D341 Med人髓母細(xì)胞瘤細(xì)胞系
D341 Med人髓母細(xì)胞瘤細(xì)胞系自建立以來,成為探索髓母細(xì)胞瘤發(fā)病機(jī)制與創(chuàng)新療法的重要研究對(duì)象。該細(xì)胞系源自兒童髓母細(xì)胞瘤組織,憑借其du特的生物學(xué)特性,為理解髓母細(xì)胞瘤的惡性生物學(xué)行為和開發(fā)針對(duì)性治療策略提供了關(guān)鍵模型。
在細(xì)胞生物學(xué)特性方面,D341 Med 細(xì)胞呈懸浮生長(zhǎng),形態(tài)多樣,常見圓形、橢圓形或不規(guī)則形,細(xì)胞間相互聚集形成大小不一的細(xì)胞團(tuán)簇。作為一種具有高增殖活性的腫瘤細(xì)胞系,其倍增時(shí)間約為 20 - 24 小時(shí),顯著快于正常神經(jīng)干細(xì)胞。分子層面,D341 Med 細(xì)胞高表達(dá) Sonic Hedgehog(SHH)信號(hào)通路相關(guān)蛋白,該通路的異常激活是髓母細(xì)胞瘤發(fā)生發(fā)展的關(guān)鍵驅(qū)動(dòng)因素之一。Gli1、Gli2 等轉(zhuǎn)錄因子的過度表達(dá),促使細(xì)胞不斷增殖并抑制分化。同時(shí),細(xì)胞還表達(dá)神經(jīng)干細(xì)胞標(biāo)志物如 Nestin、Sox2,表明其具有一定的干性特征,這也是髓母細(xì)胞瘤惡性程度高、易復(fù)發(fā)的原因之一。在侵襲能力上,Transwell 實(shí)驗(yàn)顯示,D341 Med 細(xì)胞穿過 Matrigel 基質(zhì)膠的數(shù)量是正常腦組織細(xì)胞的 6 - 8 倍;將其接種到免疫缺陷小鼠顱內(nèi),2 - 3 周即可形成明顯腫瘤占位,導(dǎo)致小鼠出現(xiàn)神經(jīng)系統(tǒng)癥狀,成瘤率接近 100%,且腫瘤細(xì)胞可向周圍腦組織浸潤(rùn)擴(kuò)散,模擬臨床髓母細(xì)胞瘤的侵襲特性。
D341 Med 細(xì)胞的培養(yǎng)需特定條件。常用含 10% 胎牛血清(FBS)、1% 雙抗(青mei素 - 鏈mei素)和 B27 添加劑的 DMEM/F12 培養(yǎng)基。B27 添加劑為細(xì)胞生長(zhǎng)提供多種營(yíng)養(yǎng)成分和細(xì)胞因子,有助于維持細(xì)胞的干性與增殖能力。培養(yǎng)環(huán)境控制在 37℃、5% CO?的恒溫培養(yǎng)箱中。當(dāng)細(xì)胞團(tuán)簇直徑達(dá)到 200 - 300μm 時(shí),需進(jìn)行傳代,使用胰dan白酶 - EDTA 消化后輕柔吹打分散細(xì)胞,按 1:3 - 1:4 的比例接種,傳代周期約 3 - 4 天。新接種的細(xì)胞在 6 - 12 小時(shí)內(nèi)開始重新聚集形成細(xì)胞團(tuán),培養(yǎng)過程中需每天觀察細(xì)胞團(tuán)的形態(tài)與生長(zhǎng)狀態(tài),每 2 - 3 天更換一次培養(yǎng)液,同時(shí)嚴(yán)格遵循無菌操作,防止微生物污染影響細(xì)胞活性。
憑借du特的生物學(xué)特性,D341 Med 細(xì)胞系在髓母細(xì)胞瘤研究中應(yīng)用廣泛。在發(fā)病機(jī)制研究方面,科研人員利用該細(xì)胞系發(fā)現(xiàn),長(zhǎng)鏈非編碼 RNA LncRNA - MBP1 可通過調(diào)控 SHH 信號(hào)通路,促進(jìn) D341 Med 細(xì)胞的增殖與自我更新;微小 RNA - 34a 則能靶向抑制 Sox2 表達(dá),誘導(dǎo)細(xì)胞分化并抑制腫瘤生長(zhǎng)。在藥物研發(fā)領(lǐng)域,D341 Med 細(xì)胞系是評(píng)估新型靶向藥物的重要工具,如 SHH 通路抑制劑 Vismodegib 在該細(xì)胞系中的 IC??值為 5μM,可顯著抑制細(xì)胞增殖;針對(duì)腫瘤干細(xì)胞的抗體藥物偶聯(lián)物(ADC)在 D341 Med 細(xì)胞荷瘤小鼠模型中,使腫瘤體積縮小約 50%。此外,基于 D341 Med 細(xì)胞構(gòu)建的類器官模型,更真實(shí)地模擬了髓母細(xì)胞瘤的三維結(jié)構(gòu)和腫瘤微環(huán)境,為研究腫瘤與周圍組織的相互作用及探索聯(lián)合治療方案提供了更優(yōu)平臺(tái)。不過,使用 D341 Med 細(xì)胞系時(shí)需注意,長(zhǎng)期培養(yǎng)可能導(dǎo)致細(xì)胞基因表達(dá)譜改變,實(shí)驗(yàn)前需通過 RT - PCR 檢測(cè)關(guān)鍵基因表達(dá)、流式細(xì)胞術(shù)分析細(xì)胞表面標(biāo)志物等手段進(jìn)行嚴(yán)格鑒定,確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性和重復(fù)性。
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