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鱟血淋巴的免疫應答因子之抗菌肽及其它防御分子的介紹2022/09/06

一、抗菌肽抗菌肽是動植物體內組成性表達或誘導產生的天然免疫物質，是機體先天性免疫的重要組成部分。抗菌肽對病原微生物具有選擇性毒-性，殺菌快速，廣譜抗菌且微生物不易產生抗性[2]。目前人們已從鱟血淋巴中分離得到多種抗菌肽。1.tachyplesins與polyphemustachyplesins與polyphemus(統稱為鱟素)是存在于鱟血淋巴顆粒細胞的小顆粒中的一族小分子多肽，由17~18個氨基酸組成，相對分子質量約2.3ku。tachyplesinⅠ是Nakamura等于1988年從東方鱟血

鱟血淋巴中的免疫應答因子之蛋白酶抑制劑和凝集素的介紹2022/09/05

鱟先天性免疫系統*依賴于一套獨-特且非常有效的宿主防御系統和凝血系統。目前人們已從鱟血淋巴的血細胞和血漿中分離純化了多種參與鱟凝血反應和宿主防御的免疫應答因子。今天主要講解的是蛋白酶抑制劑和凝集素。一、蛋白酶抑制劑（proteaseinhibitors）鱟血細胞大顆粒中含抑制蛋白酶活性的物質，包括絲氨酸蛋白酶抑制因子（serpins）和半胱氨酸蛋白酶抑制因子（cystatin）。1.絲氨酸蛋白酶抑制因子目前已從東方鱟的血細胞中分離得到3種絲氨酸蛋白酶抑制因子:LICI1、LICI2和LICI3，

鱟血淋巴中免疫應答細胞的介紹2022/09/05

鱟（horseshoecrab）是一種生活在海洋中的大型底棲節肢動物，從早古生代的奧陶紀出現至今已有4億多年的歷史，是動物界具有獨-特進化地位的“活化石”之一。鱟隸屬于節肢動物門（Arthropoda）、有螯肢亞門（Chelicerata）、肢口綱（Merostomata）、劍尾目（Xiphosurida）、鱟科（Limuroidea）。現存的鱟種類很少，僅存2亞科3屬4種，這4種鱟分別為美洲鱟（Limuluspolyphemus）、東方鱟（Tachypleustridentatus，又稱中國鱟

鱟血淋巴中的免疫應答因子之凝固因子的介紹2022/09/05

鱟先天性免疫系統*依賴于一套獨-特且非常有效的宿主防御系統和凝血系統。目前人們已從鱟血淋巴的血細胞和血漿中分離純化了多種參與鱟凝血反應和宿主防御的免疫應答因子。今天主要講解是的凝固因子。一、凝固因子（coagulationfactors）鱟血淋巴進行快速凝血對宿主防御和止血均非常重要[1,2]。該凝血級聯反應由4種凝固因子和1種凝固蛋白原（cogaulogen）組成。其中凝固因子包括C因子、G因子、B因子及前凝固酶（proclottingenzyme），這些因子都屬于絲-氨-酸蛋白酶原家族。1.

鱟試驗法中鱟試劑及內毒素的標化問題2022/08/31

一、鱟試劑的標化問題鱟試劑為鱟變形細胞的細胞溶解物，制備時可采用裂解法和機械方法使細胞破裂。鱟試劑的敏感性可受到動物個體差異、季節差異及生產工藝過程中不穩定因素的影響。因此各批次間，其敏感性差異很大。即使是同一批試劑，由于操作、保存方法、環境因素等影響，其敏感性亦不一樣。鱟試劑在液態時極不穩定，往往很難保存。貯存于4℃冰箱，其活性一般于4~5月開始下降，8個月左右*失活。冷凍保存的穩定性稍高于液態保存。`真空凍干粉劑保存為目前最-好的方法，-30℃保存其有效期可達2年。改善生產工藝，控制制劑中的

鱟試驗法中有關內毒素與熱原及內毒素抑制因子的問題2022/08/30

一、內毒素與熱原的關系問題目前很多文獻中，熱原與內毒素為同義詞，經常互用。但并不是所有的內毒素均有很強的致熱性，因為已經證明某些天然的內毒素致熱性較弱、需要較大的劑量（如＞2μg/kg)時才能引起發熱。反之，亦并不是所有的能引起發熱的物質均為內毒素。許多化學物質，特別是中樞作用藥如利-血-平、丙咪嗪、5-羥色胺、胍乙啶在一定條件下亦能致熱。各種微生物及其產物、免疫復合物及激素等均可引起發熱。而這些發熱物質易被熱力破壞，故大輸液和藥品、器械在工業生產過程中容易防止污染而被清除，僅有內毒素難以清除，

鱟試驗法中藥物與醫療器械的熱原允許含量問題2022/08/29

盡管鱟試驗應用于許多領域的內毒素檢測，確實取得了許多成績，解決了不少實際問題。但仍存在不少問題，本文主要講解藥物與醫療器械的熱原允許含量問題。由于很小劑量的內毒素即能引起機體產生一系列生物效應及病理效應，而許多藥物（包括大輸液、靜脈注射劑、口服藥物、放射性同位素、各類生物制劑），在其原料、制備過程及制備后的各個環節，或多或少地受到內毒素污染。各類醫療器械由于消毒不嚴格（內毒素需120℃4小時才能*破壞）亦可受到內毒素的污染。所以檢測藥物及醫療器械內毒素的含量，以便有效地采取控制內毒素的含量的措施

腦脊液中內毒素的檢測2022/08/29

細菌性腦膜炎為一種十分兇險的疾病，其發展迅速，死亡率高，目前尚缺乏快速、敏感、可靠的診斷方法。Siegel等綜合了7位作者的研究結果，發現在培養到陰性菌的237例陰性菌腦膜炎中，有225例經過鱟試驗法檢測為陽性，陽性率為95%，兩者基本一致，故鱟試驗法可用于陰性菌腦膜炎的快速診斷。腦脊液中不存在鱟試驗法反應的抑制物質，故標本不必經處理。腦脊液中的內毒素相對不穩定，不被網狀內皮系統迅速清除，而循環中的內毒素亦不能通過血腦屏障而入腦脊液。另外，腦脊液經鱟試驗法檢測的陽性率一般不受事先應用抗生素治療的

應用鱟試驗法對尿液進行內毒素檢測2022/08/25

尿定量細菌培養為常規的尿路感染檢測方法，一般細菌數≥105/ml尿則可確定尿路感染的診斷。此法較為可靠，并可直接移種細菌進行藥敏的測定，以指導臨床正確應用抗生素。但此法費時，常需24～48小時才能出結果。尿液鱟試驗法檢測內毒素快速、方便，有利于尿路感染的快速診出。在臨床實踐中觀察到，尿液鱟試驗法(+)與尿液革蘭氏陰性菌培養陽性是基本一致的，尿培養到陰性菌。測尿液的鱟試驗法99%呈(+)，兩者顯示高度的相關性。故證明鱟試驗法用于尿路陰性菌感染更具價值，一般認為尿標本經1：100稀釋與敏感度為1ng

血液中內毒素的檢測2022/08/24

檢測血液中的內毒素，有助于臨床上細菌感染性疾病（如革蘭氏陰性菌菌血癥、敗血癥、內毒素休克、革蘭氏陰性菌尿路感染及革蘭氏陰性菌腦膜炎等)的診斷。正常健康人血液中是不含內毒素的，但亦偶具有些無菌性內毒素血癥病人，其血液中可有少量的內毒素存在。此種情況如網狀內皮細胞系統功能障礙、腸道粘膜屏障損傷、局部陰性菌感染、污染大量內毒素的注射用品、輸液及輸血等均可引起。測定血液中的內毒素，為快速診斷陰性菌菌血癥、敗血癥、膿毒癥及內毒素休克的有用輔助方法。通常的血液細菌培養法，大多需24～48小時才能出結果，所以

醫療器械和設備的內毒素檢測2022/08/23

FDA于1975年已批準用鱟試驗法代替美國藥典的家兔熱原試驗法用于醫療器械及設備的內毒素檢測。FDA下屬的醫療器械管理局于1977年11月4日發表的《聯邦文件檔》(FederalRegister)的注釋中明確規定廠方只有應用鱟試驗法檢測醫療器械的內毒素，其產品才能出廠。并且這種LT法必須被BMD所承認。具體檢測方法為：每10個注射器、輸液導管、塑料管及其它外科用手術器械以20～40ml無熱原生理鹽水充分灌洗和浸泡，總量200～400ml。取此液進行內毒素的測定。規定醫療器械的內毒素含量不得超過0

鱟試驗法應用于食品衛生的監測2022/08/19

1.肉類制品肉類制品的腐-敗菌主要為革蘭氏陰性菌，尤以假單胞菌為多。在潮濕高氣溫中，變形桿菌在肉品表面繁殖迅速而使肉品變質。其它的革蘭氏陰性菌如大腸桿菌、副溶血弧菌亦能在肉制品中生長。因此這些食品中均含有一定量的內毒素。應用鱟試驗法不僅能檢出食品中內毒素的含量，亦能間接地反映肉制品被細菌污染的程度。測定時取一定數量的肉類制品，去脂肪，打碎離心沉淀，然后上清液作內毒素測定。用此種方法，可檢出0.1ng的內毒素，鱟試驗法可作為食品衛生質量的一個指標。Jay提議鮮牛肉經1000倍稀釋后而鱟試驗法為（-

應用鱟試驗法檢測水環境中的內毒素含量2022/08/18

目前水質衛生的細菌學指標均以大腸菌數指數、大腸菌數值作為主要標準，這些方法雖然所用原料簡單，操作方便，但每份標本的檢查需24小時或48小時才能得出結果，而采用鱟試驗法檢查水中細菌的污染情況，采樣后只需2小時即能出結果。據國外資料報道，水中總內毒素濃度（尤其是結合內毒素濃度）與細菌菌落數之間存在明顯的正比關系。如以細菌菌落對總內毒素或結合內毒素的對數轉換值作一回歸曲線，則可顯示出兩者的高度相關性，因此檢測水中的內毒素量可了解水中細菌污染的情況。鱟試驗法可檢出每ml低達100個革蘭氏陰性菌，因而是極

利用鱟試驗法檢測生物制劑的內毒素含量2022/08/17

生物制劑：包括菌苗、疫苗、各種血液制品以及其他生物制劑如干擾素、轉移因子、胸腺素等。1.菌苗在菌苗的制備過程中，特別是革蘭氏陰性菌菌苗，或多或少地受到內毒素的污染。因此采用敏感、特異并可定量的LT法（鱟試驗法，Limulustest），對生產技術加以改進，可使菌苗提純到滿意的水平，反應率亦大大降低，說明LT法是檢定菌苗毒性的適宜方法。Kreeftenberg曾對不同方法制備的傷寒菌苗的內毒素含量和接種反應的大小進行了比較。結果發現丙酮菌苗引起的反應一般比苯酚菌苗小些，其內毒素含量少些。荷蘭衛生部

應用鱟試驗法檢測藥物的內毒素含量2022/08/16

藥物作為終產物進行內毒素LT法檢測是極為適宜的。美國FDA已將LT法作為法定的藥物內毒素的檢測方法。檢測時，應用的鱟試劑其敏感性不得低于0.2EU/mL。并應考慮藥物中內毒素的耐受限-量（Tolerancelimit，其值等于每mg或每ml產物中內毒素的允許量)。如果一種藥品未曾通過LT法（鱟試驗法，Limulustest），但卻通過了RT法（家兔熱原試驗，Rabbitpyrogentest），則這種藥物亦不能出廠，除非此種RT法由官-方進行。有一些藥物，特別是已知有抑制或增強LT反應的藥物必須

輸液制劑的熱原檢查2022/08/15

靜脈點滴用的各種濃度葡萄糖液，生理鹽水、林格氏液、甘露醇等，以往常采用RT法（鱟試驗法，Limulustest）檢測熱原。近年來，國內外許多研究者應用LT法和RT法（家兔熱原試驗，Rabbitpyrogentest）作了大量的比較研究，結果表明，兩者的結果是基本相符的，但LT法較RT法敏感10～100倍。1977年Travenol實驗室對他們國內各廠生產的輸液及其它產品進行檢查，RT法進行28410次，不合格4次，LT法進行143196次，呈陽性者37次。并表明LT法操作簡便、快速、敏感，故LT

鱟試驗方法——用產色基質法檢測細菌內毒素含量的方法2022/08/11

日本學者對內毒素的產色基質測定法（Chromogenicsubs-tratemethod）進行了大量的研究。從鱟試驗的反應機理可知，鱟試劑中含有一種特異的前凝固酶，其受內毒素激活后變成有活性的凝固酶，后者具有α-凝血酶的活性及Xa因子及XⅡa因子的一些功能。這種酶可水解凝固蛋白原成三個片段，即A鏈、B鏈及C肽。A、B鏈和C肽再通過共價相聯而成為凝膠。此酶作用的部位，分別為A鏈羧基端的-Val-Leu-Gly-Arg（Gly，Arg分別為第17、18位）及C肽的-Val-Ser-G1y-Arg（G

鱟試驗的方法——比濁法2022/08/10

比濁法又稱濁度測定法。濁度法系利用檢測鱟試劑與內毒素反應過程中的濁度變化而測定內毒素含量的方法。Teller等首先報導將鱟試劑與內毒素作用后，可產生凝膠從而使液體呈混濁，其濁度與內毒素在一定條件下（內毒素濃度20～100pg/ml)呈線性關系。此法有如下優點①減少了鱟試劑的用量，②快速，③操作簡便，④半自動化。本試驗的方法是:將已適當稀釋后的鱟試劑與處理后的被檢標本各0.1ml加入微孔中，振顫器振動60秒鐘，使兩者充分混勻。放置37℃60分鐘，然后取出在分光光度計360～380nm處讀取光密度值

三種凝膠法常用方法：試管法、玻片法及毛細吸管法的介紹2022/08/10

凝膠法常用的方法有三種，即試管法、玻片法及毛細吸管法。試管法將等量的被檢樣品與鱟試劑加入試管，混勻，放入水浴中讓其充分反應，然后取出觀察凝膠形成的情況。實驗時共需作四種試管，即試驗管、陽性對照管、陰性對照管及陰性抑制對照管。試驗管：取標本0.1ml+鱟試劑0.1ml。一般的標本如水、注射液等，實驗前不須加以處理，但血液及腹腔滲出液等實驗前必須加以處理，因為在這些標本中可能會有LT（Limulustest，鱟試劑法）反應的抑制物質。應用的鱟試劑應事前以標準內毒素進行標定，并認為是可用的。陽性對照管

動態濁度法鱟試劑操作方法如下：2022/08/09

動態濁度法鱟試劑是通過檢測反應混合物的濁度到達某一預先設定的吸光度所需要的反應時間，或是檢測濁度增加速度來檢測內毒素的方法。在適宜的條件下（溫度，pH值及無干擾物質），細菌內毒素激活C因子，引起一系列酶促反應，使鱟試劑產生凝集反應形成凝膠。隨著凝膠的形成，反應液的吸光度(OD值，濁度)增加，OD值增加的速度與內毒素濃度成正相關。換言之，OD值上升某一預設限值(啟動OD)所需要的時間(定義為啟動時間)與內毒素濃度成負相關，啟動時間的對數與內毒素濃度的對數成線性關系，據此，可以定量供試品的內毒素濃度