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2016
04-27

福林酚法測蛋白含量步驟
福林酚法測蛋白含量早是由Lowry確定的測定蛋白質濃度的基本方法。以后在生物化學領域得到廣泛的應用。此法的顯色原理與雙縮脲方法是相同的，只是加入了第二種試劑，即Folin—酚試劑，以增加顯色量，從而提高了檢測蛋白質的靈敏度。福林酚法測蛋白含量原理：蛋白質與福林酚試劑反應,生成深藍色復合物.藍色的深淺與蛋白質含量成正比.可用分光光度計于500nm波長下進行測定.與標準曲線對照,而確定蛋白質含量.福林酚法測蛋白含量所需試劑Folin—酚試劑：1.試劑甲1)4%碳酸鈉溶液2)0.2mol/L氫氧化鈉溶
2016
04-27

IPTG誘導蛋白表達步驟說明
異丙基硫代半乳糖苷（IPTG）是一種作用*的誘導劑，不被細菌代謝而十分穩定，因此被實驗室廣泛應用。當有乳糖存在時，lac操縱子（元）即可被誘導。在這個操縱子（元）體系中，真正的誘導劑并非乳糖本身。乳糖進入細胞，經b－半乳糖苷酶催化，轉變為半乳糖。后者作為一種誘導劑分子結合阻遏蛋白，使蛋白構象變化，導致阻遏蛋白與O序列解離、發生轉錄。材料1、誘導表達材料(1)LB（Luria—Bertani）)培養基酵母膏(Yeastextract)5g蛋白胨(Peptone)10gNaCl10g瓊脂(Agar)
2016
04-27

IPTG誘導原理
異丙基-β-D-硫代半乳糖苷,英文名稱IPTG。為安慰性誘導物，X-gal為生色底物，二者共同用于藍白斑篩選。IPTG可誘導載體lac操縱子DNA區段合成β-半乳糖苷酶氨基端片段，該片段可與宿主細胞編碼的缺陷型β-半乳糖苷酶實現基因內互補(α互補)。IPTG誘導原理先E.coli的乳糖操縱子（元）含Z、Y及A三個結構基因，分別編碼半乳糖苷酶、透酶和乙酰基轉移酶，此外還有一個操縱序列O、一個啟動序列P及一個調節?基因I。I基因編碼一種阻遏蛋白，后者與O序列結合，使操縱子（元）受阻遏而處于關閉狀態。
2016
04-26

關于CCK8實驗步驟的敘述
CCK-8為細胞增殖檢測試劑盒，細胞增殖是生物體的重要生命特征，細胞以分裂的方式進行增殖。必須強調指出，通過細胞分裂，可以將復制的遺傳物質，平均地分配到兩個子細胞中去。可見，細胞增殖是生物體生長、發育、繁殖和遺傳的基礎。CCK8實驗步驟如下。CCK-8實驗步驟1、在96孔板中配置100μl的細胞懸液。將培養板在培養箱預培養24小時（37℃，5%CO2）。2、向培養板加入10μl不同濃度的待測物質。3、將培養板在培養箱孵育一段適當的時間（例如：6、12、24或48小時）。4、向每孔加入10μlCC
2016
04-26

CCK-8實驗注意事項及相關問題
CellCountingKit-8簡稱CCK-8試劑盒，為MTT法的替代方法，是一種基于WST（水溶性四唑鹽，化學名：2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽）的廣泛應用于細胞增殖和細胞毒性的快速高靈敏度檢測試劑盒。可用于藥物篩選、細胞增殖測定、細胞毒性測定、腫瘤藥敏等試驗。活力計算：.細胞活力（％）=[A(加藥)－A(空白)]／[A(0加藥)－A(空白)]×100A（加藥）：具有細胞、CCK-8溶液和藥物溶液的孔的吸光度A（空白）：具有培養
2016
04-26

IPTG配制的方法及使用說明
IPTG是一種作用*的誘導劑，不被細菌代謝而十分穩定，因此被實驗室廣泛應用。IPTG溶液的配制很簡單：在8ml蒸餾水中溶解2gIPTG后，用蒸餾水定容10ml，用0.22μm濾器過濾除菌，分裝成1ml小份貯存于-20℃。IPTG的使用方法：先把IPTG配制成24mg/ml（100mM）的水溶液，并進行過濾除菌后保存。然后在100ml的瓊脂培養基中，加入100μl的上述溶液、200μl的X-Gal（20?mg/ml的二甲基甲酰胺（DMF）溶液）和100μl的Amp（100mg/ml），制作成IPT
2016
04-25

結晶紫染液的配制方法
結晶紫染色液(CrystalVioletStainingSolution)是一種組織或細胞染色時常用的可以把細胞核染成深紫色的染色液。結晶紫是一種堿性染料，可以和細胞核中的DNA結合，從而產生細胞核染色。結晶紫染液的配制方法如下：結晶紫染液的配制結晶紫(crystalviolet)液：結晶紫乙醇飽和液(結晶紫2g溶于20mL95%乙醇中)20mL，1%草酸銨水溶液80mL將兩液混勻置24h后過濾即成。結晶紫染液使用方法1.樣品處理a)對于石蠟切片：二甲苯中脫蠟5-10分鐘。換用新鮮的二甲苯，再脫
2016
04-25

結晶紫指示劑變色范圍是多少
結晶紫（又叫甲基紫，俗名紫藥水）pH0.5(綠)～2.0(藍)。以冰醋酸作溶劑，用酸滴定液滴定堿時，常用的指示劑為結晶紫，還有α－萘酚苯甲醇（0.2％冰醋酸溶液，其堿式色為黃色，酸式色為綠色）和喹哪啶紅（0.1％甲醇液，其堿式色為紅色，酸式色為無色）結晶紫性狀:具有金屬光澤的暗綠色結晶形粉末。熔點為215℃（分解）。溶于水、乙醇和三氯甲烷,溶液呈紫色。不熔于，濃酸中呈黃色，當pH值增大時其顏色變化是黃→綠→藍→紫.與Sn4＋、Tl3＋、Au3＋和Sb3＋的鹵絡陰離子及MoO、ReO等形成締合物,
2016
04-25

常見的指示劑有哪些
不同的指示劑在不同的酸堿環境下呈現不同的顏色。指示劑的分類1、酸堿指示劑。指示溶液中H+濃度的變化，是一種有機弱酸或有機弱堿，其酸性和堿性具有不同的顏色。指示劑酸HIn在溶液中的離解常數Ka=[H+][In-]/[HIn]，即溶液的顏色決定于[In-]/[HIn]，而[In-]/[HIn]又決定于[H+]。以甲基橙（Ka=10-3.4）為例，溶液的pH4.4時，呈堿性，具黃色；而在pH3.1～4.4，則出現紅黃的混合色橙色，稱之為指示劑的變色范圍。不同的酸堿指示劑有不同的變色范圍。2、金屬指示劑
2016
04-25

總結實驗室常用染色液的制備方法
染色液是實驗室中常用的試劑之一，分為天然染液和人工染料，也分堿性染料和酸性染料，以下來詳細介紹一下實驗室常見染色液的配制。⒈碘-碘化鉀（I2-KI）溶液能將淀粉染成藍紫色，蛋白質染成黃色，也是植物組織化學測定的重要試劑。配方：碘化鉀2g；蒸餾水300ml；碘1g先將碘化鉀溶于少量蒸餾水中，待全溶解后再加碘，振蕩溶解后稀釋300mL，保存在棕色玻璃瓶內。用時可將其稀釋2-10倍，這樣染色不致過深，效果更佳。⒉蘇丹Ⅲ（sudanⅢ或Ⅳ）能使木栓化、角質化的細胞壁及脂肪、揮發油、樹脂等染成紅色或淡紅色
2016
04-22

熒光免疫染色和DAPI染色實驗步驟
免疫染色實驗方法和步驟免疫染色(immunolstaining)包括免疫熒光(immunolfluorescence)、免疫組化(immunolhistochemistry)、免疫細胞化學(immunolcytochemistry)等，可以參考如下步驟進行操作。1.樣品準備(Samplepreparation)對于貼壁細胞：可以直接用多孔板，例如6孔板、24孔板等，培養細胞，然后到預定時間時進行固定等后續操作。也可以用潔凈的蓋玻片，70%乙醇中浸泡后，用無菌的鑷子放置到6孔板內，然后用無菌的生理
2016
04-22

DAPI染DNA的原理及使用方法（包含DAPI配制）
DAPI染DNA的原理及使用方法DAPI即4',6-二脒基-2-苯基吲哚(4',6-diamidino-2-phenylindole)，分子式為C16H15N5·2C3H6O3，分子量457.48。DAPI是一種能夠與DNA強力結合的熒光染料。它結合到雙鏈DNA小溝的AT堿基對處，一個DAPI分子可以占據三個堿基對的位置。結合到雙鏈DNA上DAPI分子的熒光強度提高大約20倍，常用與熒光顯微鏡觀測，根據熒光的強度可以確定DNA的量。另外，因為DAPI可以透過完整的細胞膜，它可以用于活細胞和固定細
2016
04-22

透析袋原理介紹及使用方法步驟
自1861年發明透析方法今已有一百多年。透析已成為生物化學實驗室簡便常用的分離純化技術之一。在生物大分子的制備過程中，除鹽、除少量有機溶劑、除去生物小分子雜質和濃縮樣品等都要用到透析的技術。通常是將半透膜制成袋狀，將生物大分子樣品溶液置入袋內，將此透析袋浸入水或緩沖液中，樣品溶液中的大分子量的生物大分子被截留在袋內。下面分別介紹透析袋和透析膜使用方法和步驟透析袋使用前處理方法：1.把透析袋剪成適當長度（10-20cm）的小段。2.在大體積的2%(W/V)碳酸氫鈉和10mmol/LEDTA(pH8
2016
04-22

透析袋分子量的選擇如何選擇合適的透析袋
透析是一個簡單的擴散過程，溶質中小分子物質從高濃度溶液通過半透性膜擴散到低濃度溶液中，直滲透壓達到平衡。由于多孔膜的選擇性，使得溶質中小分子物質可以通過，而較大物質則被截留，從而分離出不同大小分子量的物質，依據分子量大小截留，可用于分離工藝，改變或控制透析的條件，可在多種透析應用中得到預期效果，通過截留分子量（MWCO）可使目標分子得到分離。所以透析袋分子量的選擇就決定了實驗的成敗。這篇文章就詳細介紹了如何選擇合適的透析袋。透析膜的材質透析膜可用動物膜和玻璃紙等，但用的多的還是用纖維素制成的透析
2016
04-21

姬姆薩染液配制方法及原理
姬姆薩染液又稱吉姆薩染色液，姬姆薩染原液，為天青色素、伊紅、次甲藍的混合物。常用作對血液涂抹標本、血球、瘧原蟲、立克次體以及骨髓細胞、脊髓細胞等標本進行染色的染色方法。姬姆薩染色液的配制方法很簡單，但是現在很多實驗室都開始買現成的姬姆薩染液，這樣節省了時間，染色液的價格也不貴。姬姆薩染液配制方法：甲液：取瑞氏染粉1克,姬姆薩染粉0.3g,置于干燥清潔研缽中，另備甲醇（不含水或丙酮）500ml分數次加少量甲醇研磨，分次收集于棕色玻璃瓶中，每天早晚各搖3分鐘，經1星期后即可使用。2、乙液：（磷酸緩沖
2016
04-21

簡述瑞士-姬姆薩染色液的步驟
瑞氏-姬姆薩染色液是利用Romanowsky??Stain?技術原理改良而成的。主要應用于血液和骨髓涂片染色。姬姆薩染色液對胞漿著色力較強，能較好的顯示胞漿的嗜堿性程度，著色清晰，色澤純正，但是對胞核著色偏深,核結構顯示較差。瑞氏-姬姆薩染色液原理瑞氏-姬姆薩染色液主要應用于血液和骨髓涂片染色，它是利用Romanowsky??Stain?技術原理改良而成的。細胞的著色過程是染料透入被染物并存留其內部的一種過程，此過程既有物理吸附作用，又有化學親和作用。各種細胞及細胞的各種成分由于其化學性質不同，
2016
04-21

嘌呤霉素篩選細胞的原理
嘌呤霉素(puromycin;PM)是一種蛋白質合成抑制劑,它具有與tRNA分子末端類似的結構，能夠同氨基酸結合，代替氨酰化的tRNA同核糖體的A位點結合，并摻入到生長的肽鏈中。用嘌呤霉素篩選細胞方法如下：嘌呤霉素篩選細胞轉染（24孔板進行）或電轉后培養24小時，按10%密度傳代（傳36mm平皿），繼續培養24小時，待細胞密度增20%-25%回合時；去掉培養液，PBS洗一次，加入按照佳嘌呤霉素篩選細胞的濃度（殺傷曲線試驗確定）配制好的嘌呤霉素篩選細胞培養基2-3ml。根據培養基的顏色和細胞的存活
2016
04-21

嘌呤霉素的作用有哪些
嘌呤霉素(puromycin;PM)是一種抗生素，廣泛用作蛋白質合成的抑制劑。其結構與氨酰tRNA3′端上的AMP結構相似，肽酰轉移酶能促使氨基酸與嘌呤霉素結合形成肽酰嘌呤霉素，從核糖體上脫落，從而使蛋白質合成反應中斷。嘌呤霉素的作用如下：嘌呤霉素的作用：嘌呤霉素（Puromycin）是由白黑鏈霉菌（Streptomycesalboniger）發酵代謝產生的一種氨基糖苷類抗生素，嘌呤霉素Puromycin通過抑制蛋白質合成而殺死革蘭氏陽性菌，各種動物和昆蟲細胞。嘌呤霉素Puromycin某種特殊
2016
04-20

簡述bradford法測蛋白濃度實驗過程
Bradford法測蛋白濃度是利用蛋白質-染料結合的原理，定量地測定微量蛋白質濃度的快速靈敏的方法。Bradford法測蛋白濃度原理考馬斯亮藍(CBB)測定蛋白質含量屬于染料結合法的一種。考馬斯亮藍在游離狀態下呈紅色，大光吸收在488nm;當它與蛋白質結合后變為青色，蛋白質—色素結合物在595nm波長下有大光吸收。其光吸收值與蛋白質含量成正比，因此可用于蛋白質的定量測定。蛋白質與考馬斯亮藍結合在2min左右的時間內達到平衡，完成反應十分迅速;其結合物在室溫下1h內保持穩定。該法試劑配制簡單，操作
2016
04-20

bradford法定量蛋白質的實驗原理
Bradford法又稱考馬斯亮藍法，是Bradford于1976年建立起來的一種蛋白質濃度的測定方法。bradford法定量蛋白質的原理是馬斯亮藍（CBB）測定蛋白質含量屬于染料結合法的一種。考馬斯亮藍在游離狀態下呈紅色，大光吸收在488nm；以下是bradford法定量蛋白質的原理及含量測定流程bradford法定量蛋白質的原理考馬斯亮藍（CBB）測定蛋白質含量屬于染料結合法的一種。考馬斯亮藍在游離狀態下呈紅色，大光吸收在488nm；當它與蛋白質結合后變為青色，蛋白質—色素結合物在595nm波

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