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2016
05-13

瑞氏染色原理及作用
瑞氏染液由酸性染料伊紅和堿性染料美藍(lán)組成的復(fù)合染料，溶于甲醇，后解離為帶正電的美藍(lán)和帶負(fù)電的伊紅離子。瑞氏染色法就是用瑞氏染色液對細(xì)菌進(jìn)行染色。那么瑞氏染色原理是什么？瑞氏染色原理：瑞氏染料是由堿性染料美藍(lán)（Methvlemblue）和酸性染料黃色伊紅（EostmY）合稱伊紅美藍(lán)染料即瑞氏（美藍(lán)－伊紅Y）染料。伊紅鈉鹽的有色部分為陰離子，無色部分為陽離子，其有色部分為酸性，故稱伊紅為酸性染料。美藍(lán)通常為氯鹽是堿性的，美藍(lán)的中間產(chǎn)物結(jié)晶為三氯化鎂復(fù)鹽，其有色部分為陽離子，無色部分為陰離子，恰與伊紅
2016
05-13

瑞氏染色的注意事項(xiàng)有哪些
瑞氏染色法是從經(jīng)典和常用的染色法。是染料透入被染物并存留其內(nèi)部的一種過程，此過程既有物理的吸附作用，又有化學(xué)的親和作用，各種細(xì)胞成分化學(xué)性質(zhì)不同，對各種染料的親和力也不一樣。因此，染色后同一血片上各種細(xì)胞可以染上各自特征性的顏色。在瑞氏染色的過程中也有一些注意事項(xiàng)。瑞氏染色的注意事項(xiàng)1.血涂片干透后固定，否則細(xì)胞在染色過程中容易脫落。2.沖洗時(shí)應(yīng)以流水沖洗，不能先倒掉染液，以防染料沉著在血涂片上。沖洗時(shí)間不能過久，以防脫色。如血涂片上有染料顆粒沉積，可滴加甲醇，然后立即用流水沖洗。3.染色過淡可
2016
05-09

蛋白marker的作用的解析
蛋白marker的作用是什么，先要要了解一下什么是蛋白marker。在WesternBlot過程中，分子量Marker就像個(gè)螺絲釘一樣沒雖然是個(gè)小細(xì)節(jié)，然而就是這樣一個(gè)小細(xì)節(jié)對實(shí)驗(yàn)結(jié)果有著不可忽視的作用。蛋白marker的作用：Marker是表面覆蓋有特殊反光材料的標(biāo)記物，常見形狀有球形、半球形。染色體上一個(gè)可以被識別的區(qū)域（比如限制性內(nèi)切酶的酶切點(diǎn)，基因的位置等）。標(biāo)記的遺傳能夠被檢測出來。標(biāo)記可以是染色體上有表達(dá)功能的部分（比如基因），也可以是沒有編碼蛋白質(zhì)功能但遺傳特性能夠被檢測出來的部分
2016
05-09

什么是預(yù)染蛋白marker
蛋白marker可分為未預(yù)染的Marker即寬分子量蛋白標(biāo)準(zhǔn)、高分子量蛋白標(biāo)準(zhǔn)以及低分子量蛋白標(biāo)準(zhǔn)以及預(yù)染的Marker即單色預(yù)染和多色預(yù)染。那么，什么是預(yù)染蛋白marker？預(yù)染蛋白marker為一些純化好的蛋白的混合物.這些蛋白混合物與一種藍(lán)色染料共價(jià)偶聯(lián).可在凝膠電泳時(shí)出現(xiàn)強(qiáng)度均勻的8條帶.同未預(yù)染的蛋白marker相比,預(yù)染蛋白marker因與染料共價(jià)偶聯(lián)而在SDS-PAGE電泳時(shí)的遷移特性發(fā)生某些改變.預(yù)染蛋白分子量標(biāo)準(zhǔn)預(yù)染蛋白分子量是一些純化好的蛋白混合物，通過與染料共價(jià)耦聯(lián)，在電泳
2016
05-09

幾種磷酸緩沖液的配制方法
磷酸緩沖液也叫做磷酸鹽緩沖液，英文名為PhosphateBuffer，是生物化學(xué)研究中使用為廣泛的一種緩沖液，磷酸緩沖液的配制我們一起來了解一下。先，按照下表所給定的體積，混合1mol/L的磷酸二氫鈉(單堿)和1mol/L磷酸氫二鈉(雙堿)貯液，獲得所需pH的磷酸緩沖液。配制1mol/L的磷酸二氫鈉(NaH2PO4?H2O)貯液：溶解138g于足量水中，使終體積為1L;1mol/L磷酸氫二鈉(Na2HPO4)貯液:溶解142g于足量水中使終體積為1L。1mol/L磷酸二氫鈉(ml)lmol/L磷
2016
05-09

磷酸緩沖液的作用
磷酸緩沖液也叫磷酸鹽緩沖液，是生物化學(xué)研究中使用為廣泛的一種緩沖液，磷酸鹽緩沖液是由磷酸二氫鈉和磷酸氫二鈉組成的溶液，那么磷酸緩沖液具體有哪些作用呢?磷酸緩沖液的作用有哪些?磷酸緩沖液主要用于一些化學(xué)實(shí)驗(yàn)中不影響實(shí)驗(yàn)反應(yīng)的情況下調(diào)節(jié)pH值，以便讓實(shí)驗(yàn)的化學(xué)反應(yīng)在佳條件下進(jìn)行。部分用于食品或是飼料行業(yè)加工，如食品或者飼料真菌毒素檢驗(yàn)中Elisa方法的洗板應(yīng)用或者食品微生物檢驗(yàn)中的稀釋緩沖液。磷酸緩沖液的作用不僅僅如此，僅偽狂犬病毒要用它稀釋，一般的有活性的生物制劑都要用它來稀釋。原因就是它具有鹽平
2016
05-06

MTT實(shí)驗(yàn)原理
MTT是一種檢測細(xì)胞存活和生長的方法。MTT實(shí)驗(yàn)原理為活細(xì)胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性MTT還原為水不溶性的藍(lán)紫色結(jié)晶甲瓚（Formazan）并沉積在細(xì)胞中，而死細(xì)胞無此功能。二甲基亞砜（DMSO）能溶解細(xì)胞中的甲瓚，用酶聯(lián)免疫檢測儀在490nm波長處測定其光吸收值，可間接反映活細(xì)胞數(shù)量。在一定細(xì)胞數(shù)范圍內(nèi)，MTT結(jié)晶形成的量與細(xì)胞數(shù)成正比。根據(jù)測得的吸光度值(OD值)，來判斷活細(xì)胞數(shù)量，OD值越大，細(xì)胞活性越強(qiáng)(如果是測藥物毒性，則表示藥物毒性越小)。該方法已廣泛用于一些生物活性因子的活
2016
05-06

MTT配制以及注意事項(xiàng)
MTT全稱為3-（4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2-H-tetrazoliumbromide，又稱噻唑藍(lán)。用于細(xì)胞增殖及細(xì)胞活性測定和對體外細(xì)胞的細(xì)胞毒性的測定。MTT的原理檢測原理為活細(xì)胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性MTT還原為水不溶性的藍(lán)紫色結(jié)晶甲臢（Z?。‵ormazan）并沉積在細(xì)胞中，而死細(xì)胞無此功能。二甲基亞砜（DMSO）能溶解細(xì)胞中的甲臢（Z?。妹笜?biāo)儀在490nm波長處(英文說明書寫的是570nm）測定其光吸收值，在一定細(xì)胞
2016
05-06

MTT法檢測細(xì)胞活性步驟及原理
要知道MTT法檢測細(xì)胞活性步驟先要知道MTT是什么？MTTMTT是一種粉末狀化學(xué)試劑，全稱為3-(4,5)-dimethylthiahiazo(-z-y1)-3,5-di-phenytetrazoliumromide，漢語化學(xué)名為3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑溴鹽，商品名：噻唑藍(lán)。是一種黃顏色的染料。MTT法檢測細(xì)胞活性原理檢測原理為活細(xì)胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性MTT還原為水不溶性的藍(lán)紫色結(jié)晶甲瓚（Formazan）并沉積在細(xì)胞中，而死細(xì)胞無此功能。二甲基亞砜（D
2016
05-04

瓊脂糖凝膠電泳常見問題
瓊脂糖凝膠電泳是用瓊脂或瓊脂糖作支持介質(zhì)的一種電泳方法。對于分子量較大的樣品，如大分子核酸、病毒等，一般可采用孔徑較大的瓊脂糖凝膠進(jìn)行電泳分離。瓊脂糖凝膠電泳常見為題都有哪些？、一、DNA帶模糊、1、DNA降解：瓊脂糖凝膠電泳試驗(yàn)中要避免核酸酶污染2、電泳緩沖液陳舊：電泳緩沖液多系使用后，離子強(qiáng)度降解，PH值上升，緩沖能力減弱，從而影響電泳實(shí)驗(yàn)，建議經(jīng)常更換電泳緩沖液。3、所用電泳條件不合適：電泳時(shí)電壓不應(yīng)超過20V/cm，溫度4、DNA上揚(yáng)量過多：應(yīng)減少凝膠中DNA上樣量。5、DNA樣含鹽量過
2016
05-04

瓊脂糖凝膠電泳條件
瓊脂糖凝膠電泳是用瓊脂糖作支持介質(zhì)的一種電泳方法.其分析原理與其他支持物電泳的主要區(qū)別是：它兼有“分子篩”和“電泳”的雙重作用。瓊脂糖凝膠具有網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)，物質(zhì)分子通過時(shí)會受到阻力，大分子物質(zhì)在涌動(dòng)時(shí)受到的阻力大，因此在凝膠電泳中，帶電顆粒的分離不僅取決于凈電荷的性質(zhì)和數(shù)量，而且還取決于分子大小，這就大大提高了分辨能力。但由于其孔徑相當(dāng)大，對大多數(shù)蛋白質(zhì)來說其分子篩效應(yīng)微不足道，現(xiàn)廣泛應(yīng)用于核酸的研究中。瓊脂糖凝膠電泳條件電泳緩沖液的pH在6~9之間，離子強(qiáng)度0.02~0.05為適。瓊脂糖凝膠約可區(qū)
2016
05-04

瓊脂糖凝膠電泳緩沖液配制
瓊脂糖凝膠具有網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)，物質(zhì)分子通過時(shí)會受到阻力，大分子物質(zhì)在涌動(dòng)時(shí)受到的阻力大，因此在凝膠電泳中，帶電顆粒的分離不僅取決于凈電荷的性質(zhì)和數(shù)量，而且還取決于分子大小，這就大大提高了分辨能力。在瓊脂糖凝膠電泳緩沖液又幾種適用于天然雙鏈DNA的電泳。瓊脂糖凝膠電泳緩沖液配置常見瓊脂糖凝膠電泳緩沖液配制（如圖）TBE通常作為5×或10×的貯存液配制和貯存。這種濃的貯存液pH應(yīng)為8.3左右，它在應(yīng)用前稀釋，并用同一種貯存液制備凝膠溶液和瓊脂糖凝膠電泳緩沖液。上述三種電泳緩沖液都比較好用，三者中TAE的緩
2016
05-04

聚丙烯酰胺凝膠電泳原理以及注意事項(xiàng)
聚丙烯酰胺凝膠電泳簡稱為PAGE（Polyacrylamide?gel?electrophoresis）聚丙烯酰氨凝膠電泳，是以聚丙烯酰胺凝膠作為支持介質(zhì)的一種常用電泳技術(shù)。聚丙烯酰胺凝膠由單體丙烯酰胺和甲叉雙丙烯酰胺聚合而成，聚合過程由自由基催化完成。聚丙烯酰胺凝膠電泳作用：用于分離蛋白質(zhì)和寡核苷酸。聚丙烯酰胺凝膠電泳原理：常用的催化聚合方法有兩種：化學(xué)聚合和光聚合。化學(xué)聚合通常是加入催化劑過硫酸銨（AP）以及加速劑四甲基乙二胺（TEMED），四甲基乙二胺催化過硫酸銨產(chǎn)生自由基。溶液的pH對聚
2016
05-04

MRS培養(yǎng)基的配制方法及原理
MRS培養(yǎng)基常用于食品中乳酸菌總數(shù)測定，自然pH通常是6.2—6.4，在做乳酸菌分離的時(shí)候直接使用自然pH就可以了，如果是做純培養(yǎng)，希望得到交好的菌落，或者是做液體培養(yǎng)，希望得到較多菌體的話，就把pH跳到6.7左右為佳。MRS培養(yǎng)基的原理蛋白胨、牛肉浸粉、酵母浸粉提供氮源、維生素、生長因子；葡萄糖為可發(fā)酵糖類；磷酸氫二鉀為酸堿緩沖劑；檸檬酸氫二銨、硫酸鎂、硫酸錳、吐溫-80和乙酸鈉為培養(yǎng)各種乳酸菌提供生長因子，其成分還能抑制某些雜菌；瓊脂是培養(yǎng)基的凝固劑。MRS培養(yǎng)基的配制蛋白胨10.0g牛肉膏
2016
05-04

MRS培養(yǎng)基成分
MRS培養(yǎng)基成分蛋白陳10.0g牛肉粉5.0g酵母粉4.0g葡萄糖20.0g吐溫801.0mL磷酸氫二鉀2.0g乙酸鈉5.0g檸檬酸三銨2.0g硫酸鎂0.2g硫酸錳0.05g瓊脂粉15.0g蒸餾水1000mL改良MRS培養(yǎng)基成分：胰蛋白胨10g磷酸氫二鉀2g葡萄糖20g無水醋酸鈉3g牛肉浸膏10g檸檬酸三銨2g酵母浸膏5g七水硫酸鎂0.2gX-Gal0.06mg吐溫-801mlL-半胱氨酸0.5g水或MJH水提液1000ml備注：培養(yǎng)基消后用5NNa0H調(diào)pH6.8；MRS培養(yǎng)基配制方法將上述成
2016
05-04

MS培養(yǎng)基成分
MS培養(yǎng)基是目前使用普遍的培養(yǎng)基，用于植物組織培養(yǎng)的基礎(chǔ)培養(yǎng)基。其具有較高的無機(jī)鹽濃度，能夠保證組織生長所需的礦質(zhì)營養(yǎng)還能加速愈傷組織的生長。ME培養(yǎng)基的成分MS培養(yǎng)基的無機(jī)養(yǎng)分的數(shù)量和比例比較合適，足以滿足植物細(xì)胞在營養(yǎng)上和生理上的需要。因此，一般情況下，不用再添加氨基酸、酪蛋白水解物、酵母提取物及椰子汁等有機(jī)附加成分。和其它培養(yǎng)基的基本成分相比，MS培養(yǎng)基中的硝酸鹽、鉀和銨的含量高，這是它的顯著特點(diǎn)。
2016
05-03

MS培養(yǎng)基與微生物培養(yǎng)基的區(qū)別有哪些
MS培養(yǎng)基是其特點(diǎn)是無機(jī)鹽和離子濃度較高，是較穩(wěn)定的離子平衡溶液，它的硝酸鹽含量高，其養(yǎng)分的數(shù)量和比例合適，能滿足植物細(xì)胞的營養(yǎng)和生理需要，因而適用范圍比較廣，多數(shù)植物組織培養(yǎng)快速繁殖用它作為培養(yǎng)基的基本培養(yǎng)基，也是目前使用普遍的植物組織培養(yǎng)基。MS培養(yǎng)基具有較高的無機(jī)鹽濃度，能夠保證組織生長所需的礦質(zhì)營養(yǎng)還能加速愈傷組織的生長。由于配方中的離子濃度高，在配制、貯存和消毒等過程中，即使有些成分略有出入，也不會影響離子間的平衡。由于植物的多樣性和生長環(huán)境MS培養(yǎng)基的配制植物組織培養(yǎng)基的復(fù)雜性和多變
2016
05-03

RNA酶的用途及破碎細(xì)胞和滅活RNA酶同步進(jìn)行的方法
RNA酶又名核糖核酸酶，為白色凍干粉末，可以殺滅許多腫瘤細(xì)胞系，可以抑制導(dǎo)致艾滋病的HIV-1病毒在細(xì)胞中的復(fù)制，可以治療乙肝。RNA酶用途說明：生化研究，測定核酸的結(jié)構(gòu)RNase保護(hù)檢測去除非特異結(jié)合的RNA分析RNA序列水解蛋白樣品中的RNA純化DNA此外，它具有顯著的細(xì)胞毒性，可以殺滅許多腫瘤細(xì)胞系，可以抑制導(dǎo)致艾滋病的HIV-1病毒在細(xì)胞中的復(fù)制，可以治療乙肝。破碎細(xì)胞和滅活RNA酶同步進(jìn)行的方法用強(qiáng)烈變性如鹽酸胍或硫氰酸胍溶液能迅速溶解蛋白質(zhì)，導(dǎo)致細(xì)胞結(jié)構(gòu)破碎，核蛋白由于其二級結(jié)構(gòu)的破
2016
05-03

常見的RNA酶抑制劑
RNA酶抑制劑具有廣譜的RNA酶抑制作用，包括中性的真核生物的RNA的抑制作用。?分子量是50kDa的蛋白質(zhì)通過非共價(jià)鍵與RNA酶以1：1的比例結(jié)合發(fā)揮它的抑制作用。RNA酶抑制劑與RNA酶結(jié)合的有效濃度時(shí)10-14M。而且，RNA酶抑制劑的動(dòng)力學(xué)結(jié)合是非常迅速的，確保與RNA酶的迅速絡(luò)合，并對其產(chǎn)生迅速的抑制作用。常見的RNA酶抑制劑1、焦碳酸二乙酯（DEPC）：是一種強(qiáng)烈但不*的RNA酶抑制劑，他通過和RNA酶的活性基因團(tuán)組氨酸的咪唑環(huán)結(jié)合使蛋白質(zhì)變性，從而抑制酶的活性。2、異硫氰酸胍：目前
2016
05-03

如何避免RNA酶的污染
RNA的化學(xué)性質(zhì)比DNA活躍得多。RNA分子上緊鄰磷酸二脂鍵的2′羥基基團(tuán)能直接被RNA酶利用來作為活性因子，從而使得RNA酶無需金屬離子就能發(fā)揮活性。由于RNA酶在環(huán)境中廣泛存在，特別是RNaseA，結(jié)構(gòu)極其穩(wěn)定，不能通過高溫高壓滅菌失活，因而極難消除，對保持RNA樣品的完整性構(gòu)成極大的威脅。由于RNaseA類酶依賴于活性位點(diǎn)處的組氨酸殘基起催化作用，因此能被組氨酸烷化劑DEPC所抑制。避免RNA酶的污染的方法：1．塑料制品：盡可能使用無菌、一次性塑料制品。已標(biāo)明RNase-free的塑料制品

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