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2022
05-25

血清質量高低取決于哪兩方面因素？
血清的質量標準:血清質量高低取決于兩方面因素：一是取材對象，二是取材過程。用于取材的動物應健康無病并且在zhi定的出生天數之內，取材過程應嚴格按照操作規程執行，制備出的血清要經過嚴格的質量鑒定。WHO公布的《用動物細胞體外培養生產生物制品規程》中的要求：牛血清必須來自有文件證明無牛海綿狀腦病的牛群或國家。并應具備適當的監測系統。有些國家還要求牛血清來自未用過反芻動物蛋白飼料的牛群。證明所用牛血清中不含對所生產疫苗病毒的抑制物。血清要通過濾膜過濾除菌，無菌。無細菌、霉菌、支原體和病毒的污染，有些國
2022
05-24

原代細胞培養小技巧（二）
原代細胞培養是細胞實驗中較為重要的一環，同時該實驗也具有一定的難度，需要掌握一些小技巧，才能更快上手、更好操作、更不容易“翻車”，今天我們就來一起總結一下，原代細胞培養，都有哪些注意事項。常見的原代細胞類型上皮細胞、內皮細胞、成纖維細胞、角質形成細胞、黑色素細胞、神經元、星形膠質細胞、肝細胞、骨骼肌細胞、平滑肌細胞、成骨細胞、肌細胞、軟骨細胞、脂肪細胞、滑膜細胞、毛細胞、血細胞、干細胞。原代細胞的優缺點原代細胞VS細胞系能夠培養的細胞系，已經獲得了通過隨機突變或通過修飾（例如癌癥基因的人工表達）
2022
05-24

細胞培養技術簡述
細胞培養技術指的是細胞在體外條件下的生長，在培養的過程中細胞不再形成組織（動物）。培養物是單個細胞或細胞群。細胞在培養時都要生活在人工環境中，由于環境的改變，細胞的移動或受一些其他因素的影響，培養時間加長，傳代導致細胞出現單一化型。優點1.直接觀察活細胞的形態結構和生命活動。用于細胞學、遺傳學、免疫學、實驗醫學和腫瘤學等多種學科研究.2.直接觀察細胞的變化可便于攝影。3.研究細胞種類如低等到高等到人類、胚胎到成體、正常組織到腫瘤。4.便于使用各種技術：相差、熒光、電鏡、組化、同位素標記等方法觀察
2022
05-23

原代細胞培養小技巧
原代細胞培養也被稱為初代培養，是建立細胞系的第一步。原代細胞培養的應用廣泛：為研究生物體細胞的生長、代謝、繁殖提供有力的手段；為傳代培養創造條件；服務于臨床實踐，用于藥物篩選等。其步驟包括取材→分離→培養和維持。原代細胞培養需要一定的技巧，尤其是一些細節，不然很容易翻車，今天給大家匯總了一些原代細胞培養的小技巧，希望大家能有所收獲！取材取材是原代細胞培養過程中的第一步，也是至關重要。下表為一些常見組織的取材注意事項。分離一、組織塊培養法1、組織塊接種后的前3天，在觀察和移動的過程中，注意不要引起
2022
05-23

經驗分享-細胞培養的實驗室對支原體污染預防的幾種方法
支原體的污染肉眼不易察覺，直到嚴重的階段才會出現培養基變色、細胞異常等情況。支原體可造成細胞代謝改變，基因表達譜發生變化，從而嚴重干擾實驗進程。本文締一生物為您分析細胞培養的實驗室對支原體污染預防的幾種方法。因此，在細胞培養過程中，定期監測是否存在支原體污染，及時預防支原體污染是每個科研人員的工作之一。下面筆者給您推薦幾個支原體防控的產品，僅供參考。這些都是德國MinervaBiolabs公司出品，在國際期刊上也具有很高的引用率。一、環境中的支原體污染的預防和清除MycoplasmaOffTM是
2022
05-23

細胞培養之——污染篩查
你最好做到每天都去探望探望它們，看看他們的成長情況1、檢查培養液顏色與透明度的變化，顏色變黃，說明PH值下降;變紅或紫紅色，說明PH值上升，細胞生長停滯、死亡，一般生長穩定的細胞2-3天換液一次，生長緩慢的細胞可3-4天換液一次。2、觀察細胞生長狀態，細胞長滿瓶底的80%，應及時傳代。3、觀察細胞形態變化，細胞透明度大、折光性強、輪廓清晰為佳。4、注意微生物污染，常常出現培養液混濁，液體內漂菌絲或細胞菌，不僅僅指微生物，包括所有混入培養環境中的細胞生存有害的成分和造成細胞不純的異物及細胞。你培養
2022
05-20

大腸埃希氏菌O157：H7的發現和鑒別簡史
一、大腸埃希氏菌O157：H7的發現和傳播作為人類致病菌的大腸埃希氏菌O157：H7初發現于1982年，它可產生志賀毒素，并可存在健康家畜的糞便中，可污染食品、水而傳播給人。食品、乳品和果汁的不充分加熱以及未干凈洗手常導致O157：H7的傳染風險。一些水果未洗凈而壓榨果汁，果汁未高溫滅菌，也可導致O157：H7傳染的發生。有人發現，未加防腐劑的在冰箱存放的果汁中，O157：H7可存活20天以上，而加入0.1%的苯甲酸鈉可減少其存活時間至7天之內。O157：H7可導致出血性腸炎和溶血性尿毒癥綜合征
2022
05-19

胎牛血清的作用有哪些？
胎牛血清是目前比較熱門的一種產品，具有品質非常高的特點，對身體產生的危害比較小，可以給人體帶來的好處比較多，那么胎牛血清的作用有哪些?牛血清是細胞培養中用量最大的天然培養基，含有豐富的細胞生長必需的營養成分，常用于動物細胞的體外培養，具有極為重要的功能。1.提供對維持細胞指數生長的激素，基礎培養基中沒有或量很少的營養物，以及主要的低分子營養物。2.提供結合蛋白，能識別維生素、脂類、金屬和其他激素等，能結合或調變它們所結合的物質活力。3.有些情況下結合蛋白質能與有毒金屬和熱原質結合，起到解毒作用。
2022
05-19

PCR實驗室是否有較為便利的消毒方法呢？
考慮到PCR實驗室屬于感染高風險區域，對其進行日常的清潔消毒及終末消毒，都需要在嚴密的防護下進行，給保潔工作帶來極大不便，那目前是否有一些較為便利的消毒方法呢？其實有的。目前市場上經常能看到一些空間消毒機器人、空間消毒器這類的高科技產品，也有一些便攜式的消毒器可以非常方便的用于PCR實驗室的消毒。這些空間消毒器可以像機器人一樣使用無線平板進行操控，隨時啟停，消毒者在實驗室之外就可以完成整個消毒過程，避免了正常時間及突發狀況下，操作人員為關閉設備而暴露在過氧化氫氣霧中。另外，這類設備還會自帶推車，
2022
05-18

PCR實驗室的空氣流向管理與環境消毒？
前文提到，PCR實驗室可分為試劑準備區、標本制備區、擴增區和產物檢測區四個區域，這四個區域在物理空間上必須*相互獨立，各區域無論是在空間上還是在使用中，應當始終處于*的分隔狀態，不能有空氣的直接相通。所以，臨床基因擴增檢驗實驗室的空氣流向應按：試劑準備區→標本制備區→擴增區→產物檢測區，應時刻防止擴增產物順空氣氣流進入擴增前區域。可按照上述順序區域空氣壓力遞減的方式進行，也可通過安裝排風扇、負壓排風裝置或其他可行方式實現。臨床基因擴增檢驗實驗室的環境清潔：《臨床基因擴增實驗室工作規范》中有對物表
2022
05-18

防止實驗污染都有哪些措施？
PCR實驗的污染來源都有：樣本間交叉污染、實驗試劑污染、擴增產物污染防止實驗污染都有哪些措施？對于低流行地區，PCR檢測人員經過嚴格培訓上崗后，核酸污染的風險相對較小，但在疫區超負荷工作時，就可能會遇到核酸污染的問題，可通過以下措施降低污染機會：正確佩戴手套：手套未緊密貼合拇指、食指和中指，在進行開蓋操作時容易發生交叉污染。正確使用生物安全柜：簡單、整潔、避免通風口堵塞；操作前后紫外線照射，消毒劑隨手可及；廢液缸里有1/3體積的含氯消毒液，并且及時清理廢液缸，保證廢物不超過廢液缸體積的2/3。核
2022
05-17

PCR實驗的污染來源都有哪些？
PCR實驗的污染來源都有哪些？樣本間交叉污染：收集樣本的容器被污染或樣本密封不嚴導致外溢；不同樣本移液時忘記更換槍尖或未使用帶濾芯槍尖；移液器等實驗器具及耗材未及時消毒滅菌；不同樣本同時開蓋或樣本劇烈震蕩、反復吹吸導致氣溶膠形成擴散，相互交叉污染。實驗試劑污染：主要是在PCR組分試劑加樣過程中，由于移液器、容器、陰性對照及其它試劑被核酸模板或陽性對照污染。加樣過程中，因為PCR試劑對溫度十分敏感，需要通過冰浴使得PCR試劑和PCR板/管處于0℃，但這個過程也充滿污染風險。擴增產物污染：大量拷貝的
2022
05-17

細胞培養中“低調的高手”——馬血清
說起細胞培養用的血清，大多數人都會想到胎牛血清、新生牛血清，對于馬血清卻知之甚少。今天就給大家介紹一下血清中“低調的高手”——馬血清。一、馬血清作用細胞培養級的馬血清，經過多次過濾，去除了許多大分子蛋白，但保留了血清中促細胞生長的活性因子，表現出與胎牛血清和牛血清的類似的特性，因而能用于細胞培養。馬血清可以刺激成纖維細胞分化，以及細胞外基質(ECM)、細胞因子的合成。另外培養神經細胞和心肌細胞、誘導生成樹突狀細胞等實驗均可用馬血清替代胎牛血清。因此，馬血清通常適用于那些研究有絲分裂后，細胞關于生
2022
05-16

核酸法驗證中支原體標準品
什么是支原體核酸法支原體核酸法包括PCR和qPCR，通過檢測支原體的特異核酸序列，以確定細胞上清或生物制品中是否存在支原體污染的一種方法。由于支原體核酸法具有檢測時間短（只需3-4h）、操作便捷等特點，越來越受到生物制品企業的青睞。支原體核酸法可作為藥典規定的培養法或DNA染色法的替代方法，或與以上方法相互補充。事實上，早在2011年，就有動物疫苗廠家在2011年第5期的《廣東農業科學》上，報道了用德國MinervaBiolabs（簡稱MB）公司的支原體PCR試劑盒，用于檢測疫苗中是否存在支原體
2022
05-16

培養基滅菌方法
培養基的滅菌方法1、高壓蒸汽滅菌：高壓蒸汽滅菌適合于耐高溫培養基、接種器械和蒸餾水的滅菌。培養基在愛制備過程中混入各種雜菌，分裝后應立即滅菌，至少應在24h內完成滅菌工作。滅菌時一般是在0.105MPa壓力下，溫度121℃時，滅菌15~30min即可。消毒時間不宜過長，也不能超過規定的壓力范圍，否則有機物質特別是維生素類物質就會在高溫下分解，失去營養作用，也會使培養基變質、變色，甚至難以凝固。將蒸餾水或自來水裝在三角瓶中，裝水量一般不超過瓶的2/3，用牛皮紙或硫酸紙包扎封口，然后放入高壓鍋中滅菌
2022
05-13

活細胞觀察活性染料固定染色法
一.活細胞觀察鏡下觀察：細胞無色透明，倒置顯微鏡或相差顯微鏡觀察細胞形態結構：細胞膜和細胞質。生長狀態好:胞內無顆粒,不見空氣,胞膜清晰,上清液透明，無懸浮細胞和碎片。生長狀態不好：胞質出現空氣脂滴和顆粒狀物，細胞之間的空隙加大細胞形態不規則。1.活性染料：原理：能進入活細胞,一些無毒或毒性很小的染料,電性吸引而堆積在細胞中某些特定的結構從而顯色,不引起物理和化學變化,對細胞生命活動不會產生影響或影響很少。包括：中性紅、結晶紫、健那綠、次甲基藍、甲苯胺藍、亮焦油紫。特點：它們解離后帶正電荷，屬堿
2022
05-13

干細胞培養及胚胎干細胞的培養
干細胞(stemcells)是指來自胚胎、胎兒或成體未分化的具有無限或長期自我維持和自我更新能力的細胞。兩個基本性質：即能夠自我更新和能產生許多分化的后裔。根據組織來源不同，干細胞分為：1、胚胎干細胞(embryonicstemcell，ES)2、成體干細胞(adultstemcell，AS)。細胞在體外特定的培養條件下，能連續傳代，分化為外胚層、中胚層和內胚層多種譜系細胞，保持了正常細胞的核型和*的端粒酶活性。胚胎干細胞的培養：1、胚胎干細胞（ES）來自胚胎期桑椹胚的卵裂球或胚泡的內細胞團(i
2022
05-12

哪些情況下，要對血清內毒素應格外留意篩選
在細胞培養實驗中，血清無疑成為影響實驗成功與否的重要因素，而在眾多血清之中，牛血清是最為常用的。牛血清是細胞培養中用量最大的天然培養基，其中含有豐富的細胞生長所必須的營養成分，常用于動物細胞的體外培養，具有極為重要的功能。牛血清是一種成分復雜的混合物，而且血清的組成及含量通常隨供血動物的性別、年齡、生理條件和營養條件不同而存在差異。牛血清主要成分有蛋白質，多肽類，激素類，其他成分如氨基酸、葡萄糖、微量元素等。哪些情況下，要對血清內毒素應格外留意篩選1.養干細胞時，干細胞對內毒素非常敏感，如果血清
2022
05-12

鐵強化牛血清，讓細胞更強壯
鐵強化牛血清鐵是細胞增殖所必需的元素。如果沒有鐵，細胞就不能在增殖時從G1期進入到S期。缺鐵會導致細胞凋亡和死亡。因細胞生長過程中對鐵元素的特殊需求，鐵強化牛血清應運而生。鐵元素在細胞培養中的作用鐵元素對體外的培養的細胞至關重要，它作為一些酶的輔因子，參與了細胞的多種生理生化反應，主要有以下三個重要方面：“功能一參與細胞的呼吸代謝線粒體是細胞內氧化代謝的部位和供能核心，而線粒體功能的主要承擔者，是位于線粒體膜上的琥珀酸脫氫酶。鐵元素則是琥珀酸脫氫酶的重要組成成分，參與細胞的氧化代謝和能量生成。功
2022
05-11

一招教你如何消除環境中的支原體
細胞培養與支原體污染支原體對細胞培養會帶來嚴重的危害，同時，它的發生率較高，肉眼不易察覺。有報道，在細胞培養室中，它的平均發生率甚至可高達63%。在生物制品中，它的發生率為1%~3%。細胞培養中支原體的來源細胞培養過程中，污染細胞的支原體主要有5個方面的可能來源：環境被污染的細胞人體表面的攜帶（如口腔、鼻腔、皮膚等）實驗試劑，如培養基、胰酶等未*消毒的實驗器具其中，環境是造成支原體污染的一個主要原因。特別是多人培養細胞時共用同一培養箱、同一操作臺，即使其中一個人很注意，但如果其他實驗者給環境中帶

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