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2022
06-09

細(xì)胞復(fù)蘇的秘密武qi！
細(xì)胞培養(yǎng)是指細(xì)胞在體外的培養(yǎng)技術(shù)，即在無菌條件下，從機(jī)體中取出組織或細(xì)胞，模擬機(jī)體內(nèi)正常生理狀態(tài)下生存的基本條件，讓它在培養(yǎng)皿中繼續(xù)生存、生長(zhǎng)和繁殖的方法。通過細(xì)胞培養(yǎng)我們可以獲得大量的、性狀相同的細(xì)胞，以便于研究細(xì)胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)、化學(xué)組成及功能和機(jī)制。細(xì)胞真的很脆弱，就像小嬰兒一樣，需要你無微不至的關(guān)懷。細(xì)胞培養(yǎng)的開始，就是復(fù)蘇細(xì)胞。如何有條不紊地讓細(xì)胞從沉睡中蘇醒？今天就來給大家總結(jié)幾個(gè)實(shí)用小技巧，快點(diǎn)來get！細(xì)胞復(fù)蘇流程：1、將凍存的細(xì)胞從液氮罐中取出，立即放入37°C的水浴中進(jìn)行融化，輕
2022
06-08

科學(xué)閑談——干細(xì)胞研究的發(fā)展歷程
一、祖細(xì)胞假說的提出祖細(xì)胞假說的提出，可以追溯到光緒34年，也就是1908年，一位組織學(xué)家叫AlexanderA.Maximow提出了一個(gè)問題：我認(rèn)為人體的細(xì)胞都來源于同一個(gè)細(xì)胞！由于沒有明確的證據(jù)，所以人們雖然對(duì)這個(gè)假說很好奇，但是并沒有引起其他人太多的重視。二、干細(xì)胞的發(fā)現(xiàn)直到37年后的1945年。美國(guó)向日本扔了兩枚原子D。不僅炸得日本無條件投降，還炸出了“白血病。醫(yī)學(xué)家們開始投入到“白血病”的治療中。但來來去去也沒取得什么突破性進(jìn)展。這時(shí)有人想到了干細(xì)胞學(xué)說——雖然依舊沒啥有力的證據(jù)，但總
2022
06-08

細(xì)胞凍存的注意事項(xiàng)
1.為保持細(xì)胞存活率，一般都采用慢凍存融的方法。2.凍存物距液氮面越近溫度越低。標(biāo)準(zhǔn)的低凍速度為－1℃~12℃/分鐘，當(dāng)溫度下降達(dá)－25℃時(shí)，下降速度可增至－5~－10℃/分鐘，到－100℃時(shí)則可迅速凍入液氮中。因此要適當(dāng)掌握凍存物下降入液氮中的速度，過快能影響細(xì)胞內(nèi)水分透出，太慢則促冰晶形成。3.初次凍存者在下降凍存時(shí)，宜先用細(xì)木棒伸入罐中探測(cè)液面位置，然后需用溫度計(jì)與凍存物并行的辦法，以觀測(cè)下降凍存物的速度、凍存物與液氮液面距離和溫度三者關(guān)系，當(dāng)已掌握以上各參數(shù)和凍存技術(shù)熟練后，僅按下降時(shí)間
2022
06-07

細(xì)胞培養(yǎng)的小常識(shí)
每一個(gè)實(shí)驗(yàn)新手們剛進(jìn)實(shí)驗(yàn)室操作細(xì)胞，都是緊張興奮又手忙腳亂，就從最基本的養(yǎng)細(xì)胞來說，大家剛開始一定覺得理論知識(shí)看起來很容易，但是，在實(shí)際情況中一般是這樣的——“到底怎么回事，細(xì)胞長(zhǎng)不好/細(xì)胞又死了/又污染了......"這時(shí)，如果有一份靠譜的細(xì)胞培養(yǎng)經(jīng)驗(yàn)總結(jié)，或許可以幫助你少走彎路，今天就為大家分享一下由我們實(shí)驗(yàn)室總結(jié)的細(xì)胞培養(yǎng)過程中的知識(shí)總結(jié)，讓你事半功倍。首先，我們來看看，什么是細(xì)胞培養(yǎng)：細(xì)胞培養(yǎng)是指細(xì)胞在體外的培養(yǎng)技術(shù)，即在無菌條件下，從機(jī)體中取出組織或細(xì)胞，模擬機(jī)體內(nèi)正常生理狀態(tài)下生存的
2022
06-07

細(xì)胞培養(yǎng)的無菌環(huán)境-無菌室和超凈工作臺(tái)
一、無菌室無菌室的結(jié)構(gòu)：一般由更衣間、緩沖間、操作間三部分組成。無菌室的消毒和防污染：為保持無菌狀態(tài)，經(jīng)常消毒是必要的，通常采用每日（使用前）紫外照射（1－2小時(shí)），每周甲醛、乳酸、過氧乙酸熏蒸（2小時(shí)）和每月新潔爾滅擦拭地面和墻壁一次的方式進(jìn)行消毒。實(shí)際工作中，要根據(jù)無菌室建筑材料的差異來選擇合適的消毒方法。此外，還應(yīng)注意防止無菌室的污染。造成無菌室污染的可能包括：送入無菌室的風(fēng)沒有被過濾除菌；進(jìn)出無菌室時(shí)，能使外界空氣直接對(duì)流進(jìn)無菌室的操作間；等。二、超凈工作臺(tái)工作原理：鼓風(fēng)機(jī)驅(qū)動(dòng)空氣通過高
2022
06-07

細(xì)胞培養(yǎng)的一般過程有哪些？
一、準(zhǔn)備工作準(zhǔn)備工作對(duì)開展細(xì)胞培養(yǎng)異常重要，工作量也較大，應(yīng)給予足夠的重視，推備工作中某一環(huán)節(jié)的疏忽可導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)失敗或無法進(jìn)行。準(zhǔn)備工作的內(nèi)容包括器皿的清洗、干燥與消毒，培養(yǎng)基與其他試劑的配制、分裝及滅菌，無菌室或超凈臺(tái)的清潔與消毒，培養(yǎng)箱及其他儀器的檢查與調(diào)試。二、取材在無菌環(huán)境下從機(jī)體取出某種組織細(xì)胞（視實(shí)驗(yàn)?zāi)康亩ǎ?jīng)過一定的處理（如消化分散細(xì)胞、分離等）后接入培養(yǎng)器血中，這一過程稱為取材。如是細(xì)胞株的擴(kuò)大培養(yǎng)則無取材這一過程。機(jī)體取出的組織細(xì)胞的第一次培養(yǎng)稱為原代培養(yǎng)。理論上講各種動(dòng)物和
2022
06-06

細(xì)胞全生存過程中，大致都經(jīng)歷哪些階段
培養(yǎng)細(xì)胞生命期（LifeSpanofCultureCells）:所謂培養(yǎng)細(xì)胞生命期，是指細(xì)胞在培養(yǎng)中持續(xù)增殖和生長(zhǎng)的時(shí)間。體內(nèi)組織細(xì)胞的生存期與完整機(jī)體的死亡衰老基本相一致。人胚二倍體成纖維細(xì)胞培養(yǎng)，在不凍存和反復(fù)傳代條件下，可傳30～50代，相當(dāng)于150～300個(gè)細(xì)胞增殖周期，能維待一年左右的生存時(shí)間，最后衰老凋亡（Apoptosis）。如供體為成體或衰老個(gè)體，則生存時(shí)間較短；如培養(yǎng)的為其它細(xì)胞,如肝細(xì)胞或腎細(xì)胞，生存時(shí)間更短，僅能傳幾代或十幾代。只有當(dāng)細(xì)胞發(fā)生遺傳性改變，如獲永生性或惡性轉(zhuǎn)化
2022
06-06

體外培養(yǎng)細(xì)胞的分型
（一）貼附型：大多數(shù)培養(yǎng)細(xì)胞貼附生長(zhǎng)，屬于貼壁依賴性細(xì)胞，大致分成以下四型：1、成纖維細(xì)胞型：胞體呈梭型或不規(guī)則三角形，中央有卵圓形核，胞質(zhì)突起，生長(zhǎng)時(shí)呈放射狀。除真正的成纖維細(xì)胞外，凡由中胚層間充質(zhì)起源的組織，如心肌、平滑肌、成骨細(xì)胞、血管內(nèi)皮等常呈本型狀態(tài)。培養(yǎng)中細(xì)胞的形態(tài)與成纖維類似時(shí)皆可稱之為成纖維細(xì)胞。2、上皮型細(xì)胞：細(xì)胞呈扁平不規(guī)則多角形，中央有圓形核，細(xì)胞彼此緊密相連成單層膜。生長(zhǎng)時(shí)呈膜狀移動(dòng)，處于膜邊緣的細(xì)胞總與膜相連，很少單獨(dú)行動(dòng)。起源于內(nèi)、外胚層的細(xì)胞如皮膚表皮及其衍生物、消
2022
06-02

如何解決細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)的支原體污染？
細(xì)胞間發(fā)生支原體污染的風(fēng)險(xiǎn)較高，因?yàn)槿恕⒃噭⒓?xì)胞株都可攜帶支原體。下面，筆者從預(yù)防的角度，對(duì)降低支原體污染風(fēng)險(xiǎn)提供一些建議，供參考。1.預(yù)防人源攜帶的支原體1）應(yīng)帶帽子、口罩、手套、白大褂，應(yīng)預(yù)防個(gè)人攜帶的支原體飄散到空氣中，同時(shí)應(yīng)注意個(gè)人衛(wèi)生。2）在超凈臺(tái)上操作，必要時(shí)打開酒精燈。3）操作時(shí)盡量不說話。2.預(yù)防環(huán)境中的支原體可使用德國(guó)MB公司的支原體祛除噴霧MycoplasmaOff™或濕巾MycoplasmaOff™Wipe。該祛除劑中含有殺滅支原體的Mynox®成分。也能消除細(xì)菌、真菌和
2022
06-02

正確的使用及保存血清，才能使血清發(fā)揮應(yīng)有的作用
使用前處理：大部分血清在使用前必須滅活處理，即56℃30分鐘。滅活的目的是去除血清中的補(bǔ)體成分，避免補(bǔ)體對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生毒性作用。血清經(jīng)過滅活也會(huì)損失一些對(duì)細(xì)胞有利的成分，如生長(zhǎng)因子，因此也有人提出血清不經(jīng)滅活直接用于培養(yǎng)，這樣做的前提是確認(rèn)血清中不含補(bǔ)體成分。對(duì)于一些品質(zhì)高的胎牛血清和新牛血清可以考慮不經(jīng)滅活直接用于細(xì)胞培養(yǎng)。儲(chǔ)存條件：血清一般儲(chǔ)存于－20℃，同時(shí)應(yīng)避免反復(fù)凍融。購(gòu)買大包裝的血清后，首先要滅活處理，然后分裝成小包裝，儲(chǔ)存于－20℃，使用前融化。融化時(shí)最好現(xiàn)置于4℃。融化后的血清在4℃
2022
06-01

天然細(xì)胞培養(yǎng)基-血清
天然培養(yǎng)基是指來自動(dòng)物體液或利用組織分離提取的一類培養(yǎng)基，如血漿、血清、淋巴液、雞胚浸出液等。組織培養(yǎng)技術(shù)建立早期，體外培養(yǎng)細(xì)胞都是利用天然培養(yǎng)基。但是由于天然培養(yǎng)基制作過程復(fù)雜、批間差異大，因此逐漸為合成培養(yǎng)基所替代。目前廣泛使用的天然培養(yǎng)基是血清，另外各種組織提取液、促進(jìn)細(xì)胞貼壁的膠原類物質(zhì)在培養(yǎng)某些特殊細(xì)胞也是不可少。一、血清(serum)細(xì)胞培養(yǎng)的發(fā)展，培養(yǎng)基的質(zhì)量又是關(guān)鍵，而培養(yǎng)基的主要成份中動(dòng)物血清對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)繁殖發(fā)揮著重要甚至是難以替代的作用。在動(dòng)物血清的應(yīng)用中牛血清又是最為廣泛的
2022
06-01

干貨分享：細(xì)胞轉(zhuǎn)染全攻略(下)
細(xì)胞轉(zhuǎn)染方法對(duì)比，以及各類方法的優(yōu)缺點(diǎn)，我們都已介紹過了。今天來到細(xì)胞轉(zhuǎn)染——技巧篇，談?wù)勅绾尾拍苓M(jìn)行高效地轉(zhuǎn)染。轉(zhuǎn)染試劑的選擇不同細(xì)胞系轉(zhuǎn)染效率通常不同，但細(xì)胞系的選擇通常是根據(jù)實(shí)驗(yàn)的需要，因此在轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)前應(yīng)根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求和細(xì)胞特性選擇適合的轉(zhuǎn)染試劑。每種轉(zhuǎn)染試劑都會(huì)提供一些已經(jīng)成功轉(zhuǎn)染的細(xì)胞株列表和文獻(xiàn)，通過這些資料可選擇適合實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的轉(zhuǎn)染試劑。當(dāng)然，適合的是高效、低毒、方便、廉價(jià)的轉(zhuǎn)染試劑。細(xì)胞狀態(tài)一般低的細(xì)胞代數(shù)（細(xì)胞培養(yǎng)在實(shí)驗(yàn)室中保存數(shù)月和數(shù)年后會(huì)經(jīng)歷突變，總?cè)旧w重組或基因調(diào)控變化等而
2022
05-31

干貨分享：細(xì)胞轉(zhuǎn)染全攻略（中）
-優(yōu)質(zhì)血清助力細(xì)胞學(xué)實(shí)驗(yàn)-上期內(nèi)容里，我們介紹了細(xì)胞轉(zhuǎn)染的基本基本知識(shí)，包括概念、應(yīng)用場(chǎng)景以及各種方法之間的優(yōu)劣對(duì)比。本期內(nèi)容，進(jìn)一步為大家介紹常用的細(xì)胞轉(zhuǎn)染方法——實(shí)操篇。-細(xì)胞轉(zhuǎn)染常用方法-陽離子脂質(zhì)體介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染原理：陽離子脂質(zhì)體介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染是目前常用的轉(zhuǎn)染方式之一。陽離子脂質(zhì)的基本結(jié)構(gòu)由帶正電荷的頭基和一個(gè)或兩個(gè)烴鏈組成。帶正電荷的頭基與帶負(fù)電荷的核酸通過靜電作用形成復(fù)合物。經(jīng)細(xì)胞的內(nèi)吞作用進(jìn)入細(xì)胞。實(shí)驗(yàn)過程：將DNA，RNA，siRNA或寡核苷酸和轉(zhuǎn)染試劑分別在不同的管中稀釋→將兩者混合形
2022
05-31

細(xì)胞培養(yǎng)基的基本要求有哪些？
現(xiàn)代生物技術(shù)均通過細(xì)胞作為載體來進(jìn)行，無論是基因治療、干細(xì)胞、克隆技術(shù)都在細(xì)胞內(nèi)進(jìn)行的。細(xì)胞的生長(zhǎng)需要一定的營(yíng)養(yǎng)環(huán)境，用于維持細(xì)胞生長(zhǎng)的營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)稱為培養(yǎng)基，即指所有用于各種目的的體外培養(yǎng)、保存細(xì)胞用的物質(zhì)，就其本意上講為人工模擬體內(nèi)生長(zhǎng)的營(yíng)養(yǎng)環(huán)境，使細(xì)胞在此環(huán)境中有生長(zhǎng)和繁殖的能力。它是提供細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)和促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)增殖的物質(zhì)基礎(chǔ)。細(xì)胞培養(yǎng)基其組成成分主要有：水、氨基酸、維生素、碳水化合物、無機(jī)離子及其他一些入核酸降解物、激素等。體外培養(yǎng)的細(xì)胞直接生活在培養(yǎng)基中，因此培養(yǎng)基應(yīng)能滿足細(xì)胞對(duì)營(yíng)養(yǎng)成分、促
2022
05-30

實(shí)驗(yàn)室環(huán)境的消毒和滅菌
微生物污染是造成細(xì)胞培養(yǎng)失敗的主要原因那對(duì)于平時(shí)的實(shí)驗(yàn)室環(huán)境，我們?cè)撊绾蜗竞蜏缇兀?一)物理消毒法1、紫外線消毒:紫外線是一種低能量的電磁輻射，可殺死多種微生物。革蘭陰性菌尤為敏感，其次是陽性菌，再次為芽孢，真菌孢子的抵抗力強(qiáng)。紫外線的直接作用是通過破壞微生物的核酸及蛋白質(zhì)等而使其滅活，間接作用是通過紫外線照射產(chǎn)生的臭氧殺死微生物。直接照射培養(yǎng)室消毒，用法簡(jiǎn)單，效果好。紫外燈的消毒效果同紫外燈的輻射強(qiáng)度和照射劑量呈正相關(guān)，輻射強(qiáng)度隨燈距離增加而降低，照射劑量和照射時(shí)間呈正比。因此紫外燈同被照
2022
05-30

干貨分享：細(xì)胞轉(zhuǎn)染全攻略（上）
定義：細(xì)胞轉(zhuǎn)染是指將外源分子如DNA，RNA等導(dǎo)入真核細(xì)胞的技術(shù)。分類：按轉(zhuǎn)染途徑可分為：細(xì)胞轉(zhuǎn)染分為物理介導(dǎo)、化學(xué)介導(dǎo)和生物介導(dǎo)三類。按轉(zhuǎn)染結(jié)果可分為：瞬時(shí)轉(zhuǎn)染和穩(wěn)定轉(zhuǎn)染應(yīng)用：在研究基因功能、調(diào)控基因表達(dá)、突變分析和蛋白質(zhì)生產(chǎn)等生物學(xué)試驗(yàn)中。總結(jié)：轉(zhuǎn)染，是將外源性基因?qū)爰?xì)胞內(nèi)的一種專門技術(shù)。隨著基因與蛋白功能研究的深入，轉(zhuǎn)染目前已成為實(shí)驗(yàn)室工作中經(jīng)常涉及的基本方法。不同轉(zhuǎn)染途徑的比較1.物理介導(dǎo)：電穿孔法、顯微注射和基因槍屬于通過物理方法將基因?qū)爰?xì)胞的范例。2.化學(xué)介導(dǎo)：方法很多，如經(jīng)典的
2022
05-30

常用培養(yǎng)器皿及清洗消毒有哪些？
細(xì)胞培養(yǎng)需要大量消耗性物品，如玻璃器皿、金屬器皿、塑料、橡膠制品、布類、紙類等，因此掌握清洗、消毒知識(shí)，學(xué)會(huì)清洗、消毒方法是從事細(xì)胞培養(yǎng)工作必須的。一、清洗離體條件下，有害物質(zhì)直接同細(xì)胞接觸，細(xì)胞對(duì)任何有害物質(zhì)十分敏感，極少殘留物都可以對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生毒副作用。因此，新的或重新使用的器皿都必須認(rèn)真清洗，達(dá)到不含任何殘留物的要求。（一）玻璃器皿的清洗一般經(jīng)過浸泡、刷洗、浸酸、和清洗四個(gè)步驟。1、浸泡:新的或用過的玻璃器皿要先用清水浸泡，軟化和溶解附著物。新玻璃器皿使用前得先用自來水簡(jiǎn)單刷洗，然后用5％鹽
2022
05-30

細(xì)胞培養(yǎng)的無菌環(huán)境有哪些？
一、無菌室無菌室的結(jié)構(gòu)：一般由更衣間、緩沖間、操作間三部分組成。無菌室的消毒和防污染：為保持無菌狀態(tài)，經(jīng)常消毒是必要的，通常采用每日（使用前）紫外照射（1－2小時(shí)），每周甲醛、乳酸、過氧乙酸熏蒸（2小時(shí)）和每月新潔爾滅擦拭地面和墻壁一次的方式進(jìn)行消毒。實(shí)際工作中，要根據(jù)無菌室建筑材料的差異來選擇合適的消毒方法。此外，還應(yīng)注意防止無菌室的污染。造成無菌室污染的可能包括：送入無菌室的風(fēng)沒有被過濾除菌；進(jìn)出無菌室時(shí)，能使外界空氣直接對(duì)流進(jìn)無菌室的操作間；等。二、超凈工作臺(tái)工作原理：鼓風(fēng)機(jī)驅(qū)動(dòng)空氣通過高
2022
05-26

使用胎牛血清，這些你必須知道（一）
血清的儲(chǔ)存血清應(yīng)嚴(yán)格儲(chǔ)存在-20℃的環(huán)境中，避免反復(fù)凍融。解凍后或者配成*培養(yǎng)基后，儲(chǔ)存在4℃冰箱中，但也不宜儲(chǔ)存過久，一般要在7天內(nèi)用完，盡可能減少血清營(yíng)養(yǎng)成分的波動(dòng)。血清的解凍我們推薦大使用國(guó)際上通用的“三步法”融化血清，該方法可以盡可能減少血清沉淀的產(chǎn)生，能大程度地保留血清活性。血清的沉淀一般情況下，血清沉淀是不影響常規(guī)使用效果的，但是在一些比較ji端的情況下，比如細(xì)胞對(duì)血清中某些影響需求較高、血清或培養(yǎng)基需要過濾等情況，就需要注意血清的沉淀了。血清在細(xì)胞培養(yǎng)過程中的重要性不言而喻：提供對(duì)
2022
05-26

體外培養(yǎng)的概念
現(xiàn)代生物技術(shù)一般認(rèn)為包括基因工程技術(shù)、細(xì)胞工程技術(shù)、酶工程技術(shù)和發(fā)酵工程技術(shù)，而這些技術(shù)的發(fā)展幾乎都與細(xì)胞培養(yǎng)有密切關(guān)系，特別是在醫(yī)藥領(lǐng)域的發(fā)展，細(xì)胞培養(yǎng)更具有特殊的作用和價(jià)值。比如基因工程藥物或疫苗在研究生產(chǎn)過程中很多是通過細(xì)胞培養(yǎng)來實(shí)現(xiàn)的。基因工程乙肝疫苗很多是以CHO細(xì)胞作為載體；細(xì)胞工程中更是離不細(xì)胞培養(yǎng)，雜交瘤單克隆抗體，*是通過細(xì)胞培養(yǎng)來實(shí)現(xiàn)的，既使是現(xiàn)在飛速發(fā)展的基因工程抗體也離不開細(xì)胞培養(yǎng)。正在倍受重視的基因治療、體細(xì)胞治療也要經(jīng)過細(xì)胞培養(yǎng)過程才能實(shí)現(xiàn)，發(fā)酵工程和酶工程有的也與細(xì)

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