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2022
05-11

細(xì)胞培養(yǎng)之~繁殖
培養(yǎng)細(xì)胞的生存環(huán)境是培養(yǎng)瓶、器皿或其他容器，生存空間及營養(yǎng)是有限的。當(dāng)細(xì)胞增殖到一定密度后，分離出一部分細(xì)胞和更新營養(yǎng)液，使細(xì)胞更好地生存，這一過程稱之為“傳代”(passage或subculture)。值得注意的是：每次傳代細(xì)胞在生長和增殖方面受到一定的影響。生命期指細(xì)胞在培養(yǎng)過程中持續(xù)增殖和生長的時間。一般根據(jù)細(xì)胞種類、性狀和原供體的年齡的情況而定。如：二倍體成纖維細(xì)胞，在不凍存和反復(fù)傳代條件下可傳30～50代，相當(dāng)于150～300個細(xì)胞增殖周期，能維持一年左右的生命，細(xì)胞便開始凋亡(apo
2022
05-10

如何減少和祛除細(xì)胞培養(yǎng)中產(chǎn)生的血清沉淀？
細(xì)胞培養(yǎng)中如何減少血清沉淀？1、正確的運輸溫度：運輸過程中，要嚴(yán)格-20℃低溫，避免反復(fù)凍融。2、使用正確的融化方法：在使用時，正確的解凍方法也很重要，這里推薦使用國際上通用的“三步法”解凍。需要注意的是，如果血清是儲存在-80℃冰箱中，正式解凍前應(yīng)先轉(zhuǎn)移至-20℃冰箱中過渡。一次解凍后，分裝至無菌離心管中，盡量保證每管是一次的用量，分裝管解凍也遵循三步法，解凍后需全部用完。3、使用正確的儲存方式：長期儲存在2-8℃或在室溫下放置時間過長，都會引起沉淀，建議配制好的*培養(yǎng)基在4℃冰箱中存放不要超
2022
05-10

我們該如何從血清檢測指標(biāo)評價優(yōu)質(zhì)血清？
牛血清是目前細(xì)胞培養(yǎng)中用量最大的天然培養(yǎng)基，含有豐富的、細(xì)胞生長必需的營養(yǎng)成分，具有極為重要的功能。要保證血清質(zhì)量，需要有嚴(yán)格的質(zhì)控，包括從外觀到理化性質(zhì)、細(xì)胞增殖試驗和微生物檢查，制定一系列的標(biāo)準(zhǔn)，以及出廠產(chǎn)品能符合這些標(biāo)準(zhǔn)。?外觀及相關(guān)物質(zhì)含量以胎牛血清為例，優(yōu)質(zhì)的特級胎牛血清，外觀應(yīng)是淡棕色至橙色透明液體，無顆粒物沉淀。PH在6.7-8.2之間；滲透壓在260-340mosm/kg之間；血紅蛋白含量小于20mg/dL；總蛋白含量在30-50g/L；白蛋白含量在14-34g/L；α、β、γ球
2022
05-09

細(xì)胞培養(yǎng)中血清沉淀對細(xì)胞有何影響？
如果血清中出現(xiàn)大量的沉淀物，血清將很難過濾。一般說來，因為在血清生產(chǎn)時最后已經(jīng)經(jīng)過100納米或者40納米的過濾處理，并且經(jīng)過了嚴(yán)格的無菌檢測，因此海克隆不推薦再過濾用于細(xì)胞培養(yǎng)的血清。在實驗室中沒有必要再過濾處理血清，在大規(guī)模的細(xì)胞培養(yǎng)中往往將血清直接加到培養(yǎng)基中一起過濾。磷酸鈣往往被誤認(rèn)為微生物污染而引起爭端。研究者可能會在血清中觀察到一些絮狀的沉淀，因此就會比較警覺的去做無菌試驗，將血清放在培養(yǎng)箱中培養(yǎng)幾天，結(jié)果可能會觀察到更多的絮狀沉淀，因此就斷定血清被污染了。血清沉淀會影響細(xì)胞生長嗎？一
2022
05-09

細(xì)胞培養(yǎng)中產(chǎn)生的血清沉淀是什么？它是怎么來的？
細(xì)胞培養(yǎng)過程中的血清沉淀在日常實驗過程中，一些同學(xué)或多或少都會遇到血清出現(xiàn)沉淀的情況。那么問題來了：血清中的沉淀是什么？這些沉淀是如何產(chǎn)生的？如果你也關(guān)心這些問題，那就跟著我們一起，來到今天的血清科普小課堂吧，幫你一篇理清血清沉淀的各種問題！一般來說，血清沉淀的成分可以簡單分為以下幾種：1、纖維蛋白：最常見的體積比較大的沉淀物，達(dá)1-2mm，肉眼可見。因為一些血清在收集和快速處理過程中，存在纖維蛋白原（可溶性的形成絮狀纖維蛋白的前體），處于溶解狀態(tài)，但經(jīng)過濾分裝后，就會在瓶中凝結(jié)出現(xiàn)纖維蛋白的沉
2022
05-07

常規(guī)細(xì)胞實驗大匯總~劃痕實驗
劃痕實驗：也叫創(chuàng)傷愈合實驗，是一種簡單快捷的測定細(xì)胞遷移運動與修復(fù)能力的方法。檢測原理：在體外培養(yǎng)條件下，在培養(yǎng)皿中的單層貼壁細(xì)胞上，用微量槍頭或其它無菌的硬物在細(xì)胞生長的中央?yún)^(qū)域劃線，用以去除中央部分的細(xì)胞，然后按照實驗設(shè)定的時間（36h、72h等），繼續(xù)培養(yǎng)細(xì)胞。取出細(xì)胞培養(yǎng)板，觀察周邊細(xì)胞是否生長至中央劃痕區(qū)，以此判斷細(xì)胞是否生長至中央劃痕區(qū)，進(jìn)而判斷細(xì)胞的生長遷移能力。實驗通常還需設(shè)定正常對照組和實驗組,實驗組往往是加了某種處理因素、藥物或外源性基因等，通過不同分組之間的細(xì)胞對于劃痕區(qū)的
2022
05-06

您想了解細(xì)胞培養(yǎng)攻略嗎？
什么是細(xì)胞傳代？細(xì)胞傳代培養(yǎng)（subculture），當(dāng)原代培養(yǎng)成功以后，隨著培養(yǎng)時間的延長和細(xì)胞不斷分裂，一則細(xì)胞之間相互接觸而發(fā)生接觸性抑制，生長速度減慢甚至停止；另一方面也會因營養(yǎng)物不足和代謝物積累而不利于生長或發(fā)生中毒。將培養(yǎng)物分割成小的部分，重新接種到另外的培養(yǎng)器皿（瓶）內(nèi)，再進(jìn)行培養(yǎng)的過程被稱之為細(xì)胞傳代培養(yǎng)。對單層培養(yǎng)而言，80%匯合或剛匯合的細(xì)胞是較理想的傳代階段。耗材準(zhǔn)備在實驗開始前，需要把實驗用品準(zhǔn)備齊全。酒精、預(yù)熱好的*培養(yǎng)基、PBS緩沖液、胰酶、培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿、移液器、移
2022
05-05

常規(guī)細(xì)胞實驗大匯總~細(xì)胞遷移和侵襲
Transwell：是一種用來研究細(xì)胞侵襲的實驗技術(shù)。檢測原理：簡單來說，就是用一層膜將高營養(yǎng)的培養(yǎng)基與低營養(yǎng)的培養(yǎng)基分隔開。然后將細(xì)胞放在低營養(yǎng)的培養(yǎng)基中，細(xì)胞為了生存，為了獲取更多的營養(yǎng)，會向高營養(yǎng)的培養(yǎng)基里面移動。但是由于膜的存在，因此必須要進(jìn)行穿膜。在膜上涂上一層基質(zhì)膠，用來模仿細(xì)胞外基質(zhì)。細(xì)胞想要通過膜，就需要先把基質(zhì)消化了才能進(jìn)入高營養(yǎng)培養(yǎng)基中。最終只需要檢測高營養(yǎng)的培養(yǎng)基中的細(xì)胞量就推算出細(xì)胞的侵襲能力。用途：由于商品化Transwell試劑盒的出現(xiàn)，使得濾膜多樣化，應(yīng)用不同孔徑和
2022
05-05

常規(guī)細(xì)胞實驗大匯總~細(xì)胞膜片鉗技術(shù)
細(xì)胞膜片鉗技術(shù)：膜片鉗技術(shù)（patchclamptechniques）是采用鉗制電壓或電流的方法對生物膜上離子通道的電活動進(jìn)行記錄的微電極技術(shù)。檢測原理：用一個尖duan直徑在1.5-3.0um的玻璃微電極接觸細(xì)胞膜表面，通過負(fù)壓吸引使電極尖duan與細(xì)胞膜之間形成千兆歐姆以上的阻抗封接，此時電極尖duan下的細(xì)胞膜小區(qū)域（膜片,patch）與其周圍在電學(xué)上分隔，在此基礎(chǔ)上固定（鉗制,Clamp）電位，對此膜片上的離子通道的離子電流進(jìn)行監(jiān)測及記錄。用途：細(xì)胞膜片鉗技術(shù)是當(dāng)前研究細(xì)胞膜電流及離子通
2022
04-29

你知道細(xì)胞培養(yǎng)操作過程有什么嗎？
注意無菌。無論哪一管液體，開蓋后盡量立即關(guān)上（如果有幾瓶都需要開的，也注意，可以虛蓋）。蓋子向上放。操作時不要從開蓋的容器上方經(jīng)過。另外，無菌臺面上擺放的各種東西，最好是一字?jǐn)[開，平行于自己。盡量不要前后重疊。細(xì)胞操作中所用的所有耗材試劑最好都是細(xì)胞培養(yǎng)專用。一般都以一次性耗材居多。1ML槍頭為加長型專用培養(yǎng)槍頭。移液管亦有專用10mL一次性無菌移液管（1）細(xì)胞換液：培養(yǎng)皿/瓶用槍頭或移液管吸去原培養(yǎng)液，加入新培養(yǎng)液。（2）細(xì)胞傳代：傳代之前先觀察，細(xì)胞是否密集，是否開始融合。一般融合達(dá)到70－
2022
04-29

細(xì)胞培養(yǎng)注意事項有哪些（基礎(chǔ)級）
總的原則：無菌操作、保證細(xì)胞培養(yǎng)環(huán)境的穩(wěn)定性按時間順序整理1、細(xì)胞房和生物安全柜（或超凈工作臺）先開紫外照射30min。作用：對環(huán)境滅菌（空氣）。（備注：如果著急，至少也要開15分鐘）在做實驗之前考慮好需要哪些物品。開始照射之前，將所需要用到的物品都放到生物安全柜（或超凈工作臺）里面。常用移液槍或電動移液器等，需要在工作臺上放置一套專用設(shè)備。細(xì)胞培養(yǎng)箱一般都已經(jīng)調(diào)整好。定期留意一下二氧化碳是否足夠。不夠及時更換。2、顯微鏡需要定期消毒酒精擦拭。注意：顯微鏡一般都放在細(xì)胞房。3、進(jìn)入實驗之前，首先
2022
04-28

常規(guī)細(xì)胞實驗大匯總~細(xì)胞凋亡實驗
在很多課題中，細(xì)胞實驗都是*的。除了之前我們介紹的細(xì)胞復(fù)蘇、傳代和凍存這“基礎(chǔ)三件套”之外，還有許多常見的操作，需要我們了解甚至是熟練掌握。磷脂酰絲氨酸外翻分析：又叫做AnnexinV法，常用來檢測細(xì)胞凋亡。檢測原理：磷脂酰絲氨酸(Phosphatidylserine,PS)正常位于細(xì)胞膜的內(nèi)側(cè)，但在細(xì)胞凋亡的早期，PS可從細(xì)胞膜的內(nèi)側(cè)翻轉(zhuǎn)到細(xì)胞膜的表面，暴露在細(xì)胞外環(huán)境中。Annexin-V是一種分子量為35~36KD的Ca2+依賴性磷脂結(jié)合蛋白，能與PS高親和力特異性結(jié)合。將Annexin-
2022
04-28

常規(guī)細(xì)胞實驗大匯總~細(xì)胞增殖實驗
在很多課題中，細(xì)胞實驗都是*的。除了之前我們介紹的細(xì)胞復(fù)蘇、傳代和凍存這“基礎(chǔ)三件套”之外，還有許多常見的操作，需要我們了解甚至是熟練掌握。今天我們就來盤點一下，那些助力高分文章發(fā)表的細(xì)胞實驗技術(shù)（第一期）。細(xì)胞增殖實驗MTT法：又稱MTT比色法，是一種檢測細(xì)胞存活和生長的方法。檢測原理：活細(xì)胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性MTT還原為水不溶性的藍(lán)紫色結(jié)晶甲臜（Formazan）并沉積在細(xì)胞中，而死細(xì)胞無此功能。二甲基亞砜（DMSO）能溶解細(xì)胞中的甲臜，用酶聯(lián)免疫檢測儀在490nm波長處測定其
2022
04-27

細(xì)胞凋亡檢測實驗
細(xì)胞膜是一選擇性的生物膜，一般的生物染料如PI等不能穿過質(zhì)膜。當(dāng)細(xì)胞壞死時，質(zhì)膜不完整，PI就進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)部，它可嵌入到DNA或RNA中，使壞死細(xì)胞著色，凋亡細(xì)胞和活細(xì)胞不著色。而一些活細(xì)胞染料由于為親脂性物質(zhì)，可跨膜進(jìn)入活細(xì)胞，因而可進(jìn)行活細(xì)胞染色。Hoechst33342是一種活性熒光染料且毒性較弱，它是雙苯并咪唑的一種衍生物。與DNA特異結(jié)合（主要結(jié)合于A-T）堿基區(qū)），顯示凋亡細(xì)胞和活細(xì)胞。凡是看到有凋亡小體的細(xì)胞都是凋亡細(xì)胞。一、試劑準(zhǔn)備1.三尖杉酯堿（HT）：300μg/ml；2.Tr
2022
04-27

細(xì)胞凍存和復(fù)蘇實驗
細(xì)胞凍存及復(fù)蘇的基本原則是慢凍快融，實驗證明這樣可以最大限度的保存細(xì)胞活力。目前細(xì)胞凍存多采用甘油或二甲基亞砜作保護(hù)劑，這兩種物質(zhì)能提高細(xì)胞膜對水的通透性，加上緩慢冷凍可使細(xì)胞內(nèi)的水分滲出細(xì)胞外，減少細(xì)胞內(nèi)冰晶的形成，從而減少由于冰晶形成造成的細(xì)胞損傷。復(fù)蘇細(xì)胞應(yīng)采用快速融化的方法，這樣可以保證細(xì)胞外結(jié)晶在很短的時間內(nèi)即融化，避免由于緩慢融化使水分滲入細(xì)胞內(nèi)形成胞內(nèi)再結(jié)晶對細(xì)胞造成損傷。一、材料準(zhǔn)備1.儀器：凈化工作臺、離心機(jī)、恒溫水浴箱、冰箱（4℃、-20℃、-70℃）、倒置相差顯微鏡、培養(yǎng)箱
2022
04-26

介紹排除雜細(xì)胞的方法
介紹排除雜細(xì)胞的方法：1、使用含肝素的培養(yǎng)液：在培養(yǎng)液中加入90U／ml的肝素，可使內(nèi)皮細(xì)胞純度提高；2、在相差顯微鏡下刮去明顯的雜細(xì)胞群。表皮細(xì)胞:來源：小兒包皮、全皮細(xì)胞不易與成纖維細(xì)胞混合生長區(qū)分。以膠原為底物；溫度低易生長；在培養(yǎng)基中加入氫化ke的松(10g/ml）；或10-6異丙腎上腺素；或10-10霍亂毒素；或10ng/ml表皮生長因子；上述任何一種物質(zhì)細(xì)胞易生長。巨噬細(xì)胞：特點：保持原有形態(tài)和吞噬物功能，易于分離不易建立傳代細(xì)胞系，生存2～3周無刺激：小鼠/只2～3?106個/只刺
2022
04-26

上皮細(xì)胞體外培養(yǎng)的特殊條件
上皮細(xì)胞體外培養(yǎng)的特殊條件(1)防范微生物污染：根據(jù)上皮組織分布的特性，位于體表或襯貼消化道、呼吸道內(nèi)等處的上皮組織，直接暴露或同外環(huán)境相接觸，組織本身帶有各種病原微生物或受其污染的機(jī)會較多。要求在組織取材時就嚴(yán)格滅菌；分離、種植、培養(yǎng)等諸多操作步驟上都要設(shè)法消除可能會出現(xiàn)的微生物污染。培養(yǎng)中所使用的各種液體，包括細(xì)胞保存液、分離液以及培養(yǎng)基等需添加抗生素，抗生素濃度比其它組織培養(yǎng)高。(2)生長基質(zhì)的支持：上皮細(xì)胞依賴貼附于某種支持物上才能生長，即所謂的貼壁依賴性細(xì)胞。在培養(yǎng)器皿表面包被生長基質(zhì)
2022
04-25

細(xì)胞培養(yǎng)所用的儀器和耗材
支原體檢測與祛除試劑通常情況下，細(xì)胞培養(yǎng)需要在嚴(yán)格的無菌條件下進(jìn)行，既包括無菌環(huán)境，也包括無菌操作。今天就“細(xì)胞培養(yǎng)過程中，環(huán)境的無菌控制”這一話題，給大家分享一些小技巧，希望可以給各位的實驗提供幫助。細(xì)胞培養(yǎng)所用的無菌室的結(jié)構(gòu)：一般由更衣間、緩沖間、操作間三部分組成。無菌室需進(jìn)行定期消毒和防污染處理：1、采用每日（使用前）紫外照射（1－2小時）。2、每周甲醛或過氧乙酸熏蒸（2小時），如果為了節(jié)省時間，也可以每周用新潔爾滅擦拭地面墻壁、桌面方式進(jìn)行消毒。另外，在實際操作過程中，還應(yīng)考慮無菌室建筑
2022
04-25

細(xì)胞培養(yǎng)環(huán)境的無菌控制~操作間及超凈工作臺
支原體檢測與祛除試劑通常情況下，細(xì)胞培養(yǎng)需要在嚴(yán)格的無菌條件下進(jìn)行，既包括無菌環(huán)境，也包括無菌操作。今天就“細(xì)胞培養(yǎng)過程中，環(huán)境的無菌控制”這一話題，給大家分享一些小技巧，希望可以給各位的實驗提供幫助。細(xì)胞培養(yǎng)所用的無菌室的結(jié)構(gòu)：一般由更衣間、緩沖間、操作間三部分組成。無菌室需進(jìn)行定期消毒和防污染處理：1、采用每日（使用前）紫外照射（1－2小時）。2、每周甲醛或過氧乙酸熏蒸（2小時），如果為了節(jié)省時間，也可以每周用新潔爾滅擦拭地面墻壁、桌面方式進(jìn)行消毒。另外，在實際操作過程中，還應(yīng)考慮無菌室建筑
2022
04-24

貼壁細(xì)胞傳代如何使用胰酶及如何控制胰酶消化時間
現(xiàn)代生物技術(shù)一般認(rèn)為包括基因工程技術(shù)、細(xì)胞工程技術(shù)、酶工程技術(shù)和發(fā)酵工程技術(shù)，而這些技術(shù)的發(fā)展幾乎都與細(xì)胞培養(yǎng)有密切關(guān)系，特別是在醫(yī)藥領(lǐng)域的發(fā)展，細(xì)胞培養(yǎng)更具有特殊的作用和價值。比如基因工程藥物或疫苗在研究生產(chǎn)過程中很多是通過細(xì)胞培養(yǎng)來實現(xiàn)的。基因工程乙肝疫苗很多是以CHO細(xì)胞作為載體；細(xì)胞工程中更是離不細(xì)胞培養(yǎng)，雜交瘤單克隆抗體，*是通過細(xì)胞培養(yǎng)來實現(xiàn)的，既使是現(xiàn)在飛速發(fā)展的基因工程抗體也離不開細(xì)胞培養(yǎng)。正在倍受重視的基因治療、體細(xì)胞治療也要經(jīng)過細(xì)胞培養(yǎng)過程才能實現(xiàn)，發(fā)酵工程和酶工程有的也與細(xì)

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