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2016
06-03

western blot的原理及應用
Westernblot法即是一種將電泳與KIJSA結合起來的技術，可分為電泳、轉印、酶免疫測定3個階段。Westernblot法結合了電泳的高分辨率和酶免疫測定的高敏感性和特異性，是一種能用于分析樣本組分的免疫學測定方法。westernblot的作用與SouthernBlot或NorthernBlot雜交方法類似，但WesternBlot采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳，被檢測物是蛋白質，“探針”是抗體，“顯色”用標記的二抗。經過PAGE分離的蛋白質樣品，轉移到固相載體（例如硝酸纖維素薄膜）上，固相載
2016
06-03

核酸純化的原理
核酸抽提與純化是分子生物學試驗的基礎，核酸純化方法是影響提取核酸質量高低的重要因素，也是下游分子生物學試驗成敗的關鍵。核酸純化的方法及原理如下：一、PC抽提法PC抽提是去除蛋白質有效的手段，但超過了該飽和度，裂解體系中的蛋白質不會被一次去除，必須靠多次抽提，方可*去除。且每次抽提都會損失部分核酸。另外，體系太粘稠的壞處是，蛋白質難以*去除，以及基因組DNA會斷裂得更厲害，所以要注意裂解液與樣品的比例。PC抽提的另外一個用途是，利用酸性酚可以部分去除DNA的特點，在RNA抽提時獲得DNA殘留極少的
2016
06-03

DMEM培養基的使用方法及特點
DMEM是一種含各種氨基酸和葡萄糖的培養基，高糖型有利于細胞停泊于一個位置生長，適于生長較快、附著較困難腫瘤細胞等。該類培養基廣泛應用于疫苗生產和各種初代病毒宿主細胞的細胞培養及單一細胞培養;如A9、3T6、BALB/3T3、COS-1、COS-3、COS-7、L6、WEHI-3b等細胞系的培養。DMEM培養基的成分DMEM培養基的配制方法：1制備新鮮三蒸水或超純水。2稱取所需量的干粉培養基，加入約終體積一半的三蒸水中;若配制一個包裝的培養液，在將整個包裝的干粉倒入三蒸水后，需用水洗包裝袋內面2
2016
06-03

細胞培養血清的作用及分類
血清，指血液凝固后，在血漿中除去纖維蛋白分離出的淡黃色透明液體或指纖維蛋白已被除去的血漿。其主要作用是提供基本營養物質、提供激素和各種生長因子、提供結合蛋白、提供促接觸和伸展因子使細胞貼壁免受機械損傷、對培養中的細胞起到某些保護作用。牛血清是細胞培養中用量大的天然培養基,含有豐富的細胞生長必須的營養成份,具有極為重要的功能.細胞培養血清的作用1.在細胞培養中提供對維持細胞指數生長的激素,基礎培養基中沒有或量很少的營養物,以及主要的低分子營養物.2.提供結合蛋白,能識別維生素、脂類、金屬和其他激素
2016
06-03

簡述細胞培養的步驟
細胞培養技術也叫細胞克隆技術，在生物學中的正規名詞為細胞培養技術。現代生物技術一般認為包括基因工程技術、細胞工程技術、酶工程技術和發酵工程技術，而這些技術的發展幾乎都與細胞培養有密切關系，特別是在醫藥領域的發展，細胞培養更具有特殊的作用和價值。以下來具體講一下細胞培養的步驟。細胞培養的步驟一、細胞復蘇：1.將新鮮培養基置于37℃水浴鍋中回溫，回溫后噴以75%酒精并擦拭之，移入無菌操作臺內。如配置：50mL*培養基(含10%FBS，1%青鏈霉素雙抗)44.5mL基礎培養基+5mLFBS+0.5mL
2016
05-25

細胞培養瓶規格及各種形狀使用方法
細胞培養瓶，主要用來培養細胞的。一般根據瓶子容積細胞培養瓶規格有5500ml供選擇。根據材質可以分為玻璃的和塑料的，底部形狀有正方形、長方形、三角形等，根據瓶子容積有5500ml供選擇。另外，表面經過特殊改性處理后，可以讓細胞更好的進行貼壁培養，這樣根據細胞貼壁面積又可以分為25～175cm2多種。國產的細胞培養瓶一般蓋子都是封閉的，不帶內墊，常用于密閉培養，可保證其密閉性;進口的培養瓶的蓋子樣式比較多：密閉蓋、聚酯蓋、透氣蓋、隔墊蓋等。密閉蓋的性能和國產的是相同的，聚酯蓋常用于開放培養，只需輕
2016
05-25

比色皿的使用和清洗
比色皿透光面是由能夠透過所使用的波長范圍的光的材料制成。在200-350nm工作的比色皿適用于紫外區,必須使用石英或熔熔硅石制成透光面的石英比色皿。(注：熔熔硅石的俺還真沒見過，只用過石英的，哪位板油要是有的話，一定要讓俺看看，開開眼界啊)石英比色皿既可用于紫外區又可用于可見區，但是價格一般比較貴哦，所以要根據使用波長選擇比色皿，如果不用紫外區的話，用普通玻璃比色皿就行了，一則浪費沒必要，二則，嘿嘿，摔碎了也不心疼，哈哈。而普通硅酸鹽光學玻璃制成的透光面的比色皿,只能用于350nm1000nm的
2016
05-25

表面活性劑的使用原理
表面活性劑就是通過降低反應物質表面的活化能，促進物質表面活化的一種活化劑。一類能降低液體表面張力的試劑.通常在分子內含有一個疏水基團和一個親水基團,如去垢劑、乳化劑、消泡劑等.表面活性劑的原理表面活性劑的工作原理就是一個火柴棍結構的模式，表面活性劑的結構類似一根火柴棍,火柴頭就是親水端,火柴桿就是親油端.親油端插入油污分子內部,相似相容；親水端跟水分子結合形成膠束團.這樣,再經過機械摩擦運動,就將油污分子疏松開來,拉進水中,從而達到膨化、溶解、擴散、洗滌油污的目的.表面活性劑本身就是單質,單一化
2016
05-23

YNB培養基的成分及滅菌方法
以下是TNB培養基的成分，本品僅用于研發，而不是用于藥物、家庭或其他用途。配制途中可因培養物不同而適當添加或減少其他成份。YNB培養基的成分NitrogenSource（氮源）AmmoniumSulfate（硫酸銨）...............................................5gVitamins（維生素）Biotin（生物素）........................................................2μgCalciumPan
2016
05-23

油紅O染色步驟有哪些
油紅O染色液主要由油紅O異丙醇飽和液組成，利用染料易溶于脂質的性質證明組織脂質含量的多少。適用于細胞學與組織學研究的切片觀察.但滲透慢,不能長期保存;冰凍切片附貼于載玻片后，立即放入恒冷箱中的固定液固定1分鐘后即可染色。染色后脂滴呈橘紅色。下面來了解一下油紅O染色步驟有哪些。油紅O染色步驟試劑:0.5%的油紅O溶液配方(100ml)：油紅O：1.5g70%乙醇：50ml丙酮：50ml需要的其他試劑：異丙醇、乙醇、丙酮、蘇木素（hematoxylin）油紅O染色步驟:1．將冰凍切片(厚度為4-8u
2016
05-23

什么是LB培養基，以及LB培養基的分類
什么是LB培養基？LB培養基是一種培養基的名稱，是微生物學實驗中常用的培養基，生化分子實驗中一般用該培養基來預培養菌種,使菌種成倍擴增,達到使用要求.可分為液體培養基和固體培養基。LB培養基的分類液態LB培養基根據《分子克隆實驗指南》（J.薩姆布魯克D.W.拉塞爾著）配制每升培養基,應該在950ml去離子水中加入:蛋白胨10g酵母提取物5gNaCl10g搖動容器直溶質溶解.用5mol/LNaOH調pH7.0.用去離子水定容1L.在15psi高壓下蒸汽滅菌21min.培養的菌種一般是經過改造的無法
2016
05-23

培養基的配制與滅菌方法說明
培養基（Medium）是供微生物、植物組織和動物組織生長和維持用的人工配制的養料，一般都含有水、氮源、無機鹽（包括微量元素）、碳源、生長因子（維生素、氨基酸、堿基、抗菌素、色素、激素和血清等）等。不同培養基可根據實際需要，添加一些自身無法合成的化合物，即生長因子。有些微生物，如自養型微生物，不需要碳源，所以上述物質只具有一般性。培養基由于配制的原料不同，使用要求不同，而貯存保管方面也稍有不同。一般培養基在受熱、吸潮后，易被細菌污染或分解變質，因此一般培養基必須防潮、避光、陰涼處保存。對一些需嚴格
2016
05-23

培養基的制備方法及基本原則
培養基一般都含有碳水化合物、含氮物質、無機鹽（包括微量元素）以及維生素和水等。供微生物、植物組織和動物組織生長和維持用的人工配制的養料。不用的培養基的成分不同，但是步驟卻大徑相同。培養基的制備方法1.配料配方換算→在容器中加入少量水（蒸餾水，自然水）→按照配方稱取各種藥品（依次加入）→加足所需水量（一藥一勺，取藥后立即蓋上瓶蓋）。2.溶解淀粉溶解：少量冷水調成糊狀加熱溶解，特別是加有瓊脂的培養基，一定要煮沸，瓊脂的熔解溫度95-97℃，且需要邊加熱邊攪拌以防止燒焦。3.調PH用1N的鹽酸或1N的
2016
05-23

微生物培養基的滅菌方法
微生物培養基是供微生物生長和維持用的人工配制的養料，不同培養基可根據實際需要，添加一些自身無法合成的化合物，即生長因子。按照培養基的成分來分培養基按其所含成分，可分為合成培養基、天然培養基和版合成培養基三類。按照微生物的種類分培養基按微生物的種類可分為細菌培養基、放線菌培養基、酵母菌培養基和霉菌培養基等四類。培養基應具有適宜的pH值、一定的緩沖能力、一定的氧化還原電位及合適的滲透壓。為了達到特定要求的研究，需要進行培養基配制和滅菌。那么微生物培養基的滅菌方法有哪些呢？微生物培養基的滅菌方法滅菌的
2016
05-23

簡述實驗室微生物培養步驟方法
微生物培養（microculture)是生物培養的中的一種。所培養的微生物主要有病毒、細菌、放線菌、真菌等。微生物培養需要用到培養基，根據微生物的不同種類和生活習性來配制特定的培養基。微生物培養成功的關鍵在于無菌操作，如果培養器具和培養基不能*滅菌、培養的過程中有雜菌污染是很容易失敗的。那么微生物培養步驟有哪些呢？實驗室微生物培養步驟實驗材料1培養基和菌種淀粉瓊脂培養基(高氏I號培養基)，牛肉膏蛋白胨瓊脂培養基，馬丁氏瓊脂培養基，查氏瓊脂培養基，活性污泥混合液。普通瓊脂斜面和平板,營養肉湯,普通
2016
05-23

微生物培養基的配制方法以及常見培養基的成分
微生物培養基是供微生物生長、繁殖、代謝的混合養料。微生物培養基中一般含有微生物所必需的碳源、氮源、無機鹽、生長素以及水分等。另外，培養基還應具有適宜的pH值、一定的緩沖能力、一定的氧化還原電位及合適的滲透壓。下面我們來介紹一下基本微生物培養基的配制方法。微生物培養基的配制溶化：一般應放在玻璃器皿或搪瓷齊內.加入蒸餾水,隔水加熱以促其溶解,加熱時應經常攪拌,防止焦結,待其溶解后補足水分.在使用干燥培養基時,先將蒸餾水按定量加入容器中,然后稱取一定量培養基干粉放入水中,靜置10—15min,攪拌,振
2016
05-23

微生物培養基的分類常見的微生物培養基
微生物培養基是按照微生物生長繁殖或產生代謝產物所需要的各種營養物質，人工配制而成的營養基質。在微生物培養過程中，微生物培養基要根據不同的菌種及其不同的培養目的確定搭配的營養成分及營養比例。那么微生物培養基的分類是怎么樣的呢？微生物培養基的分類1、按照培養基用途分為培養基按其特殊用途可分為加富培養基、選擇性培養基和鑒別培養基。合成培養基：合成培養基的各種成分*是已知的各種化學物質。這種培養基的化學成分清楚，組成成分，重復性強，但價格較貴，而且微生物在這類培養基中生長較慢。如高氏一號合成培養基、察氏
2016
05-23

表面活性劑的作用
表面活性劑(surfactant)，是指加入少量能使其溶液體系的界面狀態發生明顯變化的物質。表面活性劑分為離子型表面活性劑（包括陽離子表面活性劑與陰離子表面活性劑）、非離子型表面活性劑、兩性表面活性劑、復配表面活性劑、其他表面活性劑等。那么表面活性劑的作用是什么呢？表面活性劑的作用（1）乳化作用：由于油脂在水中表面張力大,當水中滴入油脂后,用力攪拌,油脂被粉碎成細珠狀,互相混合成乳濁液,但攪拌停止又重新分層.如果加入表面活性劑,用力攪拌,停止后很長時間內卻不易分層,這就是乳化作用.其原因是油脂的
2016
05-13

RIPA裂解液的原理
RIPA裂解液(RIPALysisBuffer)對動物細胞胞膜、胞漿、胞核成分均有較強裂解作用，RIPA裂解液裂解得到的蛋白樣品可以用于常規的Western、IP等。RIPA裂解液的原理如下：RIPA主要是從動物組織和動物細胞中抽取的可溶性蛋白。RIPA組織/細胞裂解液是利用表面活性劑等來裂解細胞膜（包括核膜）。索萊寶RIPA裂解液的使用方法如發現RIPA有沉淀，請放室溫半小時或者常溫水浴使沉淀溶解。根據使用量，取每1mlRIPA加入10ulPMSF，使PMSF的終濃度為1mM。混勻備用（PMS
2016
05-13

瑞氏染色的步驟
瑞氏染色是目前常用而又簡單的染色方法。瑞氏染液由酸性染料伊紅和堿性染料美藍組成的復合染料，溶于甲醇，后解離為帶正電的美藍和帶負電的伊紅離子。瑞氏染色的步驟是什么？為了觀察細胞內部結構，識別各種細胞及異常變化，血涂片必須進行染色。血涂片的各種染色方法大多是羅氏染色法衍變而來。目前常用瑞氏染色法。瑞氏染色的步驟瑞氏染液的配制：取瑞氏染料1.0g、甲醇600ml、甘油15ml。I液：將全部染料放入清潔干燥的乳缽中，先加少量甲醇慢慢地研磨(少半小時)，以使染料充分溶解，再加一些甲醇混勻，然后將溶解的部分

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