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2022
08-12

人非小細胞肺癌細胞通過去泛素化和穩(wěn)定ＫＬＦ４抑制非小細胞肺癌
今天我們來看看一篇關于非小細胞肺癌的文獻，首先還是了解下背景。肺癌是世界上普遍認為的死亡率最高的癌癥，沒有之一。肺癌中約有８５％是非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）。據(jù)報道，早期肺癌患者５年存活率為７０％，晚期患者５年存活率不高于２０％。在如此高死亡率的情況下，找到新的靶標分子對探索ＮＳＣＬＣ治療有非凡意義。之前的研究發(fā)現(xiàn)，泛素化涉及包括癌癥在內(nèi)的多種疾病，被認為是潛在的治療靶點。ＯＴＵＤ１作為泛素酶的一員，是由４８１個氨基酸組成的，與影響諸多分子的各種生理功能有關。在乳腺癌、胰管腺癌、甲狀腺癌等均有相
2022
07-26

293細胞正確的培養(yǎng)步驟
293細胞被用于腺病毒載體的繁殖。利用病毒進化目標基因并將其轉(zhuǎn)移到細胞中是一種有效的方法。然而，由于病毒作為病原體的特性，它們也會帶來風險。因此，為了繁殖這種病毒載體，需要一種能夠表達缺失基因的細胞系。不僅具有生成人糖基化譜和建立調(diào)控記錄的能力，而且具有多種優(yōu)勢，是一種特別有吸引力的重組蛋白表達系統(tǒng)。293細胞培養(yǎng)步驟：一、復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入5mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加4-6mL*培養(yǎng)基后吹勻。然后將
2022
07-19

l02細胞培養(yǎng)用什么培養(yǎng)基？
l02細胞作為固定相選擇性地吸附大黃30%乙醇提取液中的活性成分，采用高效液相色譜(HPLC)測定吸附前后的化學成分；根據(jù)對照品的保留時間及紫外光譜信息，對比鑒定各親和活性成分；并將篩選出的活性成分進一步作用于L02肝脂肪變性細胞模型，驗證其調(diào)血脂作用。結果從大黃30%乙醇提取液中共篩選出11種活性成分，分別為蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚、大黃素甲醚和6種未知成分。蘆薈大黃素等蒽醌苷元能夠降低L02肝脂肪變性細胞中三酰甘油(triglyceride，TG)、總膽固醇(totalcholes
2022
07-19

原代細胞、細胞株與細胞系的解釋
從機體的組織(如人組織、小鼠組織、大鼠組織和兔組織等)經(jīng)蛋白酶或其它的方法獲得單個細胞并在體外進行模擬機體培養(yǎng)的細胞，稱為原代細胞。這類細胞生命周期有限，在有限的生命周期內(nèi)需掌握好細胞的生長空間，以保持細胞群中基因型和表型的一致性。原代細胞生長緩慢，一般認為，原代細胞培養(yǎng)的第1代和傳代到第10代以內(nèi)統(tǒng)稱為原代培養(yǎng)。原代培養(yǎng)的細胞一般傳至10代左右就不容易傳下去了，細胞的生長會出現(xiàn)停滯,大部分細胞衰老死亡。原代細胞(primarycell****)是指從機體的組織(如人組織、小鼠組織、大鼠組織和兔
2022
07-15

【小尚教細胞】傳代細胞的常規(guī)培養(yǎng)
當原代培養(yǎng)成功以后，隨著培養(yǎng)時間的延長和細胞不斷分裂，一方面由于細胞密度過大，細胞與細胞之間相互接觸而發(fā)生接觸性抑制，生長速度減慢甚至停止將一方面也會因營養(yǎng)物枯竭和代謝物積累而不利于生長或發(fā)生中毒。因此需要將培養(yǎng)細胞進行分離擴大培養(yǎng)，細胞由原培養(yǎng)瓶內(nèi)分離稀釋后傳到新的培養(yǎng)瓶的這個過程稱為傳代或者再培養(yǎng)。01傳代標準傳代時間一般通過兩個方面進行確定：一是在細胞培養(yǎng)過程中，當培養(yǎng)液由于ph值下降而呈現(xiàn)黃色時，表明細胞已經(jīng)達到最大密度，需要換液或進行傳代培養(yǎng)；二是觀察細胞形態(tài)，健康細胞形態(tài)飽滿，折光性
2022
07-08

如何繪制細胞生長曲線？
1.實驗原理典型的生長曲線即可分為潛伏期、指數(shù)生長期、平頂期及退化衰老四個部分，其中的三個不同生長時期（潛伏期、指數(shù)生長期和平頂期）是每個細胞系所共有的特征。通過測定生長曲線,不僅可以了解培養(yǎng)細胞生物學特性的基本參數(shù)、測定細胞絕對生長數(shù)、判斷細胞活力，而且也可用于測定藥物等外來因素對細胞生長的影響。本實驗采用計數(shù)法測定細胞生長曲線，通過連續(xù)對細胞計數(shù)（通常為10天，一般應每次計數(shù)3孔細胞取平均值），然后以存活細胞數(shù)對培養(yǎng)時間作圖，即得該種細胞的生長曲線。2.實驗材料①小鼠胚胎成纖維細胞或雞胚成纖
2022
06-27

小鼠心肌細胞的復極過程可分為如下四期
小鼠心肌細胞復極過程：當心室肌細胞去極化達到后，立即開始復極，但復極過程比較緩慢，可分為4期：1)快速復極初期(1期)：心肌細胞膜電位在除極達到后，有+30mV迅速下降至0mV，形成復極1期，歷時約10ms，并與0期除極構成了鋒電位。形成機制：鈉離子的通透性迅速下降，鈉離子內(nèi)流停止。同時膜外鉀離子快速外流，形成瞬時性鉀離子外向電流，膜內(nèi)電位迅速降低，與0期構成鋒電位。2)平臺期(2期)：表現(xiàn)為膜電位復極緩慢，電位接近于0mV水平，故成為平臺期。此期歷時100~150ms。此期為心室肌細胞區(qū)別于神
2022
06-27

大鼠滑膜細胞的制備方法
大鼠滑膜細胞的制備方法：滑膜細胞的培養(yǎng)：將分離的滑膜組織用含青霉素200kU/L、鏈霉素200mg/L的D-Hank's液漂洗3次以減少污染機會；去掉脂肪組織，將16個滑膜組織樣本平均分為A、B兩份。將A份不加處理分為A1、A2、A3、A4、A5、A6、A7、A8八個樣品，將B份用手術剪剪碎后分為B1、B2、B3、B4、B5、B6、B7、B8八個樣品。分別采取4種不同方法進行處理。1)不加消化酶消化法：分別將A1、A2、B1、B2離心洗滌2次(2500r/min，離心6min)，吸棄上清液，加入
2022
06-24

細胞傳代后增殖變慢的原因
細胞傳代后增殖變慢，即使添加血清也未見明顯增殖是什么原因？細胞傳代后增殖速度改變主要是因為培養(yǎng)條件不適或者傳代受損死亡過多。由于不同品牌、批次的培養(yǎng)基及血清實際培養(yǎng)效果差異，細胞在更換培養(yǎng)條件后可能生長狀態(tài)改變，生長速度變慢、甚至不長的情況時有發(fā)生，此時建議及時更換合適的培養(yǎng)基及血清，或使用尚恩生物原裝培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞對比。T25瓶加10-12ml培養(yǎng)基，10cm皿加12-15ml，2-3天換液一次。細胞傳代受損一般會伴隨傳代死亡偏多、碎片增多等情況，傳代受損的細胞增殖活力會明顯下降甚至不長，此時
2022
06-20

關于胎牛血清您了解多少？
血清是由血漿去除纖維蛋白而形成的一種很復雜的混合物，其組成成份雖大部分已知，但還有一部分尚不清楚，且血清組成及含量常隨供血動物的性別、年齡、生理條件和營養(yǎng)條件不同而異。血清中含有各種血漿蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生長因子、激素、無機物等，這些物質(zhì)對促進細胞生長或抑制生長活性是達到生理平衡的。胎牛血清采用健康母牛懷孕的八月齡胎牛血液為原料，經(jīng)無菌采集、分離、微孔過濾后而成。所以胎牛血清高，因為胎牛還未接觸外界，血清中所含的抗體、補體等對細胞有害的成分少。用作真核細胞體外細胞培養(yǎng)的生長補充劑。動
2022
06-17

玩轉(zhuǎn)不同類型細胞傳代方法
根據(jù)不同細胞采取不同的培養(yǎng)細胞傳代方法。懸浮生長的細胞可以用直接吹打或離心分離后傳代，或自然沉降法吸除上清后，再吹打傳代。貼壁生長的細胞用消化法傳代，部分貼壁生長的細胞用直接吹打即可傳代。細胞傳代培養(yǎng)時常用的酶為胰蛋白酶，它可以破壞細胞與細胞、細胞與培養(yǎng)瓶之間的細胞連接或接觸，從而使它們之間的連接減弱或*消失。經(jīng)胰蛋白酶處理后的貼壁細胞在外力（如吹打）的作用下可以分散成單個細胞，再經(jīng)稀釋和接種后就可以為細胞生長提供足夠的營養(yǎng)和空間，達到細胞傳代培養(yǎng)的目的。01貼壁細胞的消化法傳代①吸除或倒掉瓶內(nèi)
2022
06-15

細胞容易污染？如何正確凍存細胞
隨著實驗室細胞培養(yǎng)的發(fā)展，除了原代培養(yǎng)之外，還將建立開發(fā)或獲得眾多的細胞系。每一個細胞系均擴大了其起源細胞的應用，成為有價值的資源。若該細胞系頗為*，則其可能是不可替換的；替換至少也是昂貴與耗時的。因此，必須通過保存細胞系來保證這種重要投資。由于培養(yǎng)早期傳代培養(yǎng)的選擇，有限細胞系的衰老以及連續(xù)細胞系的遺傳和表現(xiàn)不穩(wěn)定性，使細胞系在連續(xù)培養(yǎng)時有變異傾向。此外，即使在管理好的實驗室中也有可能發(fā)生儀器故障和污染。交叉污染以及錯誤辨識的發(fā)生率也很高。因此，存在諸多理由進行冷凍儲存細胞，總體概述有幾大不得
2022
05-27

jurkat細胞的冷凍保存方法
jurkat細胞冷凍保護體外培養(yǎng)物，除了必須有冷凍速率、合適的冷凍保護劑和凍存溫度外，在復蘇時也必須有合適的復溫速率，這樣才能保證獲得冷凍保存效果。復溫速率是指在細胞復蘇時溫度升高的速度。復溫速率不當也會降低凍存細胞存活率。一般來說，復溫速度越快越好。常規(guī)的做法是，在370C水浴中，于1-2分鐘內(nèi)完成復蘇。復溫速度過慢，細胞內(nèi)往往重新形成較大冰晶而造成細胞損傷。復溫時造成的細胞損傷非常快，往往在極短的時間內(nèi)發(fā)生。冷凍保護劑是指可以保護細胞免受冷凍損傷的物質(zhì)。冷凍保護劑常常配制成一定的溶液。一般來
2022
05-20

細胞基礎培養(yǎng)基一般應具備以下三個條件
細胞基礎培養(yǎng)基由基礎培養(yǎng)基（如MEM）和添加劑（如血清或無血清培養(yǎng)用的某些確定的激素及生長因子）組成，培養(yǎng)基的配方一直在改進，其中包括抗生素和抗有絲分裂劑等等。絕大多數(shù)培養(yǎng)基是建立在平衡鹽溶液（BSS）基礎上，添加了氨基酸、維生素和其它與血清中濃度相似的營養(yǎng)物質(zhì)。廣泛應用的培養(yǎng)基是Eearle'sMEM的混合物，其中含有13種必須氨基酸、8種維生素。而Ham'sF12也包括非必須氨基酸，維生素的范圍亦很廣，另外常規(guī)含有無機鹽和代謝添加劑（例如核苷酸）。MEM/F12這兩種培養(yǎng)基各取1/2，形成神
2022
05-10

大鼠滑膜細胞的背景及概述
大鼠滑膜細胞關節(jié)囊分為兩層，外層為纖維層，由致密結締組織構成；內(nèi)層為滑膜，由薄層疏松結締組織構成，有產(chǎn)生和吸收滑液的作用。滑膜內(nèi)富有血管、神經(jīng)，其游離面被覆1～4層滑膜細胞。滑膜細胞呈扁平或多邊形，細胞核為梭形、圓形或卵圓形。滑膜細胞呈疏松的上皮樣排列，無基膜。大鼠滑膜細胞有些滑膜細胞的表面具有分支的突起，這些突起沿表面水平伸展，相鄰細胞的突起彼此呈指狀交叉，有的表面具有少數(shù)絲狀偽足。在滑膜細胞之間的間隙內(nèi)有少量結締組織基質(zhì)，細胞間隙的基質(zhì)與滑液接觸，進行物質(zhì)交換。根據(jù)電鏡研究，滑膜細胞可分為A
2022
05-10

細胞有小顆粒或疑似細菌污染怎么處理？
細胞外的黑色顆粒大部分是細胞碎片和細胞代謝產(chǎn)物，通過處理可以去除一部分碎片，但細胞只要在生長代謝及傳代，就會有部分細胞死亡裂解產(chǎn)生碎片，該情況一直會存在，可以對比不同細胞庫照片觀察細胞代謝產(chǎn)物情況。貼壁細胞可以先吸走培養(yǎng)基后用PBS潤洗清除，再加新的培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。潤洗不能清除的可以換液清洗后等細胞密度70-80%左右消化處理細胞，消化完成后加*培養(yǎng)基終止消化，混勻細胞，收集細胞懸液900-1000rpm(約150g)離心3min，棄上清。再加5mlPBS重懸細胞，再離心后，用*培養(yǎng)基重懸接種到
2022
04-20

原代細胞的培養(yǎng)問題
原代細胞培養(yǎng)問題：1、原代細胞與細胞系有什么區(qū)別？根據(jù)傳統(tǒng)定義，自組織第一次收獲和接種的細胞被稱為原代細胞[Freshney,R.I.(1987).CultureofAnimalCells.AManualofBasicTechnique.(NewYork,AlanR.Liss,Inc.)].這類細胞直接從組織分離，生命周期有限，經(jīng)數(shù)次傳代后會逐漸停止生長。原代細胞在有限的生命周期內(nèi)需掌握好細胞的最大生長空間，以保持細胞群中基因型和表型的一致性。細胞系是不斷生長、分化的細胞群，因其經(jīng)過遺傳改造，致
2022
04-20

原代細胞培養(yǎng)上面會有哪些問題呢？
原代細胞培養(yǎng)問題：1、原代細胞與細胞系有什么區(qū)別？根據(jù)傳統(tǒng)定義，自組織第一次收獲和接種的細胞被稱為原代細胞[Freshney,R.I.(1987).CultureofAnimalCells.AManualofBasicTechnique.(NewYork,AlanR.Liss,Inc.)].這類細胞直接從組織分離，生命周期有限，經(jīng)數(shù)次傳代后會逐漸停止生長。原代細胞在有限的生命周期內(nèi)需掌握好細胞的最大生長空間，以保持細胞群中基因型和表型的一致性。細胞系是不斷生長、分化的細胞群，因其經(jīng)過遺傳改造，致
2022
04-08

動物細胞培養(yǎng)4大常用合成細胞培養(yǎng)基
體外培養(yǎng)動物細胞已經(jīng)有近百年的歷史，但該技術真正得以廣泛應用及各種類型組織細胞大量體外培養(yǎng)成功是由于適合細胞體外生長需要的合成培養(yǎng)基的問世。合成培養(yǎng)基是對細胞體內(nèi)生存環(huán)境中各種已知物質(zhì)在體外人工條件下的模擬。這種模擬不是被動的、不加選擇的。而是在體外反復實驗和篩選，進行強化和重新組合后形成的人工合成培養(yǎng)基。合成培養(yǎng)基種類很多，據(jù)報道已有數(shù)十種，每種合成培養(yǎng)基最初都是為培養(yǎng)某種細胞而設計的，但應用后發(fā)現(xiàn)其他細胞也可以生長或經(jīng)改良也適合其他細胞的生長。1.199培養(yǎng)基199培養(yǎng)基是Morgan、Mo
2022
03-16

細胞系的建立過程
細胞建系的一般程序包括原代培養(yǎng)、第一次傳代、常規(guī)傳代、凍存與復蘇等過程。所涉及的原代培養(yǎng)、第一次傳代、常規(guī)傳代、凍存與復蘇等過程的具體方法與常規(guī)的原代培養(yǎng)等技術一樣。①取材：材料主要來源于外科手術或活檢瘤組織，取材時避免用壞死組織，要挑選瘤細胞集中和活力較好的部位，瘤性轉(zhuǎn)移淋巴結或胸腹水是較好的培養(yǎng)材料。取材后盡快培養(yǎng)，因故不能立即培養(yǎng)者，可凍存。其培養(yǎng)方法及凍存方法同正常組織。②細胞的純化：在腫瘤組織中常混雜有一些成纖維細胞，培養(yǎng)時能與瘤細胞同時生長，并常壓過癌細胞，導致細胞生長受阻甚至消失，

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