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細菌內毒素中脂多糖之類脂A化學結構的簡介2022/10/31

類脂A(又稱脂質A)，系脂多糖的毒性及生物學活性中心。為一種糖磷脂，現認為細菌外膜的外層可能是類脂A。各屬細菌的類脂A結構相似，無種屬特異性，故不同革蘭氏陰性細菌感染時，由內毒素引起的毒性作用十分相似。給實驗動物注人類脂A時，可出現典型的內毒素反應，如發(fā)熱、血液動力學改變、彌漫性血管內凝血及內毒素休克等。類脂A在革蘭氏陰性菌感染的機理中亦起著十分重要的作用，故而類脂A可認為是細菌的一種致病因子。另外，類脂A參與細菌外膜的組成，在維持細胞壁的穩(wěn)定性、屏障功能以及在細菌的生理學上亦起著十分重要的作用

鱟試驗法：最宜對藥物進行細菌內毒素檢測的方法2022/10/31

藥物在被正式使用前，必須進行細菌內毒素檢測，而檢測細菌內毒素的方法，又屬鱟試驗法最為適宜。美國FDA已把鱟試驗法定為檢測藥物細菌內毒素檢測的法定方法。應當知道，在應用鱟試劑對藥物進行細菌內毒素檢測時，該鱟試劑的靈敏度的值不應低于0.2EU/mL，且同時應當知道藥物中細菌內毒素的耐受度限-量值。若是檢測的藥物沒能通過鱟試驗法卻通過了家兔法，這種藥物是不能被批準使用的，但該家兔法由官-方進行測試的除外。若已知該藥物對鱟試驗法有抑制或者增強反應，則應當對該藥物進行抑制或者增強試驗。檢測抗生素的細菌內毒

關于鱟的免疫系統(tǒng)的簡介2022/10/28

與其他無脊椎動物類似，鱟缺乏獲得性免疫系統(tǒng)，但它有多種先天免疫防御系統(tǒng)。這種防御系統(tǒng)一般分為細胞免疫和體液免疫，主要包括血淋巴凝血、酚氧化酶激活、細胞凝集、抗菌物質釋放引起的抗菌反應、活性氧的形成和吞噬作用，共同構成鱟的先天免疫系統(tǒng)。該系統(tǒng)可以對潛在病原體表面的抗原產生免疫反應。因此，需要對各種病原體上具有略微不同結構的各種類型的表位具有足夠特異性識別能力的生物傳感器。同時，生物傳感器必須能夠區(qū)分“自身”和“外來”表位。在漫長的生物進化過程中，鱟變形細胞溶解物的血細胞形成了以絲氨酸蛋白酶C因子和

酸堿因素對脂多糖有什么影響？2022/10/28

脂多糖中性溶液在室溫可放置數月，其生物學活性不發(fā)生明顯的改變，如置入4℃或低溫冰箱，則其生物學活性可保持數年至數十年不變。干燥的脂多糖中性粉劑，在室溫或冰箱條件下可放置幾十年或更長時間而不失去其生物學活性。脂多糖在酸性溶液中置室溫，其分子發(fā)生部分降解，這一變化主要涉及到多糖與類脂A間糖苷鍵的裂解，及類脂A1-糖苷鍵的裂解，加熱可促進這一反應。強酸溶液在加熱條件下可使脂多糖被破壞。堿性因素對脂多糖分子的影響較大，主要表現在類脂A分子上。此時類脂A骨架上聯(lián)結的4-磷酸酯鍵及3與3位上脂肪酸酯鍵易遭到

物理性狀對脂多糖的生物學活性有什么影響？2022/10/28

脂多糖的物理性狀主要表現為集聚程度，集聚度的大小對于生物學活性有著非常顯著的影響。對于某種特定的脂多糖其各種鹽類的生物學活性強弱可不一。實驗表明隨著脂多糖鹽類集聚度的增加(表現為沉淀系數的增加)，則脂多糖的抗補體作用亦相應地增加。高度集聚的脂多糖鈉鹽表達出很強的抗補體活性。其他低集聚度的脂多糖鹽，則表現為弱抗補體活性。脂多糖的三乙胺鹽(S=9.0)則會缺失抗體活性。除了抗補體活性外，其他生物學活性亦受到脂多糖物理性狀的影響。實驗結果表明:低集聚度的脂多糖分子能導致很強的家兔發(fā)熱反應及小鼠致死毒性

內毒素中兩類脂多糖有什么相同特征？2022/10/27

根據О-特異性側鏈的存在與否可將脂多糖分為光滑型(smooth-formS-脂多糖)和粗糙型(rough-formR-脂多糖)兩大類，前者的組成成分只有類脂A、核心寡糖及O一特異性側鏈，而居者僅含有類脂A及完整或部分核心成分。雖然兩類脂多糖在某些物理特征上表現出顯著的差異性（主要為表現分子量及水溶性方面)，但在如下方面具有相同特征:1.內毒素經口服毒性較小，人血則毒性很大。例如人口服150mg內毒素無不良反應，而靜注0.1~0.5ng/kg即可引起發(fā)熱、頭痛、嘔吐等臨床癥狀。兩者劑量相差百萬倍以

革蘭氏陰性菌細胞壁的結構與組成2022/10/27

1．磷脂細菌外膜所含的磷脂成分與真核細胞膜的成分極為相似，有一點有意義的區(qū)別在于細菌(如大腸桿菌等)外膜含有多量的磷脂酰乙醇胺。其他的成分有磷脂酰甘油及心磷脂等。磷脂是組成外膜內葉的主要分子，而外膜的外葉則是由內毒素及磷脂分子共同組成的，亦即由磷脂一磷脂所形成的雙層膜結構僅局限于外膜的局部區(qū)域。由于細菌內毒素與磷脂分子在結構上具有高度的相似性，故而這種由磷脂—磷脂，磷脂—內毒素所組成的外膜結構并不影響外膜的穩(wěn)定性。2.內毒素內毒素系革蘭氏陰性菌及某些陰性菌樣微生物外膜中的一種結構成分，在文獻中更

內毒素在細胞外膜功能中的作用2022/10/27

想必大家都已越來越清楚外膜結構對于革蘭氏陰性菌起著十分重要的生理作用。由于外膜的存在，使得細菌對機體的防御性體液因子，如溶菌酶、β-溶解素及許多白細胞毒性蛋白具有抵抗作用，而這類物質一般講對于革蘭氏陽性菌具有高度的毒性。存在于人或動物腸道中的革蘭氏陰性腸桿菌其外膜得到了高度的發(fā)達，并成為一種有效的屏障結構，這樣，這類細菌不易收到膽鹽的去垢作用及消化酶的降解作用。另外，腸道及其他的一些革蘭氏陰性菌的外膜，對于許多抗菌素如大內環(huán)類抗生素﹑新菌素，利福平，林可霉素、柯林達霉素及梭鏈孢酸等具有屏障作用。

細菌細胞壁的結構與內毒素的關系2022/10/26

所有細菌的表面均具有一層稱為細胞壁(cellwall)的結構，位于細菌細胞最外層，包在細胞膜周圍，是一種膜狀結構，組成成分較復雜，并隨不同細菌而異。但其主要組分是肽聚糖(peptidoglycan)(又稱粘肽、糖肽﹑胞壁質)，肽聚糖的存在提供了細菌細胞壁的強度，具有機械性保護意義。革蘭氏陰性菌和革蘭氏陽性菌尚各有特殊成分。革蘭氏陽性菌的肽聚糖由聚糖骨架、四肽側鏈和五肽交聯(lián)橋三部分組成(圖1)；革蘭氏陰性菌者僅由肽聚糖和四肽側鏈兩部分組成(圖2)。革蘭氏陽性菌細胞壁的結構與組成革蘭氏陽性菌細胞壁較

內毒素相關問題的簡介2022/10/26

內毒素誘導的內源性細胞因子有哪些？機體受內毒素（LPS)刺激后，可直接或間接地刺激免疫活性細胞產生多種內源性調節(jié)因子，故在體內形成一個細胞因子網絡。這些細胞因子在LPS生物學活性表達過程中起著十分重要的作用。目前比較清楚的由LPS刺激產生的細胞因子主要有:腫瘤壞死因子類(tumornecrosisfactors，TNF)、干擾素類(interferons，IFNs)、白細胞介素類(interleukins，IL—s)集落刺激因子類(colony-stimulatingfactors，CSFs)等

應用鱟試驗法對靜脈注射液進行內毒素檢測的優(yōu)點2022/10/26

臨床上，不同濃度的葡萄糖注射液、生理鹽水注射液、氯化鈉注射等常被用于靜脈注射使用。這些注射液在被臨床應用前，都需要經過內毒素檢測，唯有內毒素檢測合格的注射液，才能真正用于臨床使用。以前較為經常使用檢測細菌內毒素的方法多為家兔熱原法，直到近年來，國內外許多研究這方面的專家應用了鱟試驗法和家兔熱原法進行了大量的研究，他們發(fā)現，在用鱟試驗法和家兔熱原法進行內毒素檢測時，兩種方法的試驗結果基本一致，但是較為明顯一點的是：鱟試驗法比家兔熱原法的靈敏度高達10~100倍。在1977年的時候，Travenol

內毒素的特點是什么？感染內毒素會發(fā)生什么？2022/10/25

內毒素在1892~1895年期間，就已經被發(fā)現了。現在，我們已經非常清楚地知道：內毒素（endotoxins）系存在于革蘭氏陰性菌細胞壁外膜中的脂多糖（lipopolysaccharides，LPS），即含有親水性的多糖部分和一個疏水的類脂A。多糖部分由О抗原側鏈和核心多糖組成，類脂A的基本結構為脂酰化的二磷酸β1，b-D-氨基葡萄糖雙糖，是脂多糖發(fā)揮生物活性不-可-缺少的部分，脂多糖在結構及功能上具有三個“兩性”特征，即屬于兩性（親水性、疏水性）分子，攜帶兩極（正、負）電荷，及發(fā)揮兩相（有益、

內毒素是怎么被發(fā)現的？2022/10/25

內毒素到底是怎么被發(fā)現的呢？在1892~1895年期間，RichardPfeiffer首-次報道：革蘭氏陰性菌的細胞壁中含有有毒物質。他在研究霍亂弧菌感染的發(fā)病機理時，發(fā)現該菌可產生兩種具有不同性質的毒性物質，一種為由活菌合成并釋放出來，對熱敏感的蛋白質成分即外毒素（exotoxin）；另一種為對熱抵抗，并且只有當細菌崩解后才能釋放出來的非蛋白質成分，他將后一種毒性物質稱為內毒素（endotoxin）。緊接著，意大利的Centanni通過自溶的方法從各種革蘭氏陰性桿菌中提取到了類似的毒性物質，他

熒光測定法檢測細菌內毒素含量的方法介紹2022/10/25

鱟試驗法中，有不少方法可以檢測細菌內毒素含量，其中一種就是熒光測定法。那熒光測定法在試驗中是怎么進行操作的呢？首先需要將熒光母素和鱟試劑充分混勻，這樣蛋白分子在進行凝膠反應的同時，熒光素就可以將其標記上。在凝膠逐漸形成的過程中，蛋白分子的聚合結構也會慢慢發(fā)生變化，與此同時，與熒光素結合的蛋白因子也會跟隨水分子的運動從而進行同步旋轉，使得熒光的偏光度會發(fā)生變化。這時，我們將熒光的偏光度設為P，垂直的熒光強度設為I1，水平的熒光強度設為I2,,然后可以看得出，P值會因為凝膠的凝固程度而發(fā)生變化，這個

內毒素毒性效應的治療措施有哪些？2022/10/24

內毒素（Endotoxin）的存在可能會引起廣泛的病理變化，如發(fā)熱、Shwartzman反應、彌漫性血管內凝血（DIC）、炎癥細胞因子的釋放等，嚴重者可導致內毒素血癥及致死性的內毒素休克，后者的死亡率可高達40%~60%，且其發(fā)生率有逐年上升的趨勢。針對內毒素及其毒性效應而設計的抗內毒素治療已成為國際上學術界研究的熱點之一。這些治療措施主要包括:內毒素及類脂A抗體（中和作用），無毒/低毒類脂A類似物（拮抗作用），化學藥品（如多糖菌素B及其衍生物，化學吸附作用），抗細胞因子抗體（中和內毒素誘生的炎

對內毒素的研究應用還需做出什么努力？2022/10/24

近百年來，人類對內毒素本質、化學結構、醫(yī)學生物學性質的研究，均有賴于從細菌中分離或人工合成純品。特別是1968年美國學者JackLiven創(chuàng)建鱟試驗（Liniulustest），使內毒素的定性、定量測定成為一種十分簡便的方法后，在醫(yī)藥衛(wèi)生領域，吸引了更多學者對內毒素研究的興趣。鑒于內毒素的首要生物學活性是引起哺乳動物發(fā)熱，各國藥典紛紛收載《細菌內毒素試驗》，作為《熱原試驗》的補充，為了統(tǒng)一國際間內毒素量值，使試驗結果具有可比性，世界衛(wèi)生組織（WHO）于1986、1994年兩次組織國際協(xié)作標定，建

凝膠法中毛細吸管法的使用介紹2022/10/24

1980年，瑞典學者Gardi最先發(fā)明了毛細吸管法。那凝膠法中毛細吸管法到底是怎么應用的？首先，需要分別使用10μl的供試品和10μl的鱟試劑將它們滴在載玻片上，這個載玻片必須是無菌無熱原的。接著需要將它們充分混勻，然后使用毛細吸管吸進去，吸進去的高度為毛細吸管的三分之二即可，再將它們在37℃的環(huán)境中靜置45至60分鐘。最后，將毛細吸管取出來，把它浸入溴酚染料中，只需浸入2至3秒即可，再次取出就能判斷出試驗結果了。觀察時，若發(fā)現染料進入了毛細吸管里面，就可以知道供試品中是沒有內毒素的，或者可以說

凝膠法中玻片法的創(chuàng)立及改進過程2022/10/21

在凝膠法中，由于試管法的使用會消耗大量的鱟試劑，以及在試驗時使用的時間較長、對試驗結果判定難以標準化的問題。在1974年的時候，有個叫Frauch的科學家首先創(chuàng)立了玻片法。那玻片法的使用方法到底是怎么樣的呢？在Frauch的介紹中說到，首先需要取出10μl的鱟試劑和在試驗前就已經處理過的供試品10μl，均滴在無菌無熱原的玻片上，接著將這兩者充分混勻，再在37℃的環(huán)境中靜置30分鐘，最后取出觀察試驗結果。若發(fā)現被檢樣品中含有內毒素，混合物就會形成凝膠，且把載玻片倒置時混合物不會流動并且摸起來很牢固

凝膠法常用方法之試管法2022/10/20

在凝膠法中，經常使用的方法就包括試管法。那在凝膠法中，試管法的使用方法是怎么樣的呢？首先需要把供試品和鱟試劑等量加入試管中，輕搖晃使其充分混勻，再將該試管置于水浴中靜置，取出后再觀察該試管的凝膠是否形成。試驗時，需要作試驗管、陽性對照管、陰性對照管及陰性抑制對照管共4種，來作對照試驗。1.試驗管需要取出0.1ml的樣本和0.1ml的鱟試劑。水、注射液等一般樣本在試驗前是不需要進行處理的，但是如果血液、腹腔滲出液等其他液體就必須在試驗前就進行處理，因為這些樣本可能存在鱟試驗法反應的抑制物。所用的鱟

鱟試驗法在檢測前時應做什么？2022/10/19

鱟試驗法（鱟變形細胞溶解物試驗）是第一個被美國作為檢測細菌內毒素的法定方法的，美國還將此法納入了美國藥典第20版（1980）中，并對該法進行了非常詳盡的介紹。慢慢地，也有許多國家也將鱟試驗法作為檢測細菌內毒素的法定方法。現在就以美國為例子，來詳細闡明鱟試驗法。美國食品藥品管理局（FDA）有這樣一條準則，即只要是給人類使用的藥品、生物制劑、醫(yī)療器械等產品最后一定要使用鱟試驗法進行細菌內毒素檢測，只有檢測過關的產品才能得到美國食品藥品管理局的承認。那鱟試驗法作為檢測細菌內毒素的法定方法，在進行試驗檢