旦出現污染，不要急，能救的就用抗生素救一下，但是一般情況下，選擇扔掉。避免交叉感染，要不只能整個實驗室消毒了。如果細胞發生微生物污染時，應如何處理？原則上：直接滅菌后丟棄之。當重要的培養污染時，研究者可能試

教你一眼判斷血清的質量2022/04/02

教你一眼判斷血清的質量淡黃色，透明——2小時以內的國產新生牛血清，膽紅素含量較少；金黃色，透明——產下較長時間的新生牛血清，一般超過2小時了；金黃色，不透明——產下幾天或更久的小牛血清；淡黃色，帶一點微紅，透明——等級最高的進口胎牛血清，如特級的北美；淡紅色，透明——普通的進口胎牛血清；紅色偏深，透明——普通的進口胎牛血清，南美的居多，采血環節不夠嚴謹；紅色偏暗，透明——普通胎牛血清，保存不好，血紅蛋白氧化了；紅色，不透明——進口小牛血清，透明度越差，牛齡越大。

科研小知識：每天都在使用，但你真的了解胎牛血清嗎？2022/04/01

胎牛血清是傳統細胞培養過程中*的營養組分，可以說選擇正確的胎牛血清直接決定試驗和生產的結果。中國海關在其對有資質進行血清供應的企業有明確的公示，有興趣的朋友可以查詢《允許向中國出口生物材料（包含血液制品）的國外企業單》。原料采集是胎牛血清整個生產工序中最關鍵的步驟，需要在各個血源地政府認證的農場采集，且確保采集對象為獸醫監管下經臨床檢查為健康的動物。揭秘Gibco血清的那些事兒——原料采集篇以下視頻來源于賽默飛生命科學，時長01:19賽默飛世爾科技有限公司是的生命科學原材料供應商，旗下的Gi

關于特級胎牛血清使用的方法2022/03/31

關于特級胎牛血清使用的方法進口特級胎牛血清的正確存放與解凍是各位實驗家尤為關注的一個問題，1、血清必須貯存-20℃，如存放于4℃，請勿超過兩周，對于某些單位一次無法用完一瓶，可在無菌條件下將其40-45ml分裝于無菌50ml離心管中，由于血清解凍時體積會增加10％，必須預留此膨脹體積的空間，否則易發生污染或容器凍裂的情形。2、一般公司所提供的血清一般為100ml和500ml裝量，因此建議在使用中宜采取逐步解凍的方法解凍血清：-20℃→4℃冰箱或冷庫溶解24小時→室溫下全溶后再分裝，一般以50ml

千舍精選推薦WinSera®特級胎牛血清2022/03/31

千舍精選推薦WinSera®特級胎牛血清1.WinSera®特級胎牛血清來源新西蘭，血源更優秀，生產工藝更嚴格。每批胎牛血清均可提供完整的原產地證、質檢報告及海關進出口資質，產品安全可追溯。2.具有極低的內毒素（小于3EU/mL），蛋白含量適中，既能滿足細胞生長所需的營養，又不會對細胞造成毒害作用；此外，還對血清中微量元素及多種酶進行了檢測，體現了產品檢測的全面性。3.千舍精選的WinSera®特級胎牛血清，經過多種細胞培養測試，具有優異的性能，更適合干細胞、原代細胞等各種血清依賴度高的細胞（如

胎牛血清注意事項2022/03/30

胎牛血清注意事項如果不能短期內使用完畢，解凍后請適當分裝。血清結冰時體積會增加約10%，因此在分裝血清時須使分裝瓶預留一定體積空間，否則易導致分裝瓶凍裂而發生污染。熱滅活是指56℃，30分鐘加熱已*解凍的血清。加熱過程中需有規則地搖晃均勻。熱處理的目的是滅活血清中的補體(complement)。除非必須，一般不推薦對血清進行熱處理。因為熱處理會造成血清沉淀物顯著增多，而且還會影響血清的質量。補體參與的反應有：細胞毒作用、平滑肌細胞收縮、肥大細胞和血小板釋放組胺、增強吞噬作用、促進淋巴細胞和巨噬細

收集腫瘤細胞外泌體2022/03/28

外泌體的研究離不開細胞培養。以腫瘤相關外泌體研究為例，目前，收集腫瘤細胞外泌體主要有兩種方法：方法一使用正常培液養細胞再換無血清培液收外泌體。方法二直接使用exosome-freeFBS配制培養基用于培養細胞收外泌體。首先，就是基本的離心條件了，目前超離比較好的就是貝克曼或者日立的了，這兩家超離在行業內算是翹楚了。其次就是離心參數了：120000g，4℃，離心14h，離心結果如圖：1：離心后，血清外泌體會富集在管底和管壁；2：吸取血清時，只吸取澄清部分的血清，并且遠離上圖中標記的區域；3：吸取7

“外泌體”的常見問題集錦~2022/03/25

如何鑒定提取出來的外泌體？以目前外泌體的分離手段很難獲得十分純凈而且單一的外泌體樣品，也沒有任何一個單一實驗可以確定外泌體的存在。根據國際細胞外囊泡協會發表的指導手冊《MISEV2018》，外泌體特征鑒定通過NTA測粒徑分布、TEM電鏡分析形態、WB檢測標志蛋白三項來驗證。NTA分析樣品中外泌體的粒徑分布和顆粒濃度，TEM電子顯微鏡來觀察樣品中外泌體的形態特征，WB檢測外泌體標志蛋白。外泌體如何保存？不同時間、溫度的保存對不同的外泌體樣本影響不一；如果研究方向為外泌體形態特征、蛋白或其他功能性分

外泌體抗衰憑什么搶占“風頭”？2022/03/24

外泌體抗衰憑什么搶占“風頭”？據研究，在尿液、血清、唾液和母乳等體液中都檢測到了外泌體，可見其分布之廣。從作用原理上，外泌體通過胞吞、胞吐及膜融合的方式進入細胞，將其活性物質（如蛋白質、DNA、RNA等）釋放至宿主胞質溶膠調控細胞生理功能；也可結合胞膜受體激活相關信號通路調控細胞功能，實現非細胞化再生醫美治療。另一方面，干細胞進行抗衰是嚴肅的科學命題，并非簡單的細胞回注就可達到效果，干細胞使用十分嚴格，醫療機構開展的干細胞臨床研究需由兩委局協同共管，批準才能進行的，臨床許可嚴格與安全性高要求限制

胎牛血清應用廣泛，符合質控標準是關鍵2022/03/23

胎牛血清應用廣泛，符合質控標準是關鍵以國內滅活病毒疫苗的制造過程為例，主要是通過體外大規模培養特定的細胞株來繁殖病毒。目前，主流培養液仍然采用基礎培養基加血清的方式，強調了對有效培養方法和一致材料的迫切需求。正規來源的胎牛血清不會額外添加其他不明成分，除了含有細胞所需的營養成分及輔助因子之外，還含有轉移和結合蛋白，有緩沖pH和解毒的作用，因而常用于疫苗生產細胞的培養。對于牛血清的應用場景，目前國內遵循的質量標準是2020版《中華人民共和國藥典》三部通則（3604新生牛血清檢測要求），胎牛血清主要

胎牛血清有必要熱滅活嗎2022/03/22

—胎牛血清有必要熱滅活嗎—01目的血清的滅活就是將血清置于56℃作用30min，然后將它們分裝儲存于-20℃。熱滅活的目的是為了去除血清中的補體等對熱敏感的物質，以排除對免疫分析的影響。胎牛血清中對補體的滅活則明顯沒有必要。研究人員曾對商業胎牛血清中的補體成分進行測定，他們發現胎牛血清中含有的C1、C6僅達成年動物血清的1-3%，而其它補體成分僅有成年動物的5-50%，至于補體的主要成分C3在胎牛血清中則幾乎不能檢出。通過補體固定實驗，我們也在多個不同批次的胎牛血清中獲得了相似的結果。此外，多數

血清的供應量改變帶來的價格波動2022/03/21

血清的供應量改變帶來的價格波動由于中國海關總署對供應企業和允許進口的血源地做出了明確規定，胎牛血清的價格便與這些血源產地的供應量息息相關。胎牛血清是一種天然產物，產地牛源的健康狀況和生長環境尤為重要，當牛源產地氣候變化時，會極大的影響胎牛血清的產量。例如2018年澳洲地區發生干旱，導致農場主不得不屠宰超量的牛以避免損失，這種情況間接導致當年澳洲血源的胎牛血清供應鏈同比往年有一個顯著的增長。所以說，跟一般的商品不同，胎牛血清的供應量并非僅由胎牛血清的市場需求決定，而是由當年的氣候、飼養成本以及牛肉

一般在拿到細胞后，應該注意什么?2022/03/18

一般在拿到細胞后，應該注意什么?收到細胞后先不要開蓋，放在培養箱靜置若干小時后(看細胞密度而定)在倒置顯微鏡下觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數拍照(建議對收細胞時的培養基拍一張照片，觀察培養基的顏色和是否有漏液情況，顯微鏡下拍細胞100X，200X各一張)，排除細胞本身污染的情況;收到細胞未開封，出現污染狀況一般可以再申請免費發送一株細胞。收到細胞時如無異常情況，請在顯微鏡下觀察細胞密度，如為貼壁細胞，未超過80%匯合度時，將培養瓶中培養液吸出，留下10ml培養液繼續培養;超過80%匯合度

血清解凍后發現有絮狀沉淀物出現，該如何處理？2022/03/17

血清解凍后發現有絮狀沉淀物出現，該如何處理？血清在解凍過程（包括沒有*解凍）或儲存在2-8℃時，血清中的各種蛋白和脂蛋白（如凝集素、纖維蛋白原和玻連蛋白等）可能會聚集成團，形成絮狀沉淀或外觀混濁；在運輸過程中，由于時間較長，所以往往有少許解凍，因此也可能稍有沉淀，但這些都不影響血清性能。若您欲去除這些絮狀沉淀物，可以將血清分裝至無菌離心管內，以400g稍微離心，上清液即可接著加入培養基內一起過濾。我們不建議您以過濾的方法去除這些絮狀沉淀物，因為它可能會阻塞過濾膜。

耐藥細胞構建方法2022/03/11

耐藥細胞構建方法目前已知的體外建立耐藥細胞株的方法主要有以下幾種：大劑量藥物沖擊法、藥物濃度遞增法、藥物濃度遞增與大劑量藥物沖擊相結合法、轉基因結合藥物篩選法。其中藥物濃度遞增法和大劑量藥物沖擊法成為臨床建立腫瘤細胞化療耐藥模型的常用方法。①藥物濃度遞增法是指最初使用低濃度的藥物刺激細胞，等待細胞適應低濃度的環境之后，再略微提高藥物濃度，繼續等待細胞適應目前的環境，經過反復的培養和加壓，最終使細胞可以在高濃度的藥物環境下生存。②大劑量藥物沖擊法是在細胞培養時加入超高藥物濃度的藥物，但是孵育的時間